Государственный стандарт качества лекарственного средства. Общая фармакопейная статья ОФС 42 "Метод спектроскопии ЯМР для идентификации и контроля подлинности полисахаридных вакцин"

Государственный стандарт качества лекарственного средства
Общая фармакопейная статья ОФС 42
"Метод спектроскопии ЯМР для идентификации и контроля подлинности полисахаридных вакцин"

Вводится впервые

Метод спектроскопии ядерного магнитного резонанса (ЯМР) предназначен для идентификации и контроля подлинности полисахаридных вакцин.

Спектроскопия ядерного магнитного резонанса - физический метод анализа, основанный на регистрации переходов между ядерными магнитными энергетическими уровнями молекул вещества, находящегося в постоянном магнитном поле. Переходы между ядерными магнитными уровнями возможны для ядер, обладающих ненулевым магнитным моментом, то есть для ядер, со спиновым квантовым числом l, не равным нулю. Практическое значение по соображениям распространённости и чувствительности имеет наблюдение ядерного магнитного резонанса на ядрах и . Все перечисленные магнитно-активные ядра имеют спин, равный 1/2. Набор переходов между всевозможными магнитными энергетическими состояниями магнитно активных ядер в молекуле составляет спектр ЯМР. Спектр ЯМР является характеристическим для каждого вещества и является его однозначным идентификатором. На результирующий спектр ЯМР оказывают также влияние условия регистрации: агрегатное состояние вещества, температура, наличие других веществ в анализируемом образце.

Основными характеристиками спектров ЯМР являются химический сдвиг, измеряемый в миллионных долях (м.д.), мультиплетность,

интегральная интенсивность сигналов, а также константы спин-спинового взаимодействия, определяющими расщепление сигналов ЯМР и измеряемые в герцах (Гц). Эти характеристики зависят от химического окружения данного ядра или группы ядер, от типа и числа соседних ядер, обладающих магнитным моментом, от их пространственного расположения, а также от условий, в которых регистрируется спектр ЯМР.

С целью идентификации и контроля подлинности полисахаридных вакцин регистрируются спектры ядерного магнитного резонанса на ядрах углерода-13 (ЯМР ) в контролируемых условиях. Спектроскопия ЯМР на ядрах для образцов полисахаридов не является характеристической из-за сильного перекрывания сигналов.

Регистрация спектра ЯМР . Предварительно в датчике спектрометра ЯМР устанавливается температура 35°С. В случае вязких растворов, температура может быть увеличена до 70°С. Перед началом регистрации спектра исследуемый образец выдерживается в датчике спектрометра для установления необходимой температуры не менее 5 минут. Для калибровки шкалы химических сдвигов спектрометра регистрируется ЯМР спектр 20% раствора 1,4 диоксана в . Химический сдвиг сигнала 1,4 диоксана устанавливают как 67.4 м.д. Спектры ЯМР образцов полисахаридных вакцин регистрируют в тех же условиях.

Параметры регистрации спектров ЯМР образцов полисахаридных вакцин:

Величина импульса: 45°.

Спектральное разрешение: < 1 Гц/точка

Время между импульсами: не менее 1 с

Температура регистрации: 35°С

Параметры обработки спектров ЯМР :

Взвешивающая функция: экспонента

Параметр уширения взвешивающей функции: 2 Гц

Коррекция базовой линии: полиноминальная

Критерий пригодности спектров ЯМР для анализа:

Отношение сигнал: шум - :1

Результирующая ширина спектральных линий: <20 Гц

Анализ спектров образцов полисахаридных вакцин:

- выделяется спектральный диапазон аномерных атомов углерода 95 - 105 м.д.;

- в выделенном спектральном диапазоне идентифицируются характеристические сигналы для полисахаридов вакцины. Эти сигналы должны быть охарактеризованы определёнными химическими сдвигами, уникальными для данного полисахарида, с соответствующими доверительными интервалами;

- в выделенном спектральном диапазоне определяется отсутствие других сигналов, не относящихся к полисахаридам вакцины;

- записывается спектр, соответствующий спектральному диапазону аномерных атомов углерода с указанием цифровых значений химических сдвигов всех характеристических сигналов. Также приводится запись полного спектра (0 - 210 м.д.) с указанием цифровых значений химических сдвигов характеристических сигналов.

Для идентификации и определения подлинности полисахаридной вакцины требуется одновременное выполнение условий как наличия всех характеристических сигналов с определёнными химическими сдвигами, находящихся в границах доверительных интервалов, так и отсутствия любых других сигналов, не относящихся к целевому полисахариду.

Конкретный набор характеристических сигналов с соответствующими доверительными интервалами приводится в частной фармакопейной статье.

Приложение

Испытуемый образец. Образец массой от 10 до 20 мг (количество должно быть достаточным для регистрации спектра , пригодного для анализа в соответствии с критерием пригодности по соотношению сигнал:шум) растворяют в 0,6 мл дейтерия оксида 99.9 ат.% D, раствор центрифугируют 20 минут при 2000 g. Надосадочную жидкость переносят в помеченную ампулу для регистрации спектров.

Раствор для калибровки. В ампулу для спектроскопии ЯМР помещают 480 мкл и добавляют 120 мкл 1,4 диоксана. Раствор перемешивают.