Государственный стандарт качества лекарственного средства. Фармакопейная статья ФС 42- "Вакцина оспенная живая"

Государственный стандарт качества лекарственного средства
Фармакопейная статья ФС 42-
"Вакцина оспенная живая"

Вводится впервые

Вакцина оспенная живая представляет собой лиофилизат, содержащий вирус вакцины, выращенный на скарифицированной коже телят, частично освобожденный от бактериальной флоры обработкой фенолом или хлоргексидина биглюконатом. Стабилизатор - пептон в конечной концентрации 5-10%. Антибиотики отсутствуют. Одна прививочная доза должна содержать не менее  ООЕ (оспообразующих единиц). Растворитель - глицерина раствор 50%.

Производство.

Требования к животным.

В качестве продуцентов для производства оспенной вакцины и посевного материала используют телят крупного рогатого скота в возрасте от 6 до 18 месяцев любой породы, предпочтительно светлой масти. Животные должны поступать из хозяйств, благополучных в отношении инфекционных агентов. Каждая партия животных должна сопровождаться ветеринарным свидетельством, подтверждающим отсутствие инфекционных заболеваний. Все поступившие телята должны пройти 30-дневный карантин.

Требования к производственному штамму.

В качестве вакцинного штамма используют вирус вакцины, штамм Л-ИВП. Штамм Л-ИВП получен путем накожных пассажей на кроликах и телятах вакцины, изготовленной из штамма Lister института Листера (Англия, Элстри). Для поддержания стабильных свойств штамма проводят один пассаж исходного материала штамма на коже кролика. Получают ляпиновакцину. Посевной вирус I и II генерации готовят из ляпиновакцины путем пассажей на телятах. Для приготовления вакцины используют только ляпиновакцину III генерации. Взвесь посевного вируса должна отвечать следующим требованиям:

- содержать не более 50 посторонних микроорганизмов в 1 мл, в том числе аэробных и факультативных анаэробных бактерий и грибов, не содержать бактерий семейства Enterobacteriaceae и вида Pseudomonas aeruginosa и Staphilococcus aureus, а также патогенных бактерий;

- быть генетически однородной: допускается образование на ХАО КЭ не более 10 поражений поверхностного диффузного типа на 1000 типичных оспин (от 0,5 до 3 мм);

- на скарифицированной коже кроликов образовывать типичные вакцинальные поражения (оспины);

- не вызывать некрозы при внутрикожном введении кроликам ООЕ/0,1 мл;

- не вызывать гибель кроликов при введении в мозг ООЕ/0,1 мл;

- быть безвредной для морских свинок при введении подкожно 1 мл посевного вируса и для белых мышей при введении 0,2 мл посевного вируса подкожно;

- иметь специфическую активность не менее  ООЕ/мл.

Производство оспенной вакцины должно проводиться в отдельных изолированных помещениях, в которых не допускается производство других лекарственных средств. Условия производства должны соответствовать требованиям Санитарных правил "Безопасность работы с микроорганизмами III-IV групп патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных болезней".

Этапы производства включают: получение оспенного соскоба с кожи телят, очистку оспенного соскоба от белка кожи телят центрифугированием, освобождение от микрофлоры путем обработки фреоном, приготовление жидкой вакцины и внесение стабилизатора, розлив и герметизация ампул в атмосфере азота. В процессе производства обязательным является испытание качества исходных материалов, вакцинного штамма, ляпиновакцины I, II и III генерациий посевного вируса. Все исходные компоненты и вспомогательные материалы должны быть фармакопейного качества.

Испытания.

Описание. Однородная пористая масса от бело-серого до светло-желтого цвета, гигроскопичная.

Подлинность. Вакцина должна вызывать: на хорионаллантоисных оболочках (ХАО) 12-дневных куриных эмбрионов образование белых плотных поражений диаметром от 0,5 до 3 мм (испытания проводят одновременно с испытанием специфической активности оспенной вакцины). Вызывать типичные вакцинальные поражения (оспины) при накожной прививке кроликам. Испытание проводят на двух белокожих кроликах породы "Шиншилла" массой от 2,5 до 3,5 кг. На предварительно депиллированные скарифицированные участки кожи кроликов площадью около 5  наносят по 0,1 мл вакцины в разведениях и . Для разведения используют 0,9% раствор натрия хлорида. Испытания осуществляют параллельно со стандартным образцом активности специфичности и некротической активности вируса вакцины (ОСО 42-28-113-**).

Через 5-7 суток у животных обеих групп на зараженных участках кожи должны образовываться типичные вакцинальные поражения (оспины).

Время растворения. Вакцина должна растворяться в 0,2 мл (10 доз) или 0,3 мл (20 доз) 50% раствора глицерина в течение 1 мин. при перемешивании стеклянной палочкой. После растворения в 0,2 или 0,3 мл 50% глицерина, должна представлять собой опалесцирующую жидкость от бело - серого до светло - желтого цвета без осадка и посторонних включений. Определяют визуально. (ОФС "Растворимость").

рН восстановленного препарата. От 6,5 до 7,5. Испытания проводят потенциометрическим методом по ОФС "Ионометрия".

Потеря в массе при высушивании. Не более 3%. Определение проводят по ОФС "Определение потери в массе при высушивании". На два параллельных испытания необходимо 0,15-0,20 г препарата.

Микробиологическая чистота. 1 мл вакцины должен содержать не более 50 микроорганизмов, в том числе аэробных и факультативных анаэробных бактерий и грибов; бактерии семейства Enterobacteriaceae, Pseudomonas aeruginosa, Staphilococcus aureus, патогенные анаэробные бактерии должны отсутствовать. Испытание проводят по ОФС "Микробиологическая чистота".

Аномальная токсичность. Вакцина должна быть нетоксичной. Испытание проводят в соответствии с ОФС "Аномальная токсичность" с учетом следующих дополнений:

Испытание проводят на пяти здоровых белых мышах массой 17-20 г и двух морских свинках массой тела 250-300 г.

Вакцину растворяют до первоначального объема, указанного на ампуле, стерильным раствором натрия хлорида 0,9% и вводят подкожно морским свинкам в объёме 1мл, белым мышам в объёме 0,2 мл. Наблюдение за животными проводят в течение 7 суток. Все животные должны оставаться живыми, признаки интоксикации и уменьшение массы тела должны отсутствовать. В случае гибели или появления признаков интоксикации или снижения массы тела у одного животного - испытание повторяют.

Вакцина выдерживает испытание, если ни одно животное из второй группы не погибнет, не появятся признаки интоксикации и не будет отмечено уменьшение массы тела.

Специфическая активность. Вакцина должна иметь активность не менее
 ООЕ/мл и не более  ООЕ/мл. Испытания проводят на хорионаллантоисных оболочках 12-дневных куриных эмбрионо в (КЭ) от кур породы "Леггорн", или "Роменбраун", или "Родонит-2", или "Изобраун", или "Хайсек", или пород кур, эмбрионы которых чувствительны к вирусу вакцины.

Примечание: куриные эмбрионы получают из хозяйств, свободных от вирусных и других возбудителей, патогенных для человека.

Подготовка куриных эмбрионов. Овоскопию куриных эмбрионов проводят в затемнённой комнате. Каждый эмбрион просматривают в направленном пучке света. Свет должен падать сверху на тупой конец КЭ. Бракуют КЭ с погибшим эмбрионом или имеющим кровоизлияния под оболочкой. В центре воздушного мешка и на боковой поверхности КЭ, на участке между сосудами и их ответвлениями карандашом делают отметку. В отмеченных местах пропиливают бормашиной с абразивным диском отверстия (щели) длиной 3-4 мм и шириной 1,5 мм, не повреждая оболочки. КЭ укладывают так, чтобы отверстие на боковой стороне было обращено вверх. На отверстие, расположенное на боковой поверхности, вносят 0,1 мл стерильного фосфатно-цитратного буферного раствора Мак-Ильвейна 0,004 М, подогретого до температуры °С, и той же иглой осторожно продавливают подскорлупную оболочку. После этого практически вся капля раствора проходит под подскорлупную оболочку и частично отслаивает хорионаллантоисную оболочку (ХАО).

Из отверстия в центре воздушного мешка резиновой грушей осторожно отсасывают воздух до полного опускания ХАО. КЭ с опущенной ХАО помещают на лотки отверстием вверх и инкубируют при температуре °С. Через 2 ч проводят овоскопию и бракуют эмбрионы с кровоизлияниями и имеющие воздушные мешки под ХАО или без искусственных воздушных мешков.

Приготовление десятикратных разведений. Для приготовления разведений используют стерильный ФЦБ. Готовят семь десятикратных разведений: в штатив устанавливают 7 пробирок, которые маркируют от до . В первую пробирку вносят 2 мл ФЦБ (для контроля вакцины разлитой по 0,1 мл) или 4 мл ФЦБ (для контроля вакцины разлитой по 0,2 мл). В последующие шесть пробирок вносят по 4,5 мл ФЦБ. Вскрывают две ампулы с вакциной и растворяют их содержимое в ФЦБ, взятом из первой пробирки с маркировкой . Полученный раствор из двух ампул переносят пипеткой в пробирки с маркировкой . Этой же пипеткой тщательно перемешивают раствор в пробирке и переносят 0,5 мл в пробирку с маркировкой , не касаясь пипеткой жидкости, после чего меняют пипетку. Аналогичным образом готовят последующие разведения до разведения , меняя пипетки после каждого разведения.

Для заражения эмбрионов используют разведения вакцины и . Каждое разведение вируса вводят на ХАО шести куриных эмбрионов по 0,1 мл в отверстие на боковой поверхности яйца. Круговым вращением яйца вирус равномерно распределяют по ХАО. Инокулированные эмбрионы инкубируют при температуре °С в течение 42 - 48 ч. Затем эмбрионы вскрывают, изолируют ХАО, промывают её в воде и подсчитывают число оспин на каждой ХАО. Контроль учитывают, если на 5 из 6 ХАО образовалось не менее чем по 10 типичных оспин. Специфическую активность вируса выражают в оспообразующих единицах в 1 мл (ООЕ/мл) и вычисляют по формуле:

Контроль специфической активности вакцины проводят одновременно с определением специфической активности ОСО вируса вакцины (ОСО 42-28-113-**) в соответствии с инструкцией по его применению.

Некротическая активность. Вакцина в дозе ООЕ/0,1 мл не должна вызывать некрозы при внутрикожном введении кроликам. Испытание проводят на 2 белокожих кроликах породы "Шиншилла" массой от 2,5 до 3,5 кг. Шерсть на боках в местах предполагаемых прививок удаляют. Для проведения испытания вакцину разводят стерильным ФЦБ до содержания и ООЕ в 0,1 мл. Каждое разведение вакцины вводят кролику по 0,1 мл в два места. Для проверки чувствительности кроликов к вирусу вакцины, тем же кроликам аналогичным образом на другом боку вводят по 0,1 мл растворов ОСО 42-28-113- ** вируса вакцины с концентрацией и ООЕ/0,1мл. Наблюдение за животными проводят в течение 4-5 суток. Учет результатов. В местах инъекций вируса в дозе ООЕ/0,1 мл не должны образовываться некрозы. Допустимо наличие ограниченных инфильтратов розового цвета. При появлении некрозов в дозе ООЕ/0,1 мл хотя бы у одного кролика и их отсутствие при введении стандартного образца - испытание повторяют. При развитии некрозов после повторного испытания хотя бы у одного кролика - вакцину бракуют. При наличии некрозов в опыте с ОСО - контроль повторяют.

Термостабильность. Вакцина должна быть термостабильной. Для проведения контроля вакцину прогревают при температуре °С в течение 28 суток. Затем проводят контроль специфической активности прогретых образцов вакцины с одновременным контролем ОСО вируса вакцины (см. специфическая активность оспенной вакцины). Вакцину считают термостабильной, если после прогревания она имеет специфическую активность не менее  ООЕ/мл.

Примечание: при необходимости экстренного контроля допускается прогревание вакцины при температуре °С в течение 5 ч.

Посторонние примеси. Содержание фенола - не более 0,25%. Фенол используют для обработки шкур телят. Определение проводят по ОФС "Определение фенола спектрофотометрическим методом".

Содержание хлоргексидина биглюконата - не более 0,05%. Хлоргексидин биглюконат может использоваться в качестве замены фенола для обработки шкур телят. Определение проводят спектрофотометрически.

Содержимое 10 ампул вакцины (разлитой по 0,1 мл) или 5 ампул вакцины (разлитой по 0,2 мл), растворяют в воде для инъекций и количественно переносят в мерную колбу вместимостью 100 мл, объем раствора доводят водой для инъекций до метки и перемешивают. Измеряют оптическую плотность полученного раствора на спектрофотометре в максимуме поглощения при длине волны 253 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм. В качестве раствора сравнения используют 5% раствор пептона (ГОСТ 13805 - 76 или фирмы "Difco", США, кат. N 0118 или фирмы "Merk", Германия, кат. N 1.07224 или другой, разрешенный к медицинскому применению), который перед спектрофотометрированием разводят водой для инъекций в 100 раз. Содержание хлоргексидина биглюконата в препарате (Х) в процентах вычисляют по формуле:

где:

Д - оптическая плотность испытуемого раствора;

330 - удельный показатель поглощения хлоргексидина биглюконата при длине волны 253 нм.

Растворитель, выпускаемый в комплекте с препаратом.

Растворитель - 50% раствор глицерина, готовят из глицерина на фосфатно-цитратном буферном растворе Мак - Ильвейна 0,004 М (ФЦБ).

Описание. Прозрачная бесцветная сиропообразная жидкость без запаха.

Подлинность. Должен давать характерную реакцию на трехатомный спирт. К 3 мл растворителя прибавляют 10 капель 10% раствора меди сульфата и 0,2 мл раствора натрия гидроокиси, должно появиться синее окрашивание, не изменяющееся при кипячении.

Количественное определение. Массовую долю глицерина в растворителе определяют по плотности в соответствии с ОФС "Плотность". Показатель плотности растворителя должен быть в пределах от 0,113 до 1,140 , что соответствует массовой доле глицерина 45 - 55%.

Стерильность. Должен быть стерильным. Испытание проводят методом прямого посева или методом мембранной фильтрации по ОФС "Стерильность".

рН. От 6,8 до 7,4. Испытания проводят потенциометрическим методом по ОФС "Ионометрия".

Маркировка и упаковка. В соответствии с ОФС "Иммунобиологические лекарственные препараты (средства)".

Транспортирование. При температуре от 2 до 8°С.

Хранение. В соответствии с ОФС "Иммунобиологические лекарственные средства".