Государственный стандарт качества лекарственного средства. Общая фармакопейная статья ОФС "Колисодержащие пробиотики для медицинского применения"

Государственный стандарт качества лекарственного средства
Общая фармакопейная статья ОФС
"Колисодержащие пробиотики для медицинского применения"

Вводится впервые

Данная общая фармакопейная статья распространяется на группу лекарственных средств - колисодержащие пробиотики для медицинского применения*.

Колисодержащие пробиотики представляют собой биомассу живых антагонистически активных штаммов кишечной палочки лиофильно высушенную в среде культивирования с добавлением защитной среды высушивания.

Колисодержащие пробиотики по составу подразделяются:

- монокомпонентные - полученные, на основе одного производственного штамма кишечной палочки (например, Escherichia coli M-17);

- поликомпонентные - полученные, на основе нескольких производственных штаммов бактерий, принадлежащих к разным родам, семействам (например, Escherichia coli M-17 и Bifidobacterium bifidum 1), дополняющие или потенцирующие друг друга по ферментативным свойствам, антагонистической активности, продукции биологически активных веществ, механизму действия или другим свойствам.

Производственный штамм бактерий Escherichia coli М-17

Штаммы бактерий Escherichia coli используемые для производства колисодержащих пробиотиков депонируют в официальных коллекциях (табл.1).

Таблица 1 - Производственные штаммы бактерий Escherichia coli, используемые в производстве колисодержащих пробиотиков, зарегистрированных в РФ

Название производственного штамма бактерий Escherichia coli	Место депонирования, N депозита
E. coli М-17	Государственная коллекция патогенных микроорганизмов, Россия (ГКПМ) N 100-2
E. coli Г-35-1/59	Государственная коллекция патогенных микроорганизмов, Россия (ГКПМ) N Г-35-1/59
E. coli Г-35-1/60	Государственная коллекция патогенных микроорганизмов, Россия (ГКПМ) N Г-35-1/59
E. coli Г-35-1/61	Государственная коллекция патогенных микроорганизмов, Россия (ГКПМ) N Г-35-1/59

Производственные штаммы бактерий Escherichia coli проверяют по культуральным, тинкториальным, морфологическим и биохимическим свойствам, безопасности (in vitro и in vivo), на отсутствие контаминации (табл.2-3). Определение проводят в соответствии с ОФС "Производственные штаммы и штаммы для контроля" и "Безопасность пробиотиков, медицинского применения в тестах in vivo".

Таблица 2 - Морфологические, тинкториальные и культуральные свойства производственных штаммов бактерий Escherichia coli

Название штамма	Описание морфологических и культуральных свойств
E.coli M-17	В мазках, окрашенных по Граму, должны быть подвижные грамотрицательные одиночные палочки закругленными концами длиной от 1,5 мкм до 4,0 мкм. Факультативный анаэроб, через ч инкубации при температуре °С на мясо-пептонном агаре образует круглые с ровными краями выпуклые колонии; на среде Эндо образует красные колонии с металлическим блеском; на мясо-пептонном бульоне через ч происходит равномерное помутнение среды. Оптимальная температура роста °С.
E. coli Г-35-1/59	В мазках, окрашенных по Граму, должны быть подвижные прямые грамотрицательные одиночные палочки закругленными концами длиной от 1,5 мкм до 4,0 мкм. Факультативный анаэроб, через ч инкубации при температуре °С на мясо-пептонном агаре образует круглые гладкие полупрозрачные слабовыпуклые колонии диаметром  мм с ровными краями; на среде Эндо образует красные колонии без металлического блеска; на мясо-пептонном бульоне через ч происходит равномерное помутнение среды. Оптимальная температура роста °С
E. coli Г-35-1/60	В мазках, окрашенных по Граму, должны быть подвижные прямые грамотрицательные одиночные палочки закругленными концами длиной от 1,5 мкм до 4,0 мкм. Факультативный анаэроб, через ч инкубации при температуре °С на мясо-пептонном агаре образует круглые гладкие полупрозрачные слабовыпуклые колонии диаметром  мм с ровными краями; на среде Эндо образует красные колонии с металлическим блеском; на мясо-пептонном бульоне через ч происходит равномерное помутнение среды. Оптимальная температура роста °С
E. coli Г-35-1/61	В мазках, окрашенных по Граму, должны быть подвижные прямые грамотрицательные одиночные палочки закругленными концами длиной от 1,5 мкм до 4,0 мкм. Факультативный анаэроб, через ч инкубации при температуре °С на мясо-пептонном агаре образует круглые гладкие полупрозрачные слабовыпуклые колонии диаметром  мм с ровными краями; на среде Эндо образует светло-красные колонии без металлического блеска; на мясо-пептонном бульоне через ч происходит равномерное помутнение среды. Оптимальная температура роста °С

Таблица 3 - Физиолого-биохимические свойства производственных штаммов бактерий Escherichia coli

Свойства	Штаммы бактерий рода Bacillus
	E.coli M-17			E. coli Г-35-1/59	E. coli Г-35-1/59	E. coli Г-35-1/59
Ферментация
- сорбит		+		+	+	+
- арабинозы		+		+	+	+
- лизин		+		+	+	+
- сахарозы		-		-	-	-
- инозита		-		-	-	-
Ферментирует с образованием кислоты и газа
- глюкозы	+			+	+	+
- лактозы	+			+	+	+
- мальтозы	+			+	+	+
- маннита	+			+	+	+
Образует
- индол	+			+	+	+
- сероводород	-			-	-	-
Разжижает
- желатин			-	-	-	-
Гидролизует мочевину	-			-	-	-
Гемолитическая активность	-			-	-	-
Адгезивная активность	+			+	+	+
Антагонистическая активность (зоны задержки роста тест-штаммов в мм)	не менее 10			не менее 10	не менее 10	не менее 10

Таблица 4 - Изучение безвредности, вирулентности, токсичности и токсигенности штаммов бактерий Escherichia coli

N штамма	Безвредность		Вирулентность		Токсичность		Токсигенность
	Вводимая доза живых E.coli х КОЕ/ 0,5 мл)	Кол-во живых/ павших мышей	Вводимая доза живых E.coli х КОЕ/ 0,5 мл)	Кол-во живых/ павших мышей	Вводимая доза инактивированных E/coli (х КОЕ/мл)	Кол-во живых/ павших мышей	Вводимая доза (мл)	Кол-во живых/ павших мышей
E.coli M-17	1	10/0	0,1	10/0	0,1	10/0	0,1	10/0
	5	10/0	0,5	5/5	0,5	5/5	0,5	10/0
	10	10/0	1	10/0	1	10/0
E. coli Г-35-1/59	1	10/0	0,1	10/0	0,1	10/0	0,1	10/0
	5	10/0	0,5	5/5	0,5	5/5
	10	10/0	1	10/0	1	10/0	0,5	10/0
E. coli Г-35-1/60	1	10/0	0,1	10/0	0,1	10/0	0,1	10/0
	5	10/0	0,5	5/5	0,5	5/5
	10	10/0	1	10/0	1	10/0	0,5	10/0
E. coli Г-35-1/51	1	10/0	0,1	10/0	0,1	10/0	0,1	10/0
	5	10/0	0,5	5/5	0,5	5/5	0,5	10/0
	10	10/0	1	10/0	1	10/0

Производство

Производство колисодержащих пробиотиков основано на выращивание/культивирование производственного штамма бактерий Escherichia coli на оптимальной питательной среде, в соответствующих условиях, методом глубинного культивирования с лиофилизацией в защитной среде.

При производстве колисодержащих пробиотиков проводят валидацию технологического процесса и методов контроля, которые в соответствии с принципами GMP, доказывают, что производственный процесс, оборудование, сырье, деятельность персонала, конкретная методика действительно приводят к ожидаемым результатам, и гарантируют, что лекарственное средство изготовлено в соответствии со своим составом, не содержит посторонних контаминантов и бактериофага, маркировано надлежащим образом, упаковано и сохраняет свои свойства в течение всего срока годности.

При производстве колисодержащих пробиотиков особое значение имеет постоянное выполнение на всех этапах производства внутрипроизводственного анализа основных показателей качества для оценки их воспроизводимости, анализа качества готовой продукции при выпуске и в течение всего срока хранения.

Колисодержащие пробиотики для медицинского применения выпускают в следующих лекарственных формах: лиофилизат во флаконе, таблетки, порошки. Показатели качества лекарственного средства оценивают по соответствующей лекарственной форме (лиофилизат во флаконе, таблетки и порошки).

Испытания

Показатели качества лекарственного средства лекарственной формы таблетки оценивают в соответствие с требованиями ОФС "Таблетки" и "Порошки".

Описание. Приводится описание физических свойств соответствующей лекарственной формы лекарственного средства.

Подлинность. Подлинность подтверждают микроскопическим (окраской мазков по Граму), морфолого-культуральным (описание вида колоний выросших на адекватных питательных средах) и/или бактериологическим (подтверждается специфической активностью) методом. Испытание проводят в соответствии с ОФС "Производственные штаммы и штаммы для контроля", если в частной фармакопейной статье не указаны другие требования.

Время растворения (для лиофилизатов и порошков). Указывают применяемый растворитель, его объем и, при необходимости, условия растворения (температуру растворителя, перемешивание, встряхивание) и время необходимое для растворения лекарственного препарата.

При проведении данного теста учитывают, что время растворения для лиофилизатов и порошков должно быть не более 5 мин.

Время распадаемости (для таблеток). Испытание проводят в соответствии с ОФС "Распадаемость таблеток и капсул".

Указывают применяемый растворитель, его объем и, при необходимости, условия растворения (температуру растворителя, перемешивание, встряхивание) и время необходимое для растворения лекарственного препарата.

При проведении теста следует учитывать время распадаемости: для таблеток не должно превышать 15 мин, для капсул - 30 мин, если в частной фармакопейной статье не указаны другие требования.

рН. Испытание проводят потенциометрическим методом в соответствии с ОФС "Ионометрия". Указывается допустимый интервал значений рН (в случае определения рН после растворения, следует указать растворитель и его объем).

Потеря в массе при высушивании. Определение проводят в соответствии с ОФС "Потеря в массе при высушивании".

Показатель потери в массе при высушивании должен составлять (если нет других указаний в частной фармакопейной статье) для:

- лиофилизатов - не более 3,5%;

- таблеток - не более 4,5%;

- порошков - не более 3,5%.

Средняя масса и отклонения от средней массы (для таблеток и порошков). Приводятся требования к средней массе и максимально допустимые отклонения от средней массы в соответствии с ОФС "Однородность массы дозированных лекарственных форм".

Специфическая безвредность. Определение проводят в соответствии с ОФС "Безопасность пробиотиков для медицинского применения". Указываются требования и критерии специфической безвредности; требования к животным, используемым для контроля; их количество; дозы, условия разведения и методы введения лекарственного средства; продолжительность наблюдения, учитываемые показатели. Лекарственное средство должен быть безвредным.

Отсутствие посторонних микроорганизмов и грибов. Определение посторонней контаминации испытуемого препарата проводят в соответствии с ОФС "Микробиологическая чистота", методом прямого посева.

Указывают используемые питательные среды, количество и объем испытуемого материала, условия инкубации и ее продолжительность, учет результатов.

Лекарственные средства (лиофилизат во флаконе и порошки) не должны содержать посторонних микроорганизмов. Допускается не более 10 колоний фага на чашке с МПА.

В 1 таблетке не допускается наличие энтеробактерий, протея, гемолитических бактерий, грибов и допускается не более 100 КОЕ бактерий сапрофитов.

Специфическая активность. Специфическая активность определяется количеством жизнеспособных бактерий в одной дозе лекарственного средства и антагонистической активностью по отношению к тест - штаммам. Определение проводят в соответствии с ОФС "Специфическая активность пробиотиков для медицинского применения".

В одной дозе препарата должно содержать не менее КОЕ.

Антагонистическая активность лекарственного средства в отношении штаммов патогенных и условно-патогенных микроорганизмов определяется методом отсроченного антагонизма на среде Гаузе N 2 или полусинтетической среде с дрожжевым диализатом по зонам задержки роста тест-штаммов.

Зоны задержки роста тест-штаммов условно-патогенных и патогенных бактерий и грибов рода Candida должны быть не менее 10 мм.

Производственные штаммы и штаммы для контроля. Определение проводят в соответствии с ОФС "Производственные штаммы и штаммы для контроля".

В разделе должна содержаться информация:

1. Наименование производственных штаммов и штаммов для контроля, обоснование для включения в производство (депонирование в официальных коллекциях).

2. Производственные штаммы и штаммы для контроля должны быть проверены на отсутствие контаминации и соответствующим образом охарактеризованы по биологическим и биохимическим свойствам.

Упаковка и маркировка. В соответствии с ОФС "Иммунобиологические лекарственные средства".

Транспортирование и Хранение. Указывают условия транспортирования и хранения, обеспечивающие стабильность лекарственного средства. Пробиотики для медицинского применения транспортируются и хранятся при температуре от 2 до 8°С, если нет других указаний в частных фармакопейных статьях.

_____________________________

* Далее по тексту "колисодержащие пробиотики для медицинского применения" будут называться "колисодержащие пробиотики"