Государственный стандарт качества лекарственного средства. Фармакопейная статья ФС "Вакцина гриппозная живая"

Государственный стандарт качества лекарственного средства
Фармакопейная статья ФС
"Вакцина гриппозная живая"

Вводится впервые

Настоящая фармакопейная статья распространяется на Вакцину гриппозную аллантоисную живую, которая представляет собой аттенуированные, реассортантные вирусы гриппа типа А и В, полученные из вируссодержащей аллантоисной жидкости, выращенные раздельно на развивающихся куриных эмбрионах. Препарат лиофильно высушен со стабилизатором.

Препарат вызывает формирование специфического иммунитета против гриппа.

Вакцина предназначена для специфической профилактики гриппа.

Штаммовый состав вакцин ежегодно рекомендуется ВОЗ и национальной Комиссией по гриппозным вакцинным и диагностическим штаммам.

Куриные эмбрионы должны быть получены из птицехозяйств, благополучных по возбудителям, патогенным для человека. Качество поставляемых эмбрионов должно быть подтверждено ветеринарными свидетельствами.

Производство

Производство вакцины должно осуществляться в помещениях, где не проводят работы с другими патогенными микроорганизмами и антибиотиками. Не допускается производство препарата на территории, на которой расположены производственные здания по производству антибиотиков, если не соблюдены требования к защитным зонам, согласно действующим санитарным правилам. Обязательным условием технологического процесса производства вакцины является соблюдение поточности, исключающей возможность перекреста промежуточных продуктов и полуфабрикатов, получаемых на разных стадиях производства, и их контаминацию посторонними веществами, в первую очередь посторонней микрофлорой. В помещениях, где готовится препарат, запрещается работа с другими вирусами гриппа, кроме вакцинных. Сотрудники, работающие на производстве живой гриппозной вакцины, не должны контактировать с другими инфекционными агентами в течение того же рабочего дня.

При производстве необходимо проводить валидацию технологического процесса, технологического оборудования, сырья и методов контроля. Все исходные материалы и сырье, используемые при производстве, должны иметь сертификаты соответствия (допустимо только фармакопейное качество используемых компонентов). В состав вакцины должны входить вспомогательные компоненты, разрешенные к медицинскому применению и в дозах, не вызывающих токсические, аллергические или иные нежелательные реакции у человека.

Контроль показателей качества должен включать в себя биологические, вирусологические и аналитические методы. В связи с этим при производстве особое значение имеет постоянное выполнение на всех этапах производства внутрипроизводственного анализа показателей качества, оценки воспроизводимости методов и анализа качества готовой продукции при выпуске и на конце срока его годности.

Производство вакцины включает несколько стадий с обязательным внутрипроизводственным контролем: получение посевного вируса; накопление вируса; объединение его со стабилизатором; лиофилизация; производство лекарственной формы препарата; маркировку; фасовку. На каждой стадии должны быть предусмотрены: система и схема анализа важных показателей качества в ходе технологического процесса и испытания конечного продукта; хранение промежуточных и конечного продуктов, обеспечивающее стабильность качества в течение срока годности продукта.

Стабилизатор, который входит в состав вакцины как вспомогательное вещество, должен содержать компоненты, не снижающие эффективности вакцины, разрешенные к медицинскому применению и в дозах не вызывающих токсические, аллергические или иные нежелательные реакции у человека.

На этапах производства необходимо контролировать:

- Качество сырья: 9 - 11-дневных куриных эмбрионов. Из каждой партии 2% эмбрионов, использованных для приготовления вируса, без заражения инкубируют одновременно с зараженными эмбрионами. Их аллантоисная жидкость испытывается на наличие гемагглютинирующих агентов. Эмбрионы следует брать из изолированных групп птиц, постоянно контролируемых в отношении отсутствия аденовируса птиц 1-ой группы (CELOPHELPS), аденовируса птиц 3-ой группы (В8/78), аденовируса птиц 4-ой группы (KR-95), энцефаломиелита птиц (Van Roakel), гриппа птиц (видовой) тип А (Н1-Н15), парамиксовируса птиц (тип 2) (Yucaipa), реовируса птиц (1133), пневмовируса (UK), туберкулеза птиц (M.avium), вируса анемии цыплят (DelRose), оспы птиц (Кучинский), инфекционного бронхита (Massachusetts), инфекционного бурсита (Winterfild 2515), инфекционного ларинготрахеита (Cover), лейкоза птиц (антитела (НС-1), вирусов лимфоидного лейкоза (р27) (A, B, C, D, E, J), болезни Марека (серотипы 1, 2 и 3) (SB-1/HVT), микоплазмоза птиц (M.s), микоплазмоза птиц (M.g), ньюкаслской болезни (La-Sota), гемофиллеза (H.paragallinarum), сальмонеллеза (родовая), пастереллеза (P.m), Ornithobacterium rhinotracheale.

- Производственные штаммы: используются аттенуированные, реассортантные штаммы вируса гриппа типа А и В. Источник и история пассажей должны быть известны. Вакцинный вирус должен быть генетически стабильным, иммуногенным, не передаваться восприимчивым индивидуумам и иметь соответствующие лабораторные маркеры аттенуации. Его иммуногенность и безопасность для человека должны быть предварительно установлены. Продукция вакцины основывается на системе посевных вирусов (seed-lot). Из штамма готовится маточный материал или главный посевной вирус, который должен храниться при -70°C в жидком виде или при - 20°C в лиофильно высушенном. Штаммы и маточный материал должны быть проверены по всем биологическим свойствам в соответствии с регламентированными требованиями.

Из маточного материала готовят рабочий посевной вирус. Финальный сбор представляет собой не более пятого пассажа от вакцинного вируса.

Пенициллин или стрептомицин нельзя использовать ни на одной из стадий производства.

- Готовая лекарственная форма

Описание. Аморфная масса от светло-желтого до светло-коричневого цвета. Определяют визуально.

Подлинность. Моновакцины должны взаимодействовать с соответствующими гомологичными типоспецифическими сыворотками и не взаимодействовать с гетерологичными сыворотками других типов и подтипов вируса.

Определяют в полуфабрикатах (моновакцинах), лиофилизированных одновременно с трехвалентным препаратом, в реакции торможения гемагглютинации (РТГА)

1. Метод постановки реакции торможения гемагглютинации (РТГА) с вирусом гриппа (макрометод). РТГА применяют для установления типа и подтипа вируса, т.е. специфичности, а также для определения нарастания титров специфических антител. Постановка РТГА включает следующие этапы работы: приготовление взвеси эритроцитов, определение гемагглютинирующего титра антигена в РГА и рабочей дозы вируса, постановка самой реакции. Для постановки реакции необходимы следующие ингредиенты: - антиген (вакцина, вируссодержащая жидкость - аллантоисная или культуральная); - иммунные сыворотки к различным вирусам гриппа; - буферно-солевой раствор рН (Na - 0,01 М с 0,16 М NaCl); - 1% взвесь куриных эритроцитов в фосфатном буфере.

2. Приготовление взвеси куриных эритроцитов.

Для постановки РТГА используют эритроциты петухов. Кровь у петухов берут из сердца или подкрыльцовой вены.

Свежеполученную от 3-5 петухов кровь помещают во флакон со стеклянными бусами или же с одним из антикоагулянтов (р-р Альсевера, 5% раствор лимоннокислого натрия). Дефибринирование крови проводят немедленно путем интенсивного встряхивания флакона в течение 5-7 мин при температуре °С до выпадения волокон фибрина.

Дефибринированную кровь фильтруют через 4 слоя марли, затем трехкратно отмывают буферно-солевым раствором (на 1 объем крови - 4 объема буферно-солевого р-ра) путем центрифугирования при об/мин в течение мин. Надосадочную жидкость удаляют. Из осадка, принимаемого за 100%, готовят 1% суспензию куриных эритроцитов по объему.

3. Определение гемагглютинирующего титра антигена.

В лунках плексигласовой планшеты готовят двукратные разведения антигена в объеме 0,4 мл на буферно-солевом растворе, начиная с 1:10 до 1:1280. В каждую лунку вносят по 0,4 мл 1% суспензии эритроцитов. Содержимое лунок перемешивают встряхиванием планшеты и оставляют при температуре °С на 40-45 мин (до оседания эритроцитов в контроле, см. ниже).

Реакцию оценивают по -крестовой системе. За титр антигена, или одну агглютинирующую единицу (1АЕ), принимают наибольшее разведение антигена, дающее четко выраженную агглютинацию эритроцитов (3 или 4 креста).

Определение титра антигена сопровождается отрицательным контролем на отсутствие спонтанной агглютинации эритроцитов. С этой целью в контрольную лунку той же плексигласовой доски вносят 0,4 мл буферно-солевого раствора и 0,4 мл 1% суспензии эритроцитов. При отсутствии спонтанной агглютинации на дне лунки выпадает гомогенный с ровными краями осадок эритроцитов (отрицательная реакция).

4. Приготовление рабочей дозы антигена.

В РТГА рабочей дозой антигена является то разведение антигена, в 0,2 мл которого содержится 4 агглютинирующие единицы (4 АЕ). Для вычисления ее следует установленную величину титра антигена разделить на 8. Полученная от деления цифра указывает во сколько раз нужно развести антиген, чтобы в 0,2 мл его содержалось 4 АЕ (рабочая доза).

Перед постановкой основного опыта проверяют точность приготовления рабочей дозы (4 АЕ). Для этого в пять лунок горизонтального ряда плексигласовой доски, начиная со второй, вносят по 0,2 мл буферно-солевого раствора. В 1-ю и 2-ю лунки добавляют по 0,2 мл приготовленной рабочей дозы антигена. После перемешивания переносят 0,2 мл смеси из 2-й лунки в 3-ю, из 3-ей - в 4-ю, из 4-й - в 5-ю, из 5-й лунки 0,2 мл удаляют. Затем в каждую лунку добавляют по 0,2 мл буферно-солевого раствора и по 0,4 мл 1% суспензии куриных эритроцитов. В 6-й лунке ставят контроль на отсутствие спонтанной агглютинации эритроцитов (см. выше). После встряхивания смесь оставляют при температуре °С на 40-45 мин (до оседания эритроцитов в контроле).

При правильном выборе рабочей дозы полная (++++) агглютинация эритроцитов должна наблюдаться только в первых трех лунках. В 4-й и 5-й лунках агглютинация должна отсутствовать. В случае отклонения от указанного выше разведение антигена должно быть изменено путем добавления соответствующего количества антигена или буферно-солевого раствора для получения необходимой рабочей дозы. При этом необходимо повторно проверить правильность приготовления рабочей дозы.

5. Постановка реакции торможения гемагглютинации.

Сыворотки, используемые в РТГА, могут содержать неспецифические ингибиторы гемагглютинации. Поэтому для их удаления перед постановкой РТГА сыворотки необходимо обработать нейраминидазой холерных вибрионов (см. Примечание).

После удаления неспецифических ингибиторов готовят двукратные разведения сывороток в лунках плексигласовой доски, начиная с 1:10 до 1:640 и выше в объеме 0,2 мл. К каждому разведению сыворотки добавляют по 0,2 мл рабочей дозы антигена (4 АЕ). Смесь встряхивают, оставляют при температуре °С на 30 мин, затем в каждую лунку добавляют по 0,4 мл 1% суспензии куриных эритроцитов. Смесь повторно встряхивают, оставляют при температуре °С в течение 40-45 мин (до оседания эритроцитов в контроле), после чего производят учет результатов реакции (см. п. 4.1.6).

При наличии специфических антител в сыворотке наступает задержка агглютинации эритроцитов. За титр сыворотки принимают предельное разведение, вызывающее полную задержку гемагглютинации.

Задержка гемагглютинации указывает на соответствие типа антигена и взятой сыворотки; отсутствие задержки гемагглютинации свидетельствует о несоответствии типа взятой сыворотки.

Примечание. Удаление неспецифических ингибиторов гемагглютинации из иммунных сывороток с помощью нейраминидазы холерных вибрионов.

Метод основан на способности нейраминидазы холерных вибрионов, не действуя на специфические антитела, разрушать ингибиторы гемагглютинации к вирусам гриппа А и В в сыворотках крови человека, кур, крыс, кролика.

К смеси (сыворотка плюс нейраминидаза) добавляют 0,4 мл буферно-солевого раствора, чтобы получить разведение сыворотки 1:10.

Сыворотка, обработанная нейраминидазой, может быть использована для РТГА в течение 2 недель при условии хранения ее при температуре °С.

6. Приготовление растворов.

Приготовление буферно-солевого раствора рН

(0,01 М Na-фосфатный буфер, содержащий 0,15 М NaCl):

- 26,8 г двузамещенного натрия фосфата растворяют в воде очищенной и объем в мерной колбе доводят до 1 л (0,1 М ).

- 13,8 г однозамещенного натрия растворяют в воде очищенной и объем в мерной колбе доводят до 1 л (0,1 М ).

- к 720 мл 0,1 М раствора добавляют 280 мл 0,1 М раствора . рН такого раствора должен быть равным .

- 100 мл полученного 0,1 М Na-фосфатного буфера разбавляют водой очищенной до 1 л и добавляют 8,5 г хлористого натрия (NаCl). рН полученного раствора - . Если рН выше или ниже требуемого, добавляют 1 N раствор HCl или 1 N раствор NaOH, соответственно.

Приготовление раствора Альсевера

Состав:

2,05% глюкозы;

0,42% натрия хлорида;

0,8% натрия цитрата;

100,0 мл бидистиллированной воды.

Реакцию среды раствора доводят с помощью 5% лимонной кислоты до рН от 6,15 до 5,6 (примерно 10 мл кислоты на 1 л раствора). Стерилизуют фильтрацией или автоклавированием в течение 3 последовательных дней при 100°С и 0,7 атм. Для консервирования добавляют на 1 мл крови 1,2 мл раствора Альсевера.

В этом виде эритроциты можно хранить при °С в течение 1-2 нед. Перед употреблением их необходимо трехкратно отмыть буферно-солевым раствором с помощью центрифугирования при об/мин в течение 10 мин.

Приготовление консервирующего раствора 5% натрия цитрата

5% раствор цитрата натрия на дистиллированной воде перед употреблением разводят в 2 раза буферно-солевым раствором и к одной части полученного раствора натрия цитрата добавляют 2 части крови. В этом консерванте эритроциты можно хранить при °С в течение 3-5 суток.

Метод постановки реакции торможения гемагглютинации (РТГА) с вирусом гриппа (микрометод).

Принцип метода, его учет и ингредиенты для реакции, проводимой микрометодом, те же, что и для проведения РТГА макрометодом. Изменяются только концентрации и объемы ингредиентов.

Реакцию ставят на микропанели с "U"-образными лунками.

1. Приготовление 0,5% взвеси эритроцитов петуха.

Взвесь готовят из 1%-ной суспензии эритроцитов (см. макрометод) разведением ее в 2 раза (т.е. в соотношении 1:1) буферно-солевым раствором.

2. Определение гемагглютинирующего титра антигена.

В каждую лунку микропанели вносят буферно-солевой раствор в объеме 50 мкл. Затем в первую лунку вносят 50 мкл антигена в разведении 1:10 и далее проводят титрование по принципу двукратного разведения. Из последней лунки удаляют 50 мкл. Затем в каждую лунку вносят по 50 мкл 0,5% суспензии эритроцитов. Содержимое лунок перемешивают встряхиванием и оставляют при комнатной температуре °С на 40-45 мин до оседания эритроцитов в контроле (см. ниже).

Реакцию оценивают по -крестовой системе. За титр антигена или одну агглютинирующую единицу (1 АЕ) принимают наибольшее разведение антигена, дающее четко выраженную агглютинацию эритроцитов на 3 или 4 креста.

Определение титра антигена сопровождается постановкой отрицательного контроля на отсутствие спонтанной агглютинации эритроцитов. В качестве отрицательного контроля служат несколько лунок панели, в которые вместо антигена внесен буферно-солевой раствор.

3. Приготовление рабочей дозы антигена.

Рабочая доза антигена при постановке РТГА микрометодом равна 8 ГАЕ. Для ее приготовления гемагглютинирующий титр делят на 16. Полученная цифра означает, во сколько раз необходимо развести антиген.

Пример: титр антигена равен 1:160. Разделив 160 на 16, получаем цифру 10, указывающую, что антиген необходимо развести в 10 раз.

Перед постановкой основного опыта проверяют точность приготовления рабочей дозы (8 АЕ). Для этого в шесть лунок микропанели, начиная со второй, вносят по 25 мкл буферно-солевого раствора. В 1-ю и 2-ю лунки добавляют по 25 мкл приготовленной рабочей дозы антигена. После перемешивания смеси 25 мкл ее объема переносят из 2-й лунки в 3-ю, из 3-ей - в 4-ю и т.д. Из последней лунки панели 25 мкл удаляют. Затем во все лунки добавляют по 25 мкл буферно-солевого раствора и по 50 мкл 0,5% суспензии эритроцитов. После встряхивания смесь оставляют при температуре °С на 40-45 мин до оседания эритроцитов в контроле.

При правильном выборе рабочей дозы агглютинация эритроцитов должна наблюдаться только в четырех лунках панели. В остальных лунках агглютинация должна отсутствовать. В случае отклонения от указанного результата добавляют антиген или буферно-солевой раствор для получения необходимой рабочей дозы.

4. Постановка реакции торможения гемагглютинации.

Метод постановки реакции микрометодом соответствует таковому, описанному для макрометода, за исключением объемов используемых ингредиентов реакции.

Готовят двукратные разведения сыворотки в объеме 25 мкл, вносят рабочую дозу антигена (8 АЕ) в объеме 25 мкл и после контакта антигена и сыворотки (от 30 мин до 1 ч) при температуре °С в каждую лунку панели вносят по 50 мкл 0,5%-ной взвеси эритроцитов. После оседания эритроцитов в контроле (как правило, через 40-45 мин) проводят учет результатов.

За титр сыворотки принимают величину обратную ее разведению, при котором отсутствует агглютинация эритроцитов.

Время растворения. Содержимое ампулы должно полностью раствориться в течение 3 мин при встряхивании в 0,5 мл воды. Определяют визуально после растворения, по ОФС "Растворимость".

Восстановленный препарат.

Описание. Внешний вид.

Прозрачность. Должен быть прозрачным или выдерживать сравнение с эталоном, указанным в частной фармакопейной статье. Определяют визуально по ОФС, "Прозрачность и степень мутности".

Цветность. Должен быть бесцветным или выдерживать сравнение с эталоном, указанным в частной фармакопейной статье. Определяют по ОФС, "Степень окраски жидкостей".

рH. От 7,0 до 8,0. Определяют потенциометрически методом по ОФС, "Ионометрия".

Потеря в массе при высушивании. Не более 2,5%. Определяют по ОФС, "Определение потери в массе при высушивании".

Защитный газ. Указать название защитного газа.

Стерильность. Препарат должен быть стерильным. Определяют по ОФС "Стерильность".

Отсутствие посторонних вирусов, микоплазм, микобактерий туберкулеза. Препарат не должен содержать микоплазм, микобактерий туберкулеза, посторонних вирусов. Определяют в вируссодержащей аллантоисной жидкости до добавления стабилизатора по ОФС "Испытание вирусных вакцин на присутствие посторонних агентов".

При контроле на наличие посторонних вирусов испытания проводятся на 3-х клеточных культурах и куриных эмбрионах. При нейтрализации вируса гриппа не следует использовать иммунные сыворотки птичьего, обезьяньего или человеческого происхождения. Вирус, используемый для получения гипериммунной сыворотки, должен быть получен либо на культуре клеток не птичьего происхождения, либо на куриных эмбрионах свободных от патогенов. Если используются куриные эмбрионы, они должны быть получены от других групп птиц, которые не использовались для получения исследуемого вируса.

Контроль на микоплазмы проводят с использованием питательной среды для выделения и культивирования микоплазм полужидкую (среда Каган) с использованием нормальной сыворотки крови лошади.

Аномальная токсичность. Препарат должен быть нетоксичным.

Определение проводят по ОФС "Аномальная токсичность", раздел "Тест для вакцин и сывороток". Доза для мышей 0,5 мл внутрибрюшинно .

Специфическая активность. Препарат должен обладать инфекционной активностью не менее (эмбриональная инфекционная доза) для штаммов вируса гриппа типа А и не менее для штамма вируса гриппа типа В. Определяют в полуфабрикатах (моновакцинах), лиофилизированных одновременно с трехвалентным препаратом по методике, изложенной ниже.

Определение проводят на развивающихся куриных эмбрионах 10-12-дневного возраста.

Десятикратные разведения вируса (вакцины) готовят в 4,5 мл буферно-солевого раствора рН от 7,0 до 7,4, меняя при каждом разведении пипетку.

0,2 мл вируссодержащей жидкости из разведений от до (разведения могут меняться в зависимости от целей исследования и предполагаемой инфекционной активности вируса) вводят в аллантоисную полость, используя на каждое разведение по 4 эмбриона. Для заражения эмбрионов используют разные шприцы или проводят заражение одним шприцом, начиная с большего разведения.

Эмбрионы инкубируют при температуре, указанной в паспорте на штамм, в течение 48 ч для вируса гриппа (вакцины) типа А и 72 ч для вируса гриппа (вакцины) типа В. По истечении срока инкубации отдельно из каждого эмбриона отбирают по 0,4-0,5 мл аллантоисной жидкости, которую помещают в 4 отдельные лунки плексигласовой доски. Затем в каждую лунку добавляют по 0,4-0,5 мл 1%-ной суспензии куриных эритроцитов. Через 30-40 мин контакта при температуре °С, после оседания эритроцитов в контроле, проводят учет гемагглютинации.

Контроль: проводят как описано выше, но вместо аллантоисной жидкости из куриного эмбриона в свободные 4 лунки панели вносят по 0,4-0,5 мл буферно-солевого раствора рН .

Вычисление биологического титра проводят по методу Рида и Менча.

Метод основан на логической предпосылке, что тканевая культура или животное, погибшие при заражении их каким-либо разведением вируса, погибнут и при заражении любым более низким разведением.

Пример подсчета показан ниже.

Таблица 1 - Подсчет 50% дозы по методу Рида и Менча

Из таблицы видно, что 50% доза находится между разведениями вируса и .

Далее расчет величины Х, которую необходимо прибавить к разведению непосредственно ниже 50% дозы (в ), производится по следующей формуле:

, (1)

где:

А - процент гибели при разведении, непосредственно ниже искомой 50% дозы (в данном случае 60%);

В - процент гибели при разведении непосредственно выше искомой 50% дозы (в данном случае 17%).

Подставляя полученные значения в формулу 1, находим:

,

откуда титр вируса (в обратных ) равен 6 + 0,23 = 6,23; другими словами, одна или соответствует разведению вируса .

Если в титрование были взяты разведения вируса с интервалом 0,5 , то величину Х в формуле 1 следует умножить на 0,5.

Поскольку при титровании вируса в пробирочных культурах обычно получаются четкие результаты и культуры со 100% дегенерацией отделены от культур с полным отсутствием дегенерации всего одним разведением вируса, удобно пользоваться при подсчете титров по Риду и Менчу упрощенной схемой:

Таблица 2 - Упрощенная схема подсчета титров по Риду и Менчу

Количество эмбрионов, зараженных разведением	Количество эмбрионов с наличием гемагглютинации в аллантоисной жидкости	Титр вируса в lg
4 4 4 4	1 2 3 4	(n-1), 66 n, 0 n, 33 n, 50

Пример: 10^(-4) ++++

10-5 +++

10-6 ---

Титр вируса в равен: n, 33 т.е.  мл.

Указание объема вирусной взвеси, вводимой при заражении эмбрионов, обязательно, так как величина инфекционной активности будет различной.

Для вычисления (количества цитопатогенных доз) вируса в 1 мл исследуемой жидкости к показателю величины титра вируса в прибавляют в зависимости от количества вируссодержащего материала, взятого для заражения одной культуры, соответствующие величины поправок:

Таблица 3 - Величины поправок

Объем материала в миллилитрах, взятого для заражения одной культуры	Величина поправки в единицах логарифма
0,1	1,0
0,2	0,7
0,25	0,6
0,3	0,52
0,4	0,4
0,5	0,3
0,6	0,22
0,7	0,16
0,8	0,1

Например, если во всех пробирочных культурах, зараженных по 0,2 мл материалом в разведении , наблюдается цитопатогенный эффект, а в культурах, инокулированных разведением , цитопатогенного эффекта не наблюдается (при инокуляции же разведением цитопатогенный эффект отмечен в одной из четырех пробирок), то титр вируса в будет равен . Содержание же его в 1 мл будет равно .

Иммуногенность. Препарат должен вызывать прирост гомологичных антигемагглютинирующих антител в сыворотке крови в 4 и более раз у не менее чем 60% привитых людей для штаммов вируса гриппа типа А и у 40% у привитых людей для штамма вируса гриппа типа В. Определение проводят на группе из 50 человек с исходным титром антител не выше 1:16. Контролируют первые три серии при введении нового штамма, в дальнейшем три серии в год.

Реактогенность. Препарат не должен вызывать повышение темпе-ратуры выше 37,5°С более, чем у 2% привитых при проверке на группе из 50 человек в возрасте от 18 до 55 лет. Контролируют первые три серии при введении нового штамма, в дальнейшем три серии в год.

Производственные штаммы. Вакцинные штаммы вирусов гриппа типа А и В рекомендованные ВОЗ, ЕС и Комиссией по гриппозным вакцинным и диагностическим штаммам. Должны соответствовать по антигенной структуре антигенной разновидности вирусов гриппа подтипов и типа В на текущий эпидсезон, иметь известную историю пассажей и источник выделения.

Штаммы должны удовлетворять следующим требованиям:

пройти не менее пяти пассажей на куриных эмбрионах и обладать инфекционной активностью не менее  мл для типа А и  мл для типа В;

- быть специфичными и соответствовать антигенной структуре циркулирующим вирусам гриппа в РТГА и РИНА;

- быть бактериологически стерильными, не содержать микоплазм, микобактерий туберкулеза и посторонних вирусов.

- быть нетоксичными для мышей;

- быть безвредными для людей, т.е. не вызывать повышение температуры выше 37,5°С в течение 4 сут наблюдения более, чем у 2% привитых с титром антител не выше 1:16 (при испытании на группе из человек, на которых проверяется иммуногенность);

- стимулировать прирост гомологичных антител в сыворотке крови в 4 и более раз у 70% людей, привитых двукратно, и у 50% людей, привитых однократно вакцинными штаммами типа А; у 50% людей, привитых двукратно и 40% людей, привитых однократно вакцинным штаммом типа В (при испытании на группе из 100 человек, из них не менее 40 человек с титром антител 1:8 и ниже).

Растворители, выпускаемые в комплекте с препаратом.

Маркировка и упаковка. В соответствии с ОФС "Иммунобиологические лекарственные препараты (средства)". Вторичная (потребительская) упаковка кроме общепринятых сведений должна содержать сведения о субстрате культивирования, составе штаммов, эпидсезоне, для которого предназначен препарат.

Транспортирование. При температуре от 2 до 8°С .

Хранение. В сухом месте при температуре от 2 до 8°С .