Государственный стандарт качества лекарственного средства. Общая фармакопейная статья ОФС 42 "Определение нуклеиновых кислот по методу Спирина"

Государственный стандарт качества лекарственного средства
Общая фармакопейная статья ОФС 42
"Определение нуклеиновых кислот по методу Спирина"

Вводится взамен метода,
изложенного в ФС 42-3874-99

Метод предназначен для определения суммарного количества нуклеиновых кислот в иммунобиологических лекарственных средствах (ИБЛС). Определение количества нуклеиновых кислот проводится спектрофотометрическим методом после проведения кислотного гидролиза.

Метод основан на измерении разности показателей оптической плотности гидролизатов ИБЛС в ультрафиолетовой области спектра, характеризующей содержание фосфора нуклеиновых кислот. По результатам измерения оптической плотности растворов при 270 нм (максимум поглощения нуклеиновых кислот) и 290 нм (максимум поглощения примесей) определяется содержание нуклеиновых кислот.

Спектрофотометрический метод

К 1 мл испытуемого образца прибавляют 5 мл раствора 0,5 М раствора хлорной кислоты и перемешивают. Смесь нагревают на кипящей водяной бане в течение 20 мин. После охлаждения гидролизат центрифугируют в течение 20 мин при 2000 об/мин, отделяют осадок от надосадочной жидкости и измеряют оптическую плотность надосадочной жидкости в кювете с толщиной слоя 10 мм при 270 нм и 290 нм по сравнению с контрольным раствором, содержащим 1 мл воды и 5 мл 0,5 М раствора хлорной кислоты.

Содержание нуклеиновых кислот (Х) в микрограммах в 1 мл ИБЛС вычисляют по формуле:

, где

и - показания оптической плотности, полученные при соответствующих длинах волн;

0,19 - коэффициент удельной экстинкции нуклеиновых кислот (среднее значение разницы показаний оптической плотности , соответствующее содержанию 1 мкг фосфора нуклеиновых кислот фосфора в 1 мл испытуемого раствора);

10,3 - коэффициент пересчета количества фосфора на нуклеиновые кислоты в мкг/мл;

6 - разведение испытуемого образца.

Метод применим при выполнении условия: показания оптической плотности при и не должны отличаться более, чем на 15%.

Содержание нуклеиновых кислот в ИБЛС должно составлять от 15 до 35 мкг/мл.

Примечания

Испытуемый раствор. 1 мл испытуемого образца или, приготовленного, как указано в частной фармакопейной статье.

0,5 М раствор хлорной кислоты . В мерную колбу вместимостью 1 л вносят 47,8 мл 65% раствора хлорной кислоты с удельным весом 1,610, доводят объем раствора водой до метки и перемешивают. Раствор хранят в склянке с притертой пробкой при температуре от 18 до 25°С в течение 12 мес.