Государственный стандарт качества лекарственного средства. Фармакопейная статья "Анатоксин дифтерийно-столбнячный адсорбированный с уменьшенным содержанием антигенов (АДС-М-анатоксин)"

Государственный стандарт качества лекарственного средства
Фармакопейная статья
"Анатоксин дифтерийно-столбнячный адсорбированный с уменьшенным содержанием антигенов (АДС-М-анатоксин)"

Вводится впервые

Данная фармакопейная статья распространяется на иммунобиологическое лекарственное средство - Анатоксин дифтерийно-столбнячный адсорбированный с уменьшенным содержанием антигенов (АДС-М-анатоксин), который представляет собой обезвреженные формальдегидом и теплом дифтерийный и столбнячный токсины, очищенные и адсорбированные на алюминия гидроксиде или другом, разрешенном к применению, минеральном сорбенте. АДС-М-анатоксин предназначен для профилактики дифтерии и столбняка.

Производство

Столбнячный анатоксин. При производстве столбнячного анатоксина используют штаммы/штамм Clostridium tetani, полученные и депонированные в официальной коллекции. Микробные клетки культивируют на жидких питательных средах, обеспечивающих высокую продукцию столбнячного токсина. Методы культивирования должны гарантировать сохранение свойств штаммов и предотвращать их контаминацию. Токсинсодержащую культуральную жидкость, освобожденную от микробных клеток и продуктов их распада, проверяют на стерильность, рН и содержание токсина. Для производства столбнячного анатоксина используют культуральную среду с активностью токсина не менее 40 ЕС/Lf в 1 мл. Детоксикация столбнячного токсина должна обеспечивать сохранение антигенной активности анатоксина и гарантировать его безопасность: отсутствие остаточной токсичности и реверсии токсических свойств. Столбнячный анатоксин должен быть очищен от примесей, вызывающих побочные реакции при введении человеку.

Для производства АДС-М-анатоксина можно использовать только стерильный и безопасный столбнячный анатоксин с антигенной чистотой не менее 1000 ЕС (или Lf) на мг белкового азота.

Дифтерийный анатоксин. При производстве дифтерийного анатоксина используют токсигенный штамм Corynebacterium diphtheriae, полученный и депонированный в официальной коллекции. Микробные клетки культивируют на жидких питательных средах, обеспечивающих высокую продукцию дифтерийного токсина. Методы культивирования должны гарантировать сохранение свойств штамма и предотвращать его контаминацию. Токсинсодержащую культуральную жидкость, освобожденную от микробных клеток и продуктов их распада, проверяют на стерильность, рН и содержание токсина. Для производства дифтерийного анатоксина используют культуральную среду с активностью токсина не менее 80 Lf в 1 мл. Детоксикация дифтерийного токсина должна обеспечивать сохранение антигенной активности анатоксина и гарантировать его безопасность: отсутствие остаточной токсичности и реверсии токсических свойств. Для характеристики очищенного дифтерийного анатоксина определяют его рН, специфическую (антигенную) активность, содержание общего и белкового азота, антигенную чистоту (удельную активность). Дифтерийный анатоксин должен быть очищен от примесей, вызывающих побочные реакции при введении человеку.

Для производства АДС-М-анатоксина можно использовать только стерильный и безопасный дифтерийный анатоксин, содержащий не менее 1500 Lf на мг белкового азота.

Показатели, которые влияют на качество, но не могут быть определены в конечном продукте, должны быть проверены на промежуточных стадиях производства, что должно быть отражено в частной фармакопейной статье.

Прививочная доза АДС-М-анатоксина (0,5 мл) содержит 5 Lf дифтерийного и 5 Lf/ЕС столбнячного анатоксинов. В состав лекарственного средства может входить консервант.

Испытания

Описание

Описание. Мутная жидкость белого или белого с сероватым оттенком цвета. При отстаивании разделяется на рыхлый осадок белого или белого с сероватым оттенком цвета, легко разбивающийся при встряхивании, и прозрачную надосадочную жидкость. Видимые механические включения должны отсутствовать. Наблюдение проводят в проходящем свете.

Подлинность. Должен обладать специфической (иммуногенной) активностью, обеспечивая защиту от действия дифтерийного и столбнячного токсинов. (См. раздел "Специфическая активность"). В частных фармакопейных статьях могут быть указаны альтернативные методы, подтверждающие наличие в лекарственном средстве дифтерийного и столбнячного анатоксинов, обладающих антигенной активностью.

Механические включения. Видимые механические включения должны отсутствовать. Определение проводят в соответствии с ОФС "Видимые механические включения в лекарственных формах для парентерального применения и глазных лекарственных формах".

рН. От 6,4 до 7,3, если нет других указаний в частной фармакопейной статье. Испытания проводят потенциометрическим методом с неразведенным АДС-М-анатоксином в соответствии с ОФС "Ионометрия".

Стерильность. Должен быть стерильным. Испытания проводят методами прямого посева или мембранной фильтрации в соответствии с ОФС "Стерильность".

Аномальная токсичность. Должен быть нетоксичным. Испытания проводят в соответствии с ОФС "Аномальная токсичность". Белым мышам массой тела 14 - 16 г препарат вводят внутрибрюшинно по 1 мл, морским свинкам массой тела 250-350 г - подкожно по 5,0 мл (по 2,5 мл в оба бока). За животными наблюдают 7 суток. В течение указанного времени не должно наблюдаться гибели животных и потери массы тела.

Специфическая безопасность. Должен быть безопасным при подкожном введении 5 морским свинкам массой  г 10 прививочных доз для человека (по 5 доз в бок и лапку). Через 30 дней все животные должны остаться живыми без симптомов столбняка и потери массы тела.

Специфическая (иммуногенная) активность. Должен обладать иммуногенной активностью, обеспечивая выживаемость 100% иммунизированных животных при заражении летальной дозой дифтерийного токсина и не менее 70% иммунизированных животных при заражении летальной дозой столбнячного токсина.

Материалы и животные:

- дифтерийный токсин с предварительно установленной дозой DLM (минимальная доза токсина, вызывающая гибель животных в течение 4 сут).

- столбнячный токсин с предварительно установленной дозой Dlm

- морские свинки массой тела  г

- мыши белые беспородные массой тела 14-16 г

Испытание иммуногенности дифтерийного компонента.

Неразведенный препарат вводят четырем морским свинкам массой  г однократно под кожу бока в дозе 0,6 мл, что соответствует Lf дифтерийного анатоксина. Через 30 сут определяют резистентность иммунизированных свинок к дифтерийному токсину, который вводят животным в дозе не менее 100 Dlm подкожно в бок в объеме 1 мл. За животными наблюдают 4 сут, в течение которых все морские свинки должны остаться живыми. Испытание сопровождают контролем 1 Dlm дифтерийного токсина на трех морских свинках из той же партии. Контрольные животные (не менее 2) должны погибнуть в течение 4 сут.

Испытание иммуногенности столбнячного компонента.

Препарат разводят стерильным 0,9% раствором натрия хлорида до 4,0 ЕС/мл и вводят группе из 10 белых мышей массой тела подкожно, в область внутренней поверхности верхней трети бедра, в дозе ЕС в объеме 0,5 мл. Через 21 сут определяют резистентность иммунизированных мышей к столбнячному токсину, который вводят животным в дозе не менее 50 Dlm под кожу внутренней поверхности верхней трети бедра в объеме 0,5 мл. За животными наблюдают в течение 4 сут. Препарат считают выдержавшим испытание, если не менее 7 мышей останутся живыми без явлений столбняка. Опыт сопровождают контролем 1 Dlm столбнячного токсина на 4 мышах из той же партии. Контрольные животные (не менее 2) должны погибнуть в течение 4 сут.

Полнота сорбции. В 1 мл надосадочной жидкости содержание неадсорбированного дифтерийного анатоксина не должно превышать 1 Lf, неадсорбированного столбнячного анатоксина - 0,1 ЕС, если нет других указаний в частной фармакопейной статье.

Полноту сорбции определяют путем индикации неадсорбированных дифтерийного и столбнячного анатоксинов в надосадочной жидкости АДС-М-анатоксина. Определение содержания неадсорбированного дифтерийного анатоксина в надосадочной жидкости проводят в соответствии с ОФС "Определение концентрации анатоксинов/токсинов в реакции флокуляции", неадсорбированного столбнячного анатоксина - в соответствии с ОФС "Определение концентрации анатоксинов в реакции антитоксинсвязывания", если нет других указаний в частных фармакопейных статьях.

Формальдегид. Не более 100 мкг/мл. Определение проводят в соответствии с ОФС "Определение формальдегида".

Производственные штаммы микроорганизмов. Раздел должен содержать следующую информацию: наименование штаммов; место их депонирования; допустимое количество пассажей (при необходимости) и методику их проведения с указанием условий культивирования; при необходимости дополнительные к паспортным данным требования к характеристикам штаммов.

Консерванты. В качестве консерванта используют тиомерсал (мертиолят). Определение проводят в соответствии с ОФС "Определение тиомерсала". Концентрация консерванта не должна быть ниже минимально эффективной и не превышать указанную на упаковке более чем на 15% .

Сорбенты. Алюминия гидроксид. Не более 1,1 мг/мл алюминия , если в частной статье нет иных указаний. Определение проводят комплексонометрическим методом в соответствии с ОФС "Комплексонометрическое титрование. Определение ионов алюминия в сорбированных иммунобиологических препаратах".

Извлекаемый объем. Не менее номинального. Определение проводят в соответствии с ОФС "Извлекаемый объем лекарственных форм для парентерального применения".

Упаковка и маркировка. В соответствии с ОФС "Иммунобиологические лекарственные препараты (средства). На первичную упаковку наносят дополнительное указание "Встряхивать!". На вторичную упаковку наносят дополнительные указания "Перед употреблением встряхивать", "Замораживание не допускается".

Транспортирование и хранение. Должен транспортироваться и храниться при температуре от 2 до 8°С.