Методические указания МУК 4.1.1671-03 "Измерение массовых концентраций этил-4-(8-хлор-5,6-дигидро-11Н-бензо[5,6]циклогепта[1,2-б]пиридин-11-илид ен)-1-пиперидинкарбоната (лоратадин, кларитин, кларотадин) в воздухе рабочей зоны методом высокоэффективной жидкостной хроматографии" (утв. Главным государственным санитарным врачом РФ 29 июня 2003 г.)

Методические указания МУК 4.1.1671-03
"Измерение массовых концентраций этил-4-(8-хлор-5,6-дигидро-11Н-бензо[5,6]циклогепта[1,2-б]пиридин-11-илиден)-1-пиперидинкарбоната (лоратадин, кларитин, кларотадин) в воздухе рабочей зоны методом высокоэффективной жидкостной хроматографии"
(утв. Главным государственным санитарным врачом РФ 29 июня 2003 г.)

Дата введения: с момента утверждения

1. Область применения

Настоящие методические указания устанавливают количественный анализ воздуха рабочей зоны на содержание лоратадина методом высокоэффективной жидкостной хроматографии в диапазоне массовых концентраций 0,025-0,250 .

2. Характеристика вещества

2.1. Структурная формула.

2.2. Эмпирическая формула .

2.3. Молекулярная масса 382,87.

2.4. Регистрационный номер CAS 79794-75-5.

2.5. Физико-химические свойства.

Лоратадин - белый или почти белый кристаллический порошок. Температура плавления 133-135°С. Легкорастворим в метиловом и этиловом спиртах, растворим в пропиленгликоле, нерастворим в воде.

Агрегатное состояние в воздухе - аэрозоль.

2.6. Токсикологическая характеристика.

Лоратадин - блокатор -рецепторов гистамина второго поколения, широко применяется в клинической практике для лечения и предупреждения аллергических заболеваний, малоопасен при поступлении внутрь, не оказывает местно-раздражающего влияния, обладает выраженной кумулятивной активностью и общетоксическим действием.

Предельно допустимая концентрация (ПДК) лоратадина в воздухе рабочей зоны 0,05 ; класс опасности - первый.

3. Погрешность измерений

Методика обеспечивает выполнение измерений массовых концентраций лоратадина с погрешностью, не превышающей %, при доверительной вероятности 0,95.

4. Метод измерений

Измерения массовой концентрации лоратадина выполняют методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с применением УФ-детектора.

Измерение проводят при длине волны 254 нм.

Отбор проб проводят с концентрированием на фильтр.

Нижний предел измерения содержания лоратадина в хроматографируемом объеме пробы (10 ) - 0,10 мкг.

Нижний предел измерения массовой концентрации лоратадина в воздухе - 0,025 (при отборе 2 000 воздуха).

Метод специфичен в условиях производства таблеток лоратадина.

Определению не мешают крахмал картофельный, целлюлоза микрокристаллическая, лактоза, магний серноватисто-кислый.

5. Средства измерений, вспомогательные устройства, материалы, реактивы

При выполнении измерений применяют следующие средства измерений, вспомогательные устройства, материалы, реактивы.

5.1. Средства измерений, вспомогательные устройства, материалы

Хроматограф жидкостный высокого давления фирмы Шимадзу SPD-MSA PHOTO-DIODE ARRAV с УФ-детектором
Хроматографическая колонка, размером 150х4 мм, заполненная обращённо-фазовым сорбентом "KROMASILL " с размером частиц 5 мкм
Аспирационное устройство, ПУ-3Э/220 НПФ "НОРД-ЭКОЛОГИЯ ХИМАВТОМАТИКА"	ТУ ЕВКН 4.471.000
Весы лабораторные ВЛА-200	ГОСТ 24104-88Е

ГАРАНТ:

См. ГОСТ Р 53228-2008 "Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания", утвержденный приказом Ростехрегулирования от 25 декабря 2008 г. N 739-ст

Фильтры АФА-ХА-20 с фильтродержателем	ТУ 52-01-367-80
Фильтры типа "Миллипор" или "Владипор", диаметром пор 0,45 мкм,	ТУ 6-05-221-433-79
Фильтры бумажные обеззоленные "белая лента", диаметром 5,5 см	ТУ 6-09-1678-77
Колбы мерные, вместимостью 25, 50, 100, 1 000	ГОСТ 1770-74Е
Пипетки, вместимостью 1, 2, 5, 10	ГОСТ 29227-91
Пробирки мерные с пришлифованными пробками, вместимостью 10	ГОСТ 25336-82Е
Бюксы химические с пришлифованными крышками, вместимостью 25	ГОСТ 25336-82Е
Стаканы химические, вместимостью 25, 50, 100	ГОСТ 25336-82Е
Воронки химические, диаметром 30 мм	ГОСТ 25336-82
Палочки стеклянные	ГОСТ 25336-82Е
Баня ультразвуковая, фирмы "Шимадзу"
Цилиндры мерные, вместимостью 10, 500, 1 000	ГОСТ 25336-82Е
Секундомер	ГОСТ 5072-79
Лупа измерительная	ГОСТ 8309-75

ГАРАНТ:

Взамен ГОСТ 8309-75 постановлением Госстандарта СССР от 8 апреля 1993 г. N 1684 с 1 января 1984 г. введен в действие ГОСТ 25706-83

Линейка измерительная металлическая	ГОСТ 427-75
Дистиллятор	ТУ 61-1-721-79

5.2. Реактивы

Лоратадин с содержанием основного вещества не менее 99,0% в пересчете на сухое вещество, фирмы "Chemo Iberika S.A", Испания	НД 42-7958-97
Ацетонитрил, фирмы "Мерк" (ФРГ), для хроматографии
Трифторуксусная кислота	ТУ 6-09-3877-80
Спирт метиловый, хч	ГОСТ 6995-77
Вода дистиллированная	ГОСТ 6709-72

Допускается применение иных средств измерений, вспомогательных устройств, реактивов и материалов с техническими, метрологическими характеристиками и квалификацией, не хуже приведенных в данном разделе.

6. Требования безопасности

6.1. При работе с реактивами соблюдают требования безопасности, установленные для работ с токсичными, едкими и легковоспламеняющимися веществами по ГОСТ 12.1.005-88.

6.2. При проведении анализов горючих и вредных веществ должны соблюдаться меры противопожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004-91.

6.3. При выполнении измерений с использованием жидкостного хроматографа высокого давления соблюдают правила электробезопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.019-79 и инструкцией по эксплуатации прибора.

7. Требования к квалификации операторов

К выполнению измерений и обработке их результатов допускаются лица с высшим или средним специальным образованием, прошедшие обучение и имеющие навыки работы на жидкостном хроматографе высокого давления.

8. Условия измерения

8.1. Процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят в нормальных условиях при температуре воздуха ()°С, атмосферном давлении 84-106 kПа и относительной влажности воздуха не более 80%.

8.2. Выполнение измерений на жидкостном хроматографе высокого давления проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

9. Подготовка к выполнению измерений

Перед выполнением измерений проводят следующие работы: приготовление растворов, подготовка жидкостного хроматографа высокого давления, установление градуировочной характеристики, отбор проб.

9.1. Приготовление растворов

9.1.1. Основной стандартный раствор лоратадина с концентрацией 250 готовят растворением 0,0250 г вещества в растворителе в мерной колбе вместимостью 100 . Раствор помещают в ультразвуковую баню на 15 мин, перемешивают и хранят в течение суток в холодильнике.

9.1.2. Стандартный раствор лоратадина N 1 с концентрацией 100 готовят разбавлением 10 основного стандартного раствора растворителем в мерной колбе вместимостью 25 . Раствор применяют свежеприготовленным.

9.1.3. Стандартный раствор лоратадина N 2 с концентрацией 50 готовят разбавлением 25 стандартного раствора N 1 растворителем в мерной колбе вместимостью 50 . Раствор применяют свежеприготовленным.

9.1.4. Элюент - ацетонитрил - вода в соотношении 40:60 (по объему). Непосредственно перед измерением в мерную колбу вместимостью 1 000 помещают 400 ацетонитрила, прибавляют 600 дистиллированной воды и 1 трифторуксусной кислоты. Раствор перемешивают, фильтруют через фильтр типа "Миллипор" или "Владипор" и дегазируют пропусканием гелия в течение 15 мин.

9.1.5. Растворитель - метиловый спирт - элюент в соотношении 50:50 (по объёму). Непосредственно перед измерением в мерную колбу вместимостью 500 помещают 250 метилового спирта, прибавляют элюент до 500 и перемешивают. Затем раствор фильтруют с помощью фильтров типа "Миллипор" или "Владипор" и дегазируют пропусканием гелия в течение 15 мин.

9.2. Подготовка прибора

Подготовку к работе жидкостного хроматографа высокого давления проводят в соответствии с руководством по его эксплуатации.

9.3. Установление градуировочной характеристики

Градуировочную характеристику, выражающую зависимость величины площади пика (в приборных единицах) от массы лоратадина в хроматографируемом объеме раствора, устанавливают по методу абсолютной калибровки с использованием шести серий градуировочных растворов из пяти параллельных определений для каждой серии, согласно табл. 1.

Растворы применяют свежеприготовленными.

Таблица 1

Растворы для установления градуировочной характеристики при определении лоратадина

Номер стандарта	Стандартный раствор кларотадина N 1,	Стандартный раствор лоратадина N 2,	Растворитель,	Массовая концентрация лоратадина в градуировочном растворе,	Содержание лоратадина в хроматографируемом объёме раствора, мкг
1	0,0	0,0	5,0	0,0	0,0
2	0,0	1,0	4,0	10,0	0,1
3	1,0	0,0	4,0	20,0	0,2
4	2,0	0,0	3,0	40,0	0,4
5	2,5	0,0	2,5	50,0	0,5
6	4,0	0,0	1,0	80,0	0,8
7	5,0	0,0	0,0	100,0	1,0

Условия хроматографирования градуировочных смесей и анализируемых проб:

температура термостата колонки	40°С;
скорость подачи элюента	1,0 ;
длина волны УФ-детектора	254 нм;
скорость движения диаграммной ленты	4,25 мм/мин;
максимальный объем вводимой пробы	10 ;
время удерживания лоратадина	4 мин 5 с;
эффективность колонки не менее	1 000 т.т.

Проверку градуировочного графика проводят не реже 1 раза в месяц или в случае использования новой партии реактивов, оборудования и после ремонта прибора.

9.4. Отбор пробы воздуха

Воздух с объёмным расходом 200 аспирируют через фильтр АФА-ХА-20, помещенный в фильтродержатель. Для измерения 1/2 ПДК лоратадина следует отобрать 2 000 воздуха. Отобранные пробы могут храниться в течение трех суток в бюксах с пришлифованными крышками.

10. Выполнение измерения

Фильтр с отобранной пробой переносят в химический бюкс с пришлифованной крышкой вместимостью 25 , приливают 5 растворителя, помещают в ультразвуковую баню и оставляют на 15 мин. Затем фильтр тщательно отжимают и удаляют. Полученный раствор перемешивают, фильтруют на химической воронке через бумажный фильтр "белая лента" в пробирку с пришлифованной пробкой вместимостью 10 , доводят до 5 растворителем и помещают в ультразвуковую баню на 5 мин. Степень десорбции вещества с фильтра 98%.

Хроматографирование анализируемых растворов проб проводят в тех же условиях, что и при построении градуировочной характеристики.

Количественное определение содержания лоратадина (мкг) в хроматографируемом объеме раствора пробы проводят по предварительно построенному градуировочному графику.

Примечание. Фильтрование растворов анализируемых проб проводится для удаления нерастворимых в растворителе вспомогательных веществ, входящих в состав таблеток лоратадина.

11. Вычисление результатов измерений

Массовую концентрацию лоратадина (С, ) в воздухе вычисляют по формуле:

, где

а - содержание лоратадина в хроматографируемом объёме раствора, найденное по градуировочному графику, мкг;

в - общий объём раствора пробы, ;

б - хроматографируемый объем раствора пробы, ;

V - объём воздуха, отобранного для анализа () и приведенного к стандартным условиям (см. прилож. 1).

12. Оформление результатов анализа

Результат количественного анализа представляют в виде: , , Р = 0,95. Значение = 0,0022 + 0,21С, , где - характеристика погрешности.

13. Контроль погрешности методики КХА

Значения характеристики погрешности, норматива оперативного контроля погрешности и норматива оперативного контроля воспроизводимости приведены в табл. 2.

Таблица 2

Диапазон определяемых массовых концентраций лоратадина,	Наименование метрологической характеристики
	характеристика погрешности, , , Р = 0,95	норматив оперативного контроля погрешности, К, , (Р = 0,90, m = 3)	норматив оперативного контроля воспроизводимости, D, , (Р = 0,95, m = 2)
0,025-0,250	0,0022 + 0,21С	0,0031 + 0,26С	0,0086 + 0,37С

Метрологические характеристики приведены в виде зависимости от значения массовой концентрации анализируемого компонента в пробе - С.

13.1. Оперативный контроль погрешности

Оперативный контроль погрешности выполняют в одной серии с КХА рабочих проб.

Образцами для контроля являются реальные пробы воздуха рабочей зоны. Объем отобранной для контроля пробы должен соответствовать удвоенному объему, необходимому для проведения анализа по методике. После отбора пробы экстракт с фильтра делят на две равные части, первую из которых анализируют в точном соответствии с прописью методики и получают результат анализа исходной рабочей пробы - . Вторую часть разбавляют соответствующим растворителем в два раза и снова делят на две равные части, первую из которых анализируют в точном соответствии с прописью методики, получая результат анализа рабочей пробы, разбавленной в два раза, - . Во вторую часть делают добавку анализируемого компонента (X) до массовой концентрации исходной рабочей пробы () - общая концентрация не должна превышать верхнюю границу диапазона измерения - и анализируют в точном соответствии с прописью методики, получая результат анализа рабочей пробы, разбавленной в два раза, с добавкой - . Результаты анализа исходной рабочей пробы - , рабочей пробы, разбавленной в два раза, - и рабочей пробы, разбавленной в два раза, с добавкой - получают по возможности в одинаковых условиях, т.е. их получает один аналитик с использованием одного набора мерной посуды, одной партии реактивов и т.д.

Решение об удовлетворительной погрешности принимают при выполнении условия:

, где

- результат анализа рабочей пробы;

- результат анализа рабочей пробы, разбавленной в два раза;

- результат анализа рабочей пробы, разбавленной в два раза, с добавкой анализируемого компонента;

X - величина добавки анализируемого компонента;

К - норматив оперативного контроля погрешности

K = 0,0031 + 0,26С ().

13.2. Оперативный контроль воспроизводимости

Образцами для контроля являются реальные пробы воздуха рабочей зоны.

Объем отобранной для контроля пробы должен соответствовать удвоенному объему, необходимому для проведения анализа по методике. После отбора пробы экстракт с фильтра делят на две равные части и анализируют в точном соответствии с прописью методики, максимально варьируя условия проведения анализа, т.е. получают два результата анализа в разных лабораториях или в одной, используя при этом разные наборы мерной посуды, разные партии реактивов. Два результата анализа не должны отличаться друг от друга на величину допускаемых расхождений между результатами анализа:

, где

- результат анализа рабочей пробы;

- результат анализа этой же пробы, полученный в другой лаборатории или в этой же, но другим аналитиком с использованием другого набора мерной посуды и других партий реактивов;

D - допустимые расхождения между результатами анализа одной и той же пробы

D = 0,0086 + 0,37С ().

При превышении норматива оперативного контроля воспроизводимости эксперимент повторяют. При повторном превышении указанного норматива D выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам контроля, и устраняют их.

14. Нормы затрат времени на анализ

Для проведения серии анализов из 6 проб требуется 5 ч.

Главный государственный санитарный врач Российской Федерации, Первый заместитель Министра здравоохранения Российской Федерации

Г.Г. Онищенко