Государственный стандарт качества лекарственного средства. Общая фармакопейная статья ОФС 42 - "Определение общего азота с реактивом Несслера"

Государственный стандарт качества лекарственного средства
Общая фармакопейная статья ОФС 42 -
"Определение общего азота с реактивом Несслера"

Вводится взамен метода, изложенного в ФС 42-3874-99

Данный метод предназначен для определения общего азота в иммунобиологических лекарственных средствах (ИБЛС). Метод основан на свойстве реактива Несслера давать цветную реакцию с ионами аммония, образующимися после минерализации белковых продуктов. Для количественного определения содержания общего азота с реактивом Несслера используется колориметрический метод.

Колориметрический метод

В центрифужную пробирку вносят испытуемый образец (А) (таблица 1) прибавляют 0,1 мл кислоты серной концентрированной и перемешивают. Пробирку закрывают стеклянным колпачком и минерализуют на песочной бане при температуре 190 -210°С. Одновременно в аналогичных условиях минерализуют контрольную пробу, содержащую 0,1 мл кислоты серной концентрированной. Минерализацию продолжают до обесцвечивания содержимого пробирки не менее 10 ч. К минерализату прибавляют 9,9 мл воды и перемешивают.

В химическую пробирку вносят 0,5 или 1,0 мл минерализата (В) (Таблица 1), доводят объем раствора водой до 9,5 мл, перемешивают, прибавляют 0,5 мл реактива Несслера и вновь перемешивают. Измеряют оптическую плотность испытуемого и калибровочных растворов при 400 нм в кюветах с толщиной слоя 10 мм по сравнению с контрольным раствором, приготовленным аналогичным образом из контрольной пробы.

Построение калибровочного графика. В химические пробирки вносят 0,1; 0,2; 0,3; 0,4; 0,5 мл стандартного раствора N 2 (содержание азота 5; 10; 15; 20; 25 мкг), доводят объем растворов водой до 9,5 мл, перемешивают и далее анализ проводят, как указано выше. Строят калибровочный график, откладывая по оси абсцисс количество мкг общего азота, а по оси ординат - среднее значение оптической плотности.

Калибровочный график воспроизводится при каждом анализе.

Таблица 1 - Соотношение испытуемого образца и минерализата

Содержание общего азота в испытуемом образце (А), мг/мл	Объем минерализата (В), мл
0,050-0,080	1,0
0,080-0,200	1,0
0,200-0,400	0,5

Содержание общего азота (Х) в мг/мл вычисляют по формуле:

, где

а - количество азота, рассчитанное по калибровочному графику, мкг;

А - количество анализируемого образца, мл;

В - количество минерализата, мл;

1000 - перевод в мг;

10 - разведение минерализата, мл.

Содержание общего азота в иммунобиологических лекарственных средствах должно составлять от 0,1 до 1 мг/мл.

Примечания

Испытуемый раствор. 0,5 мл испытуемого образца приготовленного, как указано в частной фармакопейной статье.

Основной стандартный раствор сульфата аммония 0,1 мг/мл (раствор N 1). 0,2357 г (точная навеска) аммония сульфата (х. ч.), доведенного до постоянной массы в эксикаторе над безводным кальция хлоридом, растворяют в воде в мерной колбе вместимостью 500 мл, доводят объем раствора водой до метки и перемешивают. Раствор хранят при температуре 4 - 8 °С в колбе с притертой пробкой в течение 1 года.

Стандартный раствор сульфата аммония 0,05 мг/мл (раствор N 2). 50 мл раствора N 1 помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, доводят объем раствора водой до метки и перемешивают. Раствор хранят при температуре 4 - 8°С в колбе с притертой пробкой в течение 3 мес.