Государственный стандарт качества лекарственного средства. Фармакопейная статья ФС -42 "Вакцина против краснухи культуральная живая"

Государственный стандарт качества лекарственного средства
Фармакопейная статья ФС -42
"Вакцина против краснухи культуральная живая"

Вводится впервые

Вакцина против краснухи культуральная живая (лиофилизат для приготовления раствора для подкожного введения) представляет собой препарат, содержащий аттенуированный вакцинный штамм вируса краснухи RA 27/3. Вакцина приготовлена на диплоидных клетках человека МRC-5. Вакцину восстанавливают непосредственно перед применением. Восстановленный препарат представляет собой прозрачную жидкость, которая может быть окрашена вследствие присутствия рН индикатора.

Введение вакцины приводит к развитию специфического иммунитета, который обеспечивает защиту от заболевания краснухой. Вакцина предназначена для плановой и экстренной профилактики краснухи.

Производство.

Производство вакцины против краснухи культуральной живой основано на системе посевных вирусов и использовании в качестве субстрата для накопления вируса диплоидных клеток человека МRC-5.

Состав

Одна прививочная доза препарата (0,5 мл) содержит

- активный компонент: вирус краснухи - не менее 1000 (3,0 lg) тканевых цитопатогенных доз ();

- вспомогательные вещества: стабилизатор

Производственный штамм

- вируссодержащая жидкость, приготовленная путем пассирования вакцинного штамма вируса краснухи в производственном клеточном субстрате и применяемая для изготовления вакцины. Производственный штамм должен быть идентифицирован с помощью документов, которые должны включать сведения о происхождении штамма, методе аттенуации и уровне пассажа, на котором аттенуация была подтверждена результатами клинических испытаний.

С помощью клинических испытаний на восприимчивых к краснухе людях людях должно быть доказано, что штамм вируса краснухи, используемый в производстве вакцины, безопасен и иммуногенен.

Каждая новая серия производственного штамма должна быть специфична, бактериологически стерильна, не содержать микоплазм,* микобактерий и посторонних вирусов; обладать репродуктивной активностью, вызывать специфическую дегенерацию в чувствительных культурах клеток; не обладать аномальной токсичностью.

Примечание:

*Испытание на присутствие микоплазм производственного штамма, посевного вируса, производственного и рабочих банков клеточной культуры, сыворотки крупного рогатого скота должно проводиться двумя методами: цитохимическим и микробиологическим Испытание на присутствие микоплазм вирусных сборов, полуфабриката вакцины и готового продукта следует проводить одним микробиологическим методом.

Посевной вирус

- вируссодержащая жидкость, полученная путем одного - двух пассажей производственного штамма на производственном субстрате. Служит в качестве посевного материала для изготовления вакцины.

Посевной вирус должен обладать теми же характеристиками, что и производственный штамм, из которого он получен. Каждая серия посевного вируса должна быть идентифицирована как вирус краснухи с помощью соответствующих методов. Методы культивирования должны обеспечивать сохранение иммуногенных свойств готового препарата, его безопасность и предотвращать контаминацию посторонними вирусами, бактериями, грибами и микоплазмами.

Каждая новая серия производственного штамма и посевного вируса не должны обладать остаточной нейровирулентностью и контагизностью. Определяют в тесте на обезьянах по ОФС "Оценка специфической безопасности производственных штаммов вирусов кори, паротита и краснухи".

Пассажный уровень вируса в готовом препарате должен быть ограничен. Допускается пассирование производственного штамма и посевных вирусов в производственном субстрате с таким расчетом, чтобы готовая вакцина содержала вирус на том уровне пассажа, на котором ее безопасность и эффективность были подтверждены результатами клинических испытаний.

Особое внимание уделяют обеспечению стабильности таких параметров, как множественность заражения и условия культивирования (продолжительность и температура инкубации).

Рекомендуется хранить большой объем рабочей посевной серии в качестве материала для производства отдельных партий вакцины. Серии посевного вируса в лиофилизированном виде следует хранить при температуре ниже минус 20°С, а в нелиофилизированном виде - при температуре ниже минус 60°С.

Требования к специфической безопасности вакцины касаются не только отсутствия остаточной нейровирулентности, но также и наличия генетической стабильности производственного штамма и посевного вируса

Рекомендуется оценивать генетическую стабильность новых серий производственного штамма и серий посевного вируса краснухи. Сравнительный анализ секвенированных последовательностей генома вируса в указанных производственных материалах должен подтвердить их идентичность структуре вакцинного штамма.

Клеточный субстрат, используемый для производства.

Субстратом для размножения и накопления вируса краснухи являются диплоидные клетки человека МRC-5. Для производства вакцины предприятие должно использовать культуры диплоидных клеток человека, выращенные из аттестованного надлежащим образом банка рабочих клеток изготовителя (БРКИ) в соответствии с международными и национальными требованиями (ЕФ, 7изд, 2011 и ОФС "Требования к клеточным культурам - субстратам производства ИЛП").

Посевные клетки и банк рабочих клеток должны быть охарактеризованы с точки зрения генеалогии, ростовых свойств, генетических маркеров, жизнеспособности во время хранения. С помощью соответствующих тестов должно быть подтверждено, что клетки не содержат бактерий, грибов, микоплазм, а также гемадсорбирующих, гемагглютинирующих и других вирусов. Также должно быть доказано, что клетки диплоидны и стабильны.

Все работы с банком клеток и последующими клеточными культурами проводят в асептических условиях в зоне, в которой одновременно не проводится работа с другими клетками.

Питательная среда для клеток может содержать рН индикатор, например, феноловый красный.

При культивировании клеток не допускается использование нативной сыворотки крови человека, а также пенициллина и стрептомицина.

Материалы от животных, которые используют при производстве вакцины, получают от животных из хозяйств, благополучных в отношении бактериальных, вирусных, прионовых и других заболеваний, патогенных для человека. Сыворотка крови крупного рогатого скота должна быть получена от животных из стада, в котором, согласно выданному сертификату, отсутствуют такие заболевания, как спонгиформная энцефалопатия и лейкоз крупного рогатого скота. Трипсин, используемый для приготовления клеточной культуры, не должен содержать микоплазм, цирко- и парвовирусов свиней, также должен быть испытан на отсутствие контаминации бактериями и грибами.

Вещества, вносимые в препарат.

К веществам, вносимым в препарат, относят сыворотку крупного рогатого скота, которая используется для выращивания клеточной культуры. Сыворотка должна быть испытана на отсутствие контаминации вирусами, бактериями, грибами, микоплазмами.

Сыворотка крови животных должна быть удалена после инокуляции культур посевным вирусом. Перед сбором вируса культуру клеток отмывают, и ростовую среду заменяют бессывороточной поддерживающей средой. Остаточное количество белков сывороток крови животных (содержание бычьего сывороточного альбумина (БСА) строго регламентировано и контролируется на образце готового продукта или готовой вакцинной массы (жидкого полуфабриката) перед розливом в ампулы. Количество БСА не должно превышать 50 нг в одной прививочной дозе. Определение проводят иммунохимическим методом . Если готовая нерасфасованная вакцина выдерживает испытание на БСА, то оно может не проводиться на серии готового продукта.

Испытания на этапах производства.

В процессе производства проводят исследование на отсутствие контаминантов в культуральной жидкости, собранной с культур контрольных клеток, в образцах вируссодержащей жидкости. В готовом жидком полуфабрикате перед розливом контролируют содержание БСА, специфическую активность, стерильность, присутствие микоплазм.

Все исходные материалы и сырье, используемые при производстве, должны иметь сертификаты соответствия.

При производстве вакцины особое значение имеет постоянное выполнение на всех этапах производства внутрипроизводственного анализа основных показателей качества и анализа качества готового продукта при выпуске.

Испытания готового препарата.

Описание. Лиофилизат - однородная пористая масса свело-желтого цвета, возможен розоватый оттенок. Определяют визуально.

Подлинность. Препарат должен содержать вирус краснухи. Определяют в реакции нейтрализации на культуре клеток RK-13. Подлинность вируса краснухи в вакцине устанавливают на основании нейтрализации цитопатогенного действия вируса краснухи специфической иммунной сывороткой, используя аттестованный стандартный образец краснушных антител.

Время растворения. Препарат должен растворяться в течение 3 мин при внесении в ампулу воды для инъекций из расчета 0,5 мл на дозу. Определяют визуально.

Прозрачность, цветность. Восстановленный препарат - прозрачная жидкость от розового до розового с желтоватым оттенком цвета. Определяют визуально.

Механические включения. Восстановленный препарат не должен содержать видимых механических включений. Определяют по ОФС "Видимые механические включения в лекарственных формах для парэнтерального применения и в глазных лекарственных формах"

рН восстановленного раствора. От 7,0 до 8,0, если нет других указаний в частной фармакопейной статье. Определяют потенциометрическим методом с соответствии с ОФС "Ионометрия".

Потеря в массе при высушивании. Не более 2%. Определяют весовым методом по ОФС "Потеря в массе при высушивании".

Бычий сывороточный альбумин. Не более 50 нг в одной прививочной дозе. Определяют подходящим иммунохимическим методом в соответствии с частной фармакопейной статьей.. Если готовая нерасфасованная вакцина выдерживает испытание на бычий сывороточный альбумин, то оно может не проводиться на серии готового продукта.

Стерильность. Препарат не должен содержать бактерий и грибов. Определяют методом прямого посева или мембранной фильтрации с использованием одной тиогликолевой среды при двух температурных режимах по ОФС " Стерильность".

Присутствие микоплазм. Препарат не должен содержать микоплазм. Определяют микробиологическим методом, который описан в частной фармакопейной статье. Если в испытаниях на присутствие микоплазм сырья и материалов при входном контроле и на всех контрольных точках в технологическом процессе контаминация микоплазмами надлежащими методами не обнаружена, то испытание готовой серии препарата на присутствие микоплазм может не проводиться.

Аномальная токсичность. Препарат должен быть нетоксичным.

Испытание проводят биологическим методом на белых мышах и на морских свинках обоего пола. Животным вводят по одной прививочной дозе препарата в объеме 0,5 мл внутрибрюшинно, если нет других указаний в частной фармакопейной статье. Определение проводят по ОФС "Аномальная токсичность".

Специфическая активность. Прививочная доза (0,5 мл) должна содержать не менее 1000 (3,0 lg) вируса краснухи.Титр вируса определяют в каждой из 5 ампул каждой серии готового препарата раздельно по ЦПД вируса на культуре клеток RK-13. Каждый образец вакцины должен иметь специфическую активность не ниже регламентированной, в противном случае проводят повторный контроль специфической активности дополнительных 5 образцов, результат которого считают окончательным. Минимально регламентированное содержание вируса в прививочной дозе должно сохраняться в течение всего срока годности.

Одновременно с определением титра вируса в образцах серии проводят титрование стандартного образца (СО) активности вируса краснухи. Одну ампулу стандартного образца титруют три раза для подтверждения достоверности каждого количественного определения активности.

Учет результатов проводят по ЦПД с помощью инвертированного микроскопа (увеличение: объектив - окуляр ) в сроки, указанные в частной статье предприятия. Наибольшее разведение вакцины, вызывающее ЦПД в 50% лунок с зараженной клеточной культурой, принимают за титр вируса. Титр вируса в вакцине рассчитывают по методу Рида и Менча или Спирмена-Кербера.

При титровании вакцины в лунки планшетов вносят по 0,1 мл каждого разведения вакцины, т.е. объем, в 5 раз меньший, чем прививочная доза. Для расчета активности вируса в прививочной дозе к титру вируса, рассчитанному в lg /0,1мл, добавляют постоянную величину, равную lg 5, т.е. 0,7.

Критерии приемлемости результатов:

- доверительный интервал (Р=0,95) среднего значения титра СО, определенного при трехкратном титровании 1 ампулы, не должен превышать ; .

- титр вируса в СО не должен отличаться более, чем на от аттестационного значения;

Термостабильность. Препарат должен быть термостабильным. Испытание проводят, определяя специфическую активность при одновременном титровании 5 образцов вакцины, инкубированных при температуре °С в течение 7 сут, и 5 образцов вакцины, хранившихся при температуре от 2 до 8°С.

Препарат считают прошедшим испытание, если средняя геометрическая величина титра вируса в образцах после прогревания снижается не более, чем на 1 lg

Производственный штамм. Производственный штамм вируса краснухи готовят из вакцинного штамма RA 27/3. Штамм депонирован в Государственной коллекции вирусов ГУ НИИ вирусологии им. Д.И. Ивановского под N 2614.

Производственный штамм должен отвечать следующим требованиям:

- быть специфичным, обладать генетической стабильностью;

- иметь специфическую активность не ниже  мл;

- быть бактериологически стерильным, не содержать микоплазм, микобактерий и посторонних вирусов;

- обладать репродуктивной активностью: вызывать специфическую дегенерацию в чувствительных культурах клеток, сопровождающуюся накоплением вируса в питательной среде;

- не быть токсичным;

- не обладать нейровирулентностью при интрацеребральном введении обезьянам; отсутствие нейровирулентности подтверждается клиническими и патогистологическими данными;

- не быть контагиозным;

- должен храниться в лиофилизированном виде при температуре минус °С

- потеря в массе при высушивании должна быть не более 2%.

Маркировка и упаковка В соответствии с ОФС "Иммунобиологические лекарственные средства.

Дополнительная информация: субстрат культивирования вируса и предупредительные надписи: "Хранить при температуре от 2 до 8°С в недоступном для детей месте", "Избегать контакта вакцины с дезинфицирующими средствами".

Транспортирование При температуре от 2 до 8°С.

Хранение При температуре от 2 до 8°С.