Государственный стандарт качества лекарственного средства. Фармакопейная статья ФС 42 "Вакцина оспенная эмбриональная живая"

Государственный стандарт качества лекарственного средства
Фармакопейная статья ФС 42
"Вакцина оспенная эмбриональная живая"

Вводится впервые

Вакцина оспенная эмбриональная живая, таблетки жевательные для орального применения представляет собой вирус вакцины, выращенный в хорионаллантоисной оболочке (ХАО) и плодике куриного эмбриона (КЭ) и высушенный со стабилизатором без консерванта. В таблетке содержится: вируссодержащий материал и вспомогательные вещества, разрешенные к применению.

Производство.

Характеристика материалов животного происхождения, используемого в производстве. В качестве продуцента для производства вакцины и посевного материала используют 12-суточные куриные эмбрионы пород "Леггорн", "Роменбраун", "Родонит", "Изобраун", "Русская белая", кросс 46, линия П4, П6. Яйца куриные инкубационные получают из птицехозяйств, свободных от вирусных и других заболеваний, патогенных для человека.

Требования к производственному штамму. Для производства вакцины оспенной эмбриональной живой используют штамм вируса вакцины БИЭМГ (Б-51). Для приготовления вакцины используется посевной вирус первых 10 пассажей.

Штамм должен отвечать следующим требованиям:

- формировать на ХАО КЭ два вида (специфических образований) оспин:

- не менее 80% белых, плотных оспин размером 1-5 мм ("белый" клон) и не более 20% сероватых расплывчатых поверхностных оспин размером 1-3 мм ("серый" клон);

- при культивировании на ХАО КЭ при °С в течение (42-48) ч вирус вакцины должен накапливаться в концентрации ООЕ/мл;

- не вызывать некроз кожи кроликов при внутрикожном введении в дозе 10^4 ООЕ в 0,1 мл;

- не вызывать гибели кроликов при внутримозговом введении в дозе 10^6 ООЕ в 0,1 мл;

- быть безвредным (нетоксичным) для морских свинок и белых мышей в дозах соответственно и  ООЕ /мл при подкожном введении. Производство вакцины оспенной эмбриональной живой должно проводиться в отдельных изолированных помещениях, в которых не допускается производство других лекарственных средств. Условия производства должны соответствовать требованиям Санитарных правил "Безопасность работы с микроорганизмами III-IV групп патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных болезней". Краткая схема производства: получение вируссодержащего материала путем введения посевного вируса на ХАО КЭ, инкубирование инфицированных эмбрионов, извлечение плодика и ХАО из эмбриона, гомогенизация материала, приготовление жидкой вакцины и добавление стабилизатора (пептона). Лиофильная сушка материала. Подготовка и расчет вспомогательных веществ для получения таблеток. Прессование таблеток.

Испытания.

Описание. Таблетки жевательные круглые двояковыпуклые с риской цельными краями диаметром 8-13 мм светло-коричневого цвета с запахом ванили. Определяют визуально. По внешнему виду таблетки должны соответствовать требованиям ОФС "Таблетки".

Подлинность. Вакцина должна вызывать на хорионаллантоисных оболочка 12-суточных куриных эмбрионов характерные специфические образования (оспины) двух видов: не менее 80% белых плотных оспин размером 1-5 мм ("белый" клон), не более 20% расплывчатых сероватых поверхностных оспин размером 1-3 мм ("серый клон"). Контроль проводят одновременно с определением специфической активности (см. раздел "Специфическая активность").

Средняя масса и отклонение от средней массы. Средняя масса таблеток от 0,2 до 1,0 г. Отклонение от средней массы: для таблеток массой 0,2 г и менее ; массой 0,3 г и более %.

Распадаемость. Таблетки должны распадаться в течение 1 ч. Определение проводят по ОФС "Распадаемость таблеток и капсул".

Потеря в массе при высушивании. Не более 3%. На 2 параллельных анализа используют не менее 7 таблеток. Определение проводят по ОФС "Определение потери в массе при высушивании".

Микробиологическая чистота. Допустимое количество в пересчете на 1 г таблеток:

- общее число аэробных бактерий - не более ;

- общее число грибов - не более ;

- должны отсутствовать Enterobacteriaceae, Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus.

Определение проводят по ОФС "Микробиологическая чистота". Масса исследуемых таблеток должна быть не менее 3 г. Таблетки в асептических условиях помещают в фарфоровую ступку с пестиком, растирают и суспендируют в стерильном фосфатно-цитратном буферном растворе (ФЦБ) рН 7,2 в соотношении 1:10 (1 г в 10 мл).

Примечание.

Приготовление фосфатно-цитратного буферного раствора Мак-Мльвейна 0,004 М, рН 7,2

Готовят растворы 1 и 2.

Раствор 1:

Вода для инъекций - 100 мл Кислота лимонная - 2,1 г

Раствор 2:

Натрий фосфорнокислый двузамещенный - 35,6 г

Вода для инъекций - 1000 мл

Смешивают 20 мл раствора 1 и 180 мл раствора 2 в мерной колбе вместимостью 1000 мл и доводят до метки водой, рН 7,2.

Стерилизуют при давлении  МПа, температуре °С в течение 25-30 мин или фильтрованием через мембраны с диаметром пор 0,22 мкм. Хранят при температуре от 2 до 8°С не более 10 дней.

Аномальная токсичность. Препарат должен быть нетоксичен для морских свинок массой 250-300 г и белых мышей массой 18-20 г при подкожном введении 1 и 1/25 прививочной дозы, соответственно. Испытания проводят по ОФС "Аномальная токсичность".

Для определения токсичности используют не менее 4 таблеток. Таблетки растирают в стерильной ступке и суспендируют в 0,9% стерильном растворе натрия хлорида из расчета 5 мл на таблетку. После отстаивания в течение 45-60 мин вводят 5 мл надосадочной жидкости (по 2,5 мл в каждый бок) двум морским свинкам и по 0,2 мл пяти беспородным белым мышам в холку. Наблюдение за животными проводят в течение 5 суток. В случае развития абсцесса или гибели хотя бы одного животного производят повторный анализ на удвоенном количестве животных. Если при повторном анализе вновь регистрируются вышеперечисленные явления, серию препарата бракуют. Определение проводят по ОФС.

Специфическая активность. Одна прививочная доза препарата должна содержать не менее и не более ООЕ вируса вакцины. Определение специфической активности. Испытание проводят на хорионаллантоисной оболочке 12-суточных куриных эмбрионах от кур породы "Леггорн", или "Роменбраун", или "Родонит-2", или "Изобраун", или "Хайсекс", или пород кур, эмбрионы которых чувствительны к вирусу вакцины. Объем выборки составляет не менее 7 прививочных доз (4 таблетки).

Примечание: Эмбрионы кур получают из хозяйств, свободных от вирусных и других возбудителей, патогенных для человека.

1. Подготовка куриных эмбрионов. Подготовку КЭ к заражению проводят в затемненной комнате. Каждый КЭ просматривают под овоскопом. Свет должен падать на тупой конец скорлупы КЭ. Погибшие эмбрионы или с кровоизлияниями под оболочкой бракуют. В центре воздушного мешка и на боковой поверхности скорлупы (на участке между сосудами) карандашом делают отметку. В отмеченных местах (бормашиной с абразивным диском или другим инструментом) делают отверстия (щели) длиной 3-4 мм и шириной 1,5 мм, не повреждая оболочку. Яйцо укладывают так, чтобы отверстие на боковой стороне было обращено вверх. В отверстие на боковой поверхности скорлупы вносят каплю стерильного ФЦБ, подогретого до °С. Из отверстия в центре воздушного мешка резиновой грушей осторожно отсасывают воздух до полного опускания ХАО. КЭ с опущенной ХАО помещают на лотки отверстием вверх и выдерживают 2 ч при температуре °С. Затем проводят овоскопию и бракуют КЭ, имеющие кровоизлияния, воздушные мешки под ХАО или неопущенную ХАО, и заклеивают отверстие в тупом конце скорлупы парафином.

2. Приготовление десятикратных разведений. Отобранные для анализа таблетки взвешивают с точностью до 0,001 г, растирают в фарфоровой ступке и добавляют стерильный ФЦБ из расчета 10 мл на 1 г таблеток (соотношение 1:10 - "исходное разведение пробы"). Дают отстояться грубым частицам в течение 45 мин. Из надосадочной жидкости пробы готовят два параллельных ряда последовательных десятикратных разведений. С этой целью отбирают по 0,5 мл пробы и вносят в две пробирки, содержащие 4,5 мл стерильного ФЦБ, получают разведение . Содержимое пробирок перемешивают с помощью пипеток не менее 30 раз. Из каждой пробирки с разведением по 0,5 мл разведенного материала пипеткой переносят в последующую пробирку с 4,5 мл ФЦБ, не касаясь жидкости пипеткой, получают разведение , и т.д. до разведения 10^(-5) меняя пипетки после каждого разведения.

Примечание: В используемый фосфатно-цитратный буферный раствор ФЦБ (см. раздел "Микробиологическая чистота) добавляют бензилпенициллин калия или натрия и стрептомицина сульфат из расчета 250 ед. активности каждого антибиотика в 1 мл ФЦБ.

3. Инфицирование КЭ. Для инфицирования КЭ используют разведения вакцины и предварительно объединенные из двух параллельных рядов. Каждое разведение материала вводят на ХАО 15 куриных эмбрионов по  мл в отверстие на боковой поверхности яйца. Круговым вращением яйца вирус равномерно распределяют по ХАО. Инокулированные эмбрионы инкубируют при температуре °C в течение 42 - 48 ч. По окончании инкубации КЭ вскрывают, изолируют ХАО, промывают её в воде, раскладывают на темном фоне и подсчитывают количество оспин на ХАО для каждого разведения. Из испытания исключают КЭ с поврежденной ХАО и погибшие.

4. Учет результатов. Вычисляют среднее арифметическое количество оспин на ХАО КЭ, инфицированных разведением вакцины, вызвавшим образование не менее 10 оспин (допускается расчет по максимальному разведению, содержащему не менее 80% таких КЭ).

Расчет специфической активности (А) проводят по формуле:

где:

A - специфическая активность, OOЕ;

10 - коэффициент исходного разведения пробы;

В - среднее арифметическое количество оспин на ХАО КЭ;

С - разведение исходной пробы;

d - объем инокулята, вводимого в КЭ;

е - количество таблеток (доз) в 1 г анализируемой пробы.

Для определения чувствительности КЭ к вирусу вакцины параллельно с определением специфической активности на той же партии КЭ проводят титрование отраслевого стандартного образца ОСО 42-28-113-** согласно инструкции по его применению. На каждое разведение используют 15 КЭ.

Если полученная величина специфической активности ОСО отличается от приведенной в свидетельстве, то вычисляют поправочный коэффициент чувствительности данной партии КЭ к вирусу вакцины по формуле:

где:

- - поправочный коэффициент;

- - специфическая активность ОСО по свидетельству, ООЕ/мл;

- - полученная специфическая активность ОСО, ООЕ/мл.

Результаты определения специфической активности испытуемой серии препарата умножают на поправочный коэффициент .

Маркировка и упаковка. В соответствии с ОФС "Иммунобиологические лекарственные препараты (средства)".

Транспортирование. При температуре от 2 до 8°С.

Хранение. В соответствии с ОФС "Иммунобиологические лекарственные препараты (средства)".