Государственный стандарт качества лекарственного средства. Общая фармакопейная статья ОФС "Бифидосодержащие пробиотики для медицинского применения"

Государственный стандарт качества лекарственного средства
Общая фармакопейная статья ОФС
"Бифидосодержащие пробиотики для медицинского применения"

Вводится впервые

Данная общая фармакопейная статья распространяется на группу лекарственных средств - бифидосодержащие пробиотики для медицинского применения*.

Бифидосодержащие пробиотики содержат один или несколько видов живых бактерий рода Bifidobacterium, обладающих антагонистической активностью по отношению к широкому спектру патогенных и условно-патогенных бактерий, за счет продукции антибиотикоподобных веществ (бактериоцинов, микроцинов) и продуктов метаболизма (молочной, уксусной и других органических кислот).

Бифидосодержащие пробиотики по составу подразделяются:

- монокомпонентные - полученные, на основе одного производственного штамма бактерий рода Bifidobacterium (например, штаммы бактерий Bifidobacterium bifidum 1, 791, ЛВА-3, B.adolescentis МС-42);

- поликомпонентные - полученные на основе нескольких производственных штаммов бактерий, принадлежащих к разным видам рода Bifidobacterium, или различным родам, семействам (например, штаммы бактерий Bifidobacterium bifidum 1 и Escherichia coli M-17; B.longum BB-46 и Enterococcus faecium - Cernelle SF 68), дополняющие или потенцирующие друг друга по ферментативным свойствам, антагонистической активности, продукции биологически активных веществ, механизму действия или другим свойствам.

- сорбированные - пробиотики полученные на основе одного или нескольких штаммов микроорганизмов, сорбированных на частицах активированного угля, кремния диоксида коллоидного и других сорбентах (например, бактерии штамма Bifidobacterium bifidum 1, сорбированные на угле);

- комбинированные - пробиотики, в состав которых помимо одного или нескольких видов микроорганизмов входят активные компоненты иной природы (например, лизоцим, инулин, действующие вещества лекарственных растений, витамины, микроэлементы, гормоны и др.), оказывающие терапевтическое воздействие на организм человека (например, сочетание в препарате бактерий штамма Bifidobacterium bifidum 1 и лизоцим).

Производственные штаммы бифидобактерий

Штаммы рода Bifidobacterium, используемые для производства бифидосодержащих пробиотиков, депонируют в официальных коллекциях (табл.1).

Производственные штаммы рода Bifidobacterium проверяют по культуральным, тинкториальным, морфологическим и биохимическим свойствам, безопасности (in vitro и in vivo), на отсутствие контаминации (табл.2-3). Определение проводят в соответствии с ОФС "Производственные штаммы и штаммы для контроля" и "Безопасность пробиотиков, медицинского применения в тестах in vivo".

Таблица 1 - Производственные штаммы рода Bifidobacterium, используемые в производстве бифидосодержащих пробиотиков, зарегистрированных в РФ

Название производственного штамма рода Bifidobacterium	Место депонирования, N депозита
Bifidobacterium bifidum 1	- Государственная коллекция патогенных микроорганизмов, Россия (ГКПМ), коллекционный номер штамма N 900791 - Государственная коллекция микроорганизмов нормальной микрофлоры ФГУН МНИИЭМ им.Габричевского Роспотребнадзора N 79
Bifidobacterium bifidum 791	- ВНИИ Генетика Всероссийская коллекция промышленных микроорганизмов, номер депозита ЦМПМ N В-3300 - Государственная коллекция микроорганизмов нормальной микрофлоры ФГУН МНИИЭМ им.Габричевского Роспотребнадзора N 80
Bifidobacterium bifidum ЛВА-3	- ВНИИ Генетика Всероссийская коллекция промышленных микроорганизмов, номер депозита ЦМПМ N В-3299 - Государственная коллекция микроорганизмов нормальной микрофлоры ФГУН МНИИЭМ им.Габричевского Роспотребнадзора N 81
B.adolescentis МС-42	- ВНИИ Генетика Всероссийская коллекция промышленных микроорганизмов, номер депозита ЦМПМ N В-1987 - Государственная коллекция микроорганизмов нормальной микрофлоры ФГУН МНИИЭМ им.Габричевского Роспотребнадзора N 210
B.longum В379М	- ВНИИ Генетика Всероссийская коллекция промышленных микроорганизмов, номер депозита ЦМПМ N B-2000 - Государственная коллекция микроорганизмов нормальной микрофлоры ФГУН МНИИЭМ им.Габричевского Роспотребнадзора N 79
B.longum BB-46	- Chr.Hansen Culture Collection, Дания, номер депозита - 15958
B.longum DSM 20219 или АТСС 15707 типа Е194	- Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH DSM (Германская коллекция микроорганизмов и культур клеток), номер депозита - DSM 20219 - American Type Culture Collection (Американская коллекция типовых культур), номер депозита АТСС 15707 типа Е194 - ВНИИ Генетика Всероссийская коллекция промышленных микроорганизмов, номер депозита - АС 1665

Таблица 2 - Морфологические, тинкториальные и культуральные свойства производственных штаммов рода Bifidobacterium

Название штамма	Описание морфологических и культуральных свойств
B. bifidum 1	В мазках, окрашенных по Граму, должны быть грамположительные неподвижные палочки длиной от 4,0 до 5,0 мкм с утолщением на одном или двух концах или бифуркацией, располагающиеся в виде отдельных клеток или скоплений. Строгий анаэроб, в анаэробных условиях на поверхности среды МРС-5 через 72 ч инкубации при температуре °С образует круглые мелкие белые колонии; в полужидких средах: печеночной среде Блаурокка, казеиново-дрожжевой (КД-5), гидролизатно-молочной (ГМ), бактерии вырастают в виде рыхлой массы, оставляя прозрачной верхнюю часть среды (зона аэробиоза); отдельные колонии бифидобактерий при росте на печеночной среде Блаурокка имеют форму мелких "гвоздей" белого цвета, образующих при встряхивании крошковатую массу. Оптимальная температура роста бифидобактерий °С, фаза максимального накопления микробных клеток заканчивается к 44-48 ч. При посеве культуры, предварительно выращенной на печеночной среде Блаурокка или КД-5, в обезжиренное молоко в объеме 5-10% при инкубации в течение 72-96 ч штамм N1 вызывает только закисление молока (до 40-50°Т) без свертывания.
B. bifidum 791 и ЛВА-3	В мазках, окрашенных по Граму, должны быть грамположительные неподвижные палочки длиной от 4,0 до 5,0 мкм с утолщением на одном или двух концах или бифуркацией, располагающиеся в виде отдельных клеток или скоплений. Строгие анаэробы, в анаэробных условиях на поверхности среды МРС-5 через 56 ч инкубации при температуре °С образуют круглые мелкие белые колонии; в полужидких средах: печеночной среде Блаурокка, казеиново-дрожжевой (КД-5), гидролизатно-молочной (ГМ), бактерии вырастают в виде рыхлой массы, оставляя прозрачной верхнюю часть среды (зона аэробиоза); отдельные колонии бифидобактерий штамма B.bifidum ЛВА-3 при росте на печеночной среде Блаурокка имеют форму мелких "гвоздей" белого цвета, образующих при встряхивании крошковатую массу. Отдельные колонии бифидобактерий штамма B.bifidum 791 при росте на печеночной среде Блаурокка имеют форму "комет" белого цвета, образующих при встряхивании крошковатую массу. Оптимальная температура роста для обоих штаммов °С, фаза максимального накопления микробных клеток заканчивается к 16-24 ч. При посеве культуры каждого из штаммов, предварительно выращенных на печеночной среде Блаурокка или КД-5, в обезжиренное молоко в объеме 5-10% после инкубации в течение 24 ч происходит сквашивание молока с образованием сгустка.
B.adolescentis МС-42	В мазках, окрашенных по Граму, должны быть грамположительные неподвижные зернистые палочки прямые или изогнутые с утолщением или ветвлением на одном или двух концах длиной от 4,0 до 5,0 мкм, располагающиеся в виде отдельных клеток или скоплений. Строгий анаэроб, в анаэробных условиях на поверхности среды МРС-5 через 56 ч инкубации при температуре °С образует круглые мелкие белые колонии; в полужидких средах: печеночной среде Блаурокка, казеиново-дрожжевой (КД-5), гидролизатно-молочной (ГМ), бактерии вырастают в виде рыхлой массы, оставляя прозрачной верхнюю часть среды (зона аэробиоза); отдельные колонии бифидобактерий при росте на печеночной среде Блаурокка имеют форму мелких зерен" или "гвоздей" "белого цвета, образующих при встряхивании крошковатую массу. Оптимальная температура роста бифидобактерий °С, фаза максимального накопления микробных клеток заканчивается к 56-72 ч.
B.longum В379М	В мазках, окрашенных по Граму, должны быть грамположительные неподвижные полиморфные палочки с раздвоениями или булавовидными утолщениями на одном или двух концах длиной от 4,0 до 5,0 мкм, располагающиеся в виде отдельных клеток или скоплений. Строгий анаэроб, в анаэробных условиях на поверхности среды МРС-5 через 56 ч инкубации при температуре °С образует круглые мелкие белые колонии; в полужидких средах: печеночной среде Блаурокка, казеиново-дрожжевой (КД-5), гидролизатно-молочной (ГМ), бактерии вырастают в виде рыхлой массы, оставляя прозрачной верхнюю часть среды (зона аэробиоза); отдельные колонии бифидобактерий при росте на печеночной среде Блаурокка имеют шаровидную форму белого цвета, образующих при встряхивании крошковатую массу. Штамм хорошо растет в обезжиренном молоке, образуя равномерный сгусток через 18-20 часов инкубации при °С. Оптимальная температура роста бифидобактерий °С, фаза максимального накопления микробных клеток заканчивается к 16-20 ч.
B.longum BB-46	В мазках, окрашенных по Граму, должны быть грамположительные неподвижные слабо или сильно набухшие, иногда деформированные палочки от 4,0 до 5,0 мкм, располагающиеся в виде отдельных клеток или скоплений. Строгий анаэроб, в анаэробных условиях на поверхности среды МРС-5 через 48-56 ч инкубации при температуре °С образует круглые прозрачные, белые колонии 1 мм в диаметре. Оптимальная температура роста бифидобактерий °С.
B.longum DSM 20219	В мазках, окрашенных по Граму, должны быть грамположительные неподвижные слабо или сильно набухшие, иногда деформированные палочки от 4,0 до 5,0 мкм, располагающиеся в виде отдельных клеток или скоплений. Строгий анаэроб, в анаэробных условиях на поверхности среды МРС-5 через 48-56 ч инкубации при температуре °С образует круглые прозрачные, белые колонии 1 мм в диаметре. Оптимальная температура роста бифидобактерий °С.

Таблица 3 - Физиолого-биохимические свойства производственных штаммов рода Bifidobacterium

Свойства	Штаммы бактерий рода Bifidobacterium
	B. bifidum				B. adolescentis МС-42	B.longum В379М	B.longum BB-46 и DSM 20219
	1	791		ЛВА-3
Ферментирует без образования газа
- глюкозу	+	+		+	+	+	+
- лактозу	+	+		+	+	+	+
- мальтозу					+	+	+
- маннозу	-	-		-	+	+	+
- целлобиозу					слабо
- сахарозу	+	+		+	+ медленно	+	+
- арабинозу	-	-		-	-	-	-
- ксилозу	-	-		-	-	-	-
- инулин	-	-		-	-	-	-
- сорбит	-	-		-	-	-	-
- салицин	-	-		-	-	-	-
Оптимальная температура для роста °С	+	+		+	+	+	+
Разжижает
- желатин	-		-	-	-	-	-
Сквашивает молоко	-	+		+	+
Продуцирует каталазу	-	-		-	-	-	-
Гемолитическая активность	-	-		-	-	-	-
Адгезивная активность	+	+		+	+	+	+
Активность кислотообразования при культивировании в печеночной среде Блаурокка (°Т ) -	100	100		100	Не ниже 120	Не ниже 120	100
Антагонистическая активность (зоны задержки роста тест-штаммов в мм)	не менее 15	не менее 10		15	не менее 20	не менее 15	не менее 10

Таблица 4 - Изучение безвредности, вирулентности, токсичности и токсигенности штаммов рода Bifidobacterium

N штамма	Безвредность		Вирулентность		Токсичность		Токсигенность
	Вводимая доза КОЕ/ 0,5 мл)	Кол-во живых/ павших мышей	Вводимая доза КОЕ/ 0,5 мл)	Кол-во живых/ павших мышей	Вводимая доза (х КОЕ/мл)	Кол-во живых/ павших мышей	Вводимая доза (мл)	Кол-во живых/ павших мышей
B. bifidum 1, 791 и ЛВА-3	1	10/0	1	10/0	1	10/0	0,5	10/0
	5	10/0	5	10/0	5	10/0	1,0	10/0
	10	10/0	10	10/0	10	10/0
B.adolescentis МС-42	1	10/0	1	10/0	1	10/0	0,5	10/0
	5	10/0	5	10/0	5	10/0
	10	10/0	10	10/0	10	10/0	1,0	10/0
B.longum В379М	1	10/0	1	10/0	1	10/0	0,5	10/0
	5	10/0	5	10/0	5	10/0
	10	10/0	10	10/0	10	10/0	1,0	10/0
B.longum BB-46 и DSM 20219	1	10/0	1	10/0	1	10/0	0,5	10/0
	5	10/0	5	10/0	5	10/0	1,0	10/0
	10	10/0	10	10/0	10	10/0

Производство

Производство бифидосодержащих пробиотиков основано на выращивании/культивировании производственного штамма бактерий рода Bifidobacterium методом глубинного культивирования в оптимальной питательной среде и с соблюдением определенных технологических параметров, обеспечивающих оптимальные условия для накопления биомассы бифидобактерий и сохранения их пробиотических свойств; последующая стадия - лиофилизация в защитной среде.

При производстве бифидосодержащих пробиотиков проводят валидацию технологического процесса и методов контроля, которые в соответствии с принципами GMP, доказывают, что конкретная методика, процесс, оборудование, сырье, деятельность или система действительно приводят к ожидаемым и повторяемым результатам, и гарантируют, что лекарственное средство изготовлено в соответствии со своим составом, не содержит посторонних контаминантов, маркировано надлежащим образом, упаковано и сохраняет свои свойства в течение всего срока годности.

При производстве бифидосодержащих пробиотиков особое значение имеет постоянное выполнение на всех этапах производства внутрипроизводственного анализа основных показателей качества для оценки их воспроизводимости, анализа качества готовой продукции при выпуске и в течение всего срока хранения.

Бифидосодержащие пробиотики для медицинского применения выпускают в следующих лекарственных формах: лиофилизат во флаконе, порошки, капсулы, таблетки, суппозитории и порошки. Показатели качества лекарственного средства оценивают по соответствующей лекарственной форме (лиофилизат во флаконе, порошки, капсулы, таблетки, суппозитории и порошки).

Испытания

Показатели качества лекарственного средства лекарственной формы таблетки оценивают в соответствие с требованиями ОФС "Таблетки", "Капсулы", "Суппозитории" и "Порошки".

Описание. Приводится описание физических свойств соответствующей лекарственной формы лекарственного средства.

Подлинность. Подлинность подтверждают микроскопическим (окраской мазков по Граму), морфолого-культуральным (описание вида колоний выросших на адекватных питательных средах) и/или бактериологическим (подтверждается специфической активностью). Испытание проводят в соответствии с ОФС "Производственные штаммы и штаммы для контроля", если в частной фармакопейной статье не указаны другие требования.

Время растворения (для лиофилизатов и порошков). Указывают применяемый растворитель, его объем и, при необходимости, условия растворения (температуру растворителя, перемешивание, встряхивание) и время необходимое для растворения лекарственного препарата.

При проведении данного теста учитывают, что время растворения для лиофилизатов и порошков должно быть не более 5 мин.

Время распадаемости (для таблеток). Испытание проводят в соответствии с ОФС "Распадаемость таблеток и капсул".

Указывают применяемый растворитель, его объем и, при необходимости, условия растворения (температуру растворителя, перемешивание, встряхивание, использование водяной бани) и время необходимое для растворения лекарственного препарата.

При проведении теста следует учитывать время распадаемости: для таблеток не должно превышать 15 мин, для капсул - 30 мин, если в частной фармакопейной статье не указаны другие требования.

Температура плавления или Время полной деформации (для суппозиториев и мазей). Испытание проводят в соответствии с ОФС "Суппозитории".

Указывают применяемый растворитель, его объем, условия растворения (температуру растворителя, перемешивание, встряхивание, использование водяной бани).

При проведении теста "Температура плавления" или "Время полной деформации" учитывают, что время расплавления для суппозиториев и мазей должно быть не более 20 мин, если в частной фармакопейной статье не указаны другие требования.

рН (для лиофилизатов, порошков, капсул, таблеток). Испытание проводят потенциометрическим методом в соответствии с ОФС "Ионометрия". Указывается допустимый интервал значений рН. Следует указать растворитель и его объем).

Потеря в массе при высушивании. Определение проводят в соответствии с ОФС "Потеря в массе при высушивании".

Показатель потери в массе при высушивании должен составлять (если нет других указаний в частной фармакопейной статье) для:

- лиофилизатов - не более 3,5%;

- таблеток и капсул - не более 4,5%;

- порошков - не более 4,5%.

Средняя масса и отклонения от средней массы (для таблеток и порошков). Приводятся требования к средней массе и максимально допустимые отклонения от средней массы в соответствии с ОФС "Однородность массы дозированных лекарственных форм".

Специфическая безвредность. Определение проводят в соответствии с ОФС "Безопасность пробиотиков для медицинского применения". Указываются требования и критерии специфической безвредности; требования к животным, используемым для контроля; их количество; дозы, условия разведения и методы введения лекарственного средства; продолжительность наблюдения, учитываемые показатели. Лекарственное средство должен быть безвредным.

Отсутствие посторонних микроорганизмов и грибов. Определение посторонней контаминации испытуемого препарата проводят по методике приведенной ниже либо в соответствии с ОФС "Микробиологическая чистота".

Лиофилизированные лекарственные средства и порошки не должны содержать посторонних микроорганизмов.

В 1 таблетке (суппозитории) не допускается наличие энтеробактерий, протея, гемолитических бактерий, грибов и допускается не более 100 КОЕ бактерий сапрофитов, а для препарата применяемого детям до 3 лет - допускается не более 10 КОЕ бактерий сапрофитов.

В 1 капсуле не допускается наличие энтеробактерий, протея, гемолитических бактерий, грибов, а для препарата применяемого детям до 3 лет - допускается не более 10 КОЕ бактерий сапрофитов или детям с 3 лет - допускается не более 100 КОЕ бактерий сапрофитов.

Специфическая активность. Специфическая активность определяется количеством жизнеспособных бактерий в одной дозе лекарственного средства и активностью кислотообразования (или антагонистическая активность) ОФС "Специфическая активность пробиотиков для медицинского применения".

В одной дозе (таблетке, капсуле и т.д.) препарата должно содержаться (если нет других указаний в частной фармакопейной статье):

- бифидобактерий - не менее КОЕ

- Активность кислотообразования 100°Т .

Производственные штаммы и штаммы для контроля. Определение проводят в соответствии с ОФС "Производственные штаммы и штаммы для контроля".

В разделе должна содержаться информация:

1. Наименование производственных штаммов и штаммов для контроля, обоснование для включения в производство (депонирование в официальных коллекциях).

2. Производственные штаммы и штаммы для контроля должны быть проверены на отсутствие контаминации и соответствующим образом охарактеризованы по биологическим и биохимическим свойствам.

Упаковка и маркировка. В соответствии с ОФС "Иммунобиологические лекарственные средства".

Транспортирование и Хранение. Указывают условия транспортирования и хранения, обеспечивающие стабильность лекарственного средства. Пробиотики для медицинского применения транспортируются и хранятся при температуре от 2 до 8°С, если нет других указаний в частных фармакопейных статьях.

______________________________

* Далее по тексту "бифидосодержащие пробиотики для медицинского применения" будут называться "бифидосодержащие пробиотики"