Государственный стандарт качества лекарственного средства. Общая фармакопейная статья ОФС 42 - "Определение тиомерсала (мертиолята)"

Государственный стандарт качества лекарственного средства
Общая фармакопейная статья ОФС 42 -
"Определение тиомерсала (мертиолята)"

Вводится взамен метода,
изложенного в ФС 42-3874-99

Данная ОФС предназначена для количественного определения содержания тиомерсала колориметрическим методом, полярографическим методом и методом электротермической атомно-абсорбционной спектрометрии. Указанные методы предназначены для определения содержания тиомерсала (мертиолята) в сорбированных и несорбированных иммунобиологических лекарственных средствах (ИБЛС).

Колориметрический метод основан на выделении из тиомерсала ртути в виде свободных ионов и последующем колориметрическом определении дитизоната ртути.

Полярографический метод, основанный на полярографической активности мертиолята.

Метод электротермической атомно-абсорбционной спектрометрии (ЭААС)

Основные положения, оборудование, описание методики приведены в ОФС "Атомно-эмиссионная и атомно-абсорбционная спектрометрия", в разделе "Атомно-абсорбционная спектрометрия" (ААС).

Метод электротермической атомно-абсорбционной спектрометрии (ЭААС) для определения тиомерсала в ИБЛС вводится впервые. Метод основан на измерении оптической плотности атомного пара (ртути), получаемого при электротермической атомизации исследуемого образца. Сигнал максимального поглощения атомами ртути, прямо пропорционален концентрации тиомерсала в исследуемом образце. Содержание тиомерсала в испытуемом образце определяется по калибровочному графику.

Содержание тиомерсала в ИБЛС не должно превышать диапазона от 25 до 120 мкг/мл.

Колориметрический метод

Испытуемый образец помещают в колбу с притертой пробкой вместимостью 100 мл, прибавляют 1,2 мл разведенной кислоты серной концентрированной (при наличии сорбента - алюминия гидроксида, смесь осторожно нагревают на водяной бане постоянно помешивания до его полного растворения), добавляют 5 мл 5% раствора калия перманганата, перемешивают и оставляют на 1 час при комнатной температуре. Удаляют избыток калия перманганата, прибавляя 1,5 мл 20% раствора гидроксиламина сульфата, 30 мл воды и 5 мл 6 М раствора кислоты уксусной. Полученный раствор перемешивают, прибавляют 10 мл 0,001% раствора дитизона (точно отмеренный объем) и встряхивают в течение 30 с. Содержимое колбы переносят в делительную воронку и после разделения слоев, фильтруют нижний хлороформный слой через предварительно прокипяченную и высушенную вату в кювету с толщиной слоя 20 мм и измеряют оптическую плотность хлороформного раствора при 597 нм по сравнению с контрольным раствором, содержащим все вышеперечисленные компоненты, кроме испытуемого раствора.

Содержание тиомерсала (Х) в растворе в мкг/мл вычисляют по формуле:

, где

а - количество ртути, найденное по калибровочному графику, мкг;

100 - разведение испытуемого образца;

0,2 - количество испытуемого образца, мл;

49,55 - коэффициент пересчета ртути на тиомерсал.

Построение калибровочного графика. К 0,4; 0,6; 0,8; 1,0; 1,2 мл стандартного раствора N 2 прибавляют 1,2 мл разведенной кислоты серной, 30 мл воды очищенной, 5 мл 0,9% раствора натрия хлорида, 5 мл 6 М раствора уксусной кислоты и перемешивают (содержание ртути 4; 6; 8; 10; 12 мкг). Далее определение проводят, по методике, указанной выше. Калибровочный график воспроизводят при каждом анализе.

Одновременно с испытуемым образцом для подтверждения правильности методики проводят анализ отраслевого стандартного образца (СО) "Содержание мертиолята в сорбированных препаратах". Анализ СО проводят при каждом определении.

Примечания.

Испытуемый раствор. 0,2 мл раствора испытуемого образца, приготовленного, как указано в частной фармакопейной статье.

Основной стандартный раствор ртути металлической 1 мг/мл. (Раствор N 1). 0,5 г металлической ртути (точная навеска) помещают в мерную колбу вместимостью 500 мл, растворяют в 15 мл концентрированной азотной кислоты, доводят объем раствора водой до метки и перемешивают.

Для определения содержания ртути отмеряют 10 мл стандартного раствора N 1, прибавляют 0,5 мл 10% раствора железоаммонийных квасцов и медленно титруют 0,01 М раствором аммония роданида до оранжевого окрашивания раствора.

Содержание ртути в мг/мл вычисляют по формуле:

, где

V - объем раствора аммония роданида, мл;

0,001003 - количество ртути, соответствующее 1 мл 0,01 М раствора аммония роданида, г;

10 - объем испытуемого образца, мл.

Раствор хранят в течение 3 месяцев при температуре 18 - 25°С в вытяжном шкафу в специально отведенном месте.

Стандартный раствор ртути металлической 10 мкг/мл. (Раствор N 2) 1 мл стандартного раствора N 1 помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, доводят объем раствора водой очищенной до метки и перемешивают.

Стандартный образцец (СО) "Содержание мертиолята в сорбированных препаратах" с разным диапазоном содержания мертиолята в пределах от 20 до 120 мкг/мл.

Приготовление 5% раствора калия перманганата.

50 г калия перманганата растворяют в конической колбе в 700 мл горячей воды, охлаждают и переносят в мерную колбу вместимостью 1000 мл, доводят объем раствора водой до метки и перемешивают. Раствор хранят при температуре 4 - 8°С в течение 3 месяцев.

Приготовление 0,001% раствора дитизона.

10 мг дитизона (точная навеска) помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, растворяют в хлороформе, доводят объем раствора хлороформом до метки и перемешивают. Раствор хранят в темном месте при температуре 4 - 8°С в течение месяца.

Перед использованием 10 мл раствора помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, доводят объем раствора хлороформом до метки и перемешивают. Раствор используют свежеприготовленным.

Измеряют оптическую плотность полученного раствора при длине волны 597 нм, в кюветах с толщиной слоя 10 мм по сравнению с контрольным раствором (вода очищенная). Диапазон колебаний показаний оптической плотности от среднего значения не должен превышать .

Приготовление 20% раствора гидроксиламина сульфата

100 г гидроксиламина сульфата растворяют в воде в мерной колбе вместимостью 500 мл, доводят объем раствора водой до метки и перемешивают. Раствор хранят при температуре 4 - 8°С в течение 6 месяцев.

Приготовление 6 М раствора уксусной кислоты

340 мл кислоты уксусной вносят в мерную колбу вместимостью 1000 мл, доводят объем раствора водой до метки и перемешивают. Раствор хранят при комнатной температуре в течение 6 месяцев.

Приготовление серной кислоты разведенной

В коническую колбу вместимостью 250 мл вносят 100 мл воды и осторожно при постоянном перемешивании прибавляют 100 мл концентрированной кислоты серной. Работу следует проводить в вытяжном шкафу, соблюдая технику безопасности. Раствор хранят при комнатной температуре в течение 6 месяцев.

Приготовление 0,1 М раствора аммония роданида (Раствор А)

Раствор готовят из 0,1H стандарт-титра (фиксанала) в мерной колбе вместимостью 1000 мл согласно инструкции по приготовлению. Раствор хранят при температуре 4 - 8°С в течение 6 месяцев.

Приготовление 0,01 М раствора аммония роданида (Раствор В)

В мерную колбу вместимостью 50 мл вносят 5 мл раствора А и доводят объем водой очищенной до метки. Раствор готовят при каждом определении.

Приготовление раствора азотной кислоты разведенной

В коническую колбу вместимостью 250 мл вносят 100 мл воды и осторожно при постоянном перемешивании прибавляют 72 мл концентрированной азотной кислоты. Раствор хранят при комнатной температуре в течение 6 месяцев.

Приготовление 10% раствора железоаммонийных квасцов

10 г железоаммонийных квасцов растворяют в 90 мл воды и прибавляют разведенной азотной кислоты до перехода коричневой окраски в желтовато-зеленую. В случае необходимости раствор фильтруют.

Полярографический метод

К испытуемому раствору прибавляют 0,5 мл 2 М раствора калия хлорида. Пробу помещают в электролизер, термостатируемый при температуре 19 - 21°С. Через испытуемый раствор пропускают газообразный азот в течение 10 - 15 мин. Ртутный капельный электрод опускают в электролизер и снимают полярограмму на полярографе с регистрирующим устройством в области потенциала от 0,2 до 1,0 В (внутренний анод).

Содержание тиомерсала в препарате в мкг/мл рассчитывают по формуле:

, где

а - концентрация мертиолята в испытуемом растворе, рассчитанная по калибровочному графику, мкг/мл;

5,0 - общий объем пробы, мл;

4,5 - количество испытуемого раствора, взятое на анализ, мл.

Построение калибровочного графика. К 1,0; 1,5; 2,0; 2,5; 3,0; 3,5; 4,0; 4,5 мл стандартного раствора тиомерсала N 2 (150 мкг/мл тиомерсала) прибавляют 0,5 мл 2 М раствора калия хлорида, доводят общий объем водой до 5 мл (концентрация тиомерсала: 30, 45, 60, 75, 90, 105, 120, 135 мкг/мл) и перемешивают. Определение проводят как указано выше.

На полученных полярограммах строят калибровочный график, откладывая среднее значение высоты волны на оси ординат (OY), а на оси абсцисс (ОХ) - соответствующее значение концентрации тиомерсала в мкг/мл.

Калибровочный график пригоден неограниченное время для данного капилляра при постоянных условиях определения (температура, время каплеобразования).

Тиомерсал, используемый для приготовления стандартного раствора N 1, должен соответствовать требованиям, указанным в разделе "Методы оценки качества тиомерсала (мертиолята)"

Приложения

Испытуемый раствор. 4,5 мл раствора испытуемого образца, приготовленного, как указано в частной фармакопейной статье.

Стандартный раствор тиомерсала 15 мг/мл (N 1). 1,50 г тиомерсала (точная навеска) помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, растворяют в воде и доводят объем раствора водой очищенной до метки. Раствор хранят при температуре 4 - 8°С в течение 3 месяцев.

Стандартный раствор тиомерсала 150 мкг/мл (N 2). Перед определением 1 мл стандартного раствора тиомерсала N 1 помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, доводят объем раствора водой очищенной до метки и перемешивают.

Приготовление 2 М раствора калия хлорида.

149,1 г калия хлорида вносят в мерную колбу вместимостью 1000 мл, доводят объем раствора водой очищенной до метки и перемешивают. Раствор хранят при комнатной температуре в течение 6 месяцев.

Метод электротермической атомно-абсорбционной спектрометрии

Анализ проводят в соответствии с инструкцией по эксплуатации прибора - электротермического атомно-абсорбционного спектрометра.

Испытуемый образец, приготовленный, как указано в частной фармакопейной статье, вносят в отверстие графитовой трубки прибора и измеряют оптическую плотность образцов при длине волны 253,7 нм в следующей последовательности; вода очищенная (контрольный раствор), калибровочные растворы (в порядке увеличения измеряемой концентрации), стандартный образец "Содержание мертиолята в сорбированных препаратах" и разведенный испытуемый образец. Анализ испытуемых образцов в указанной последовательности проводят не менее трех раз.

Содержание тиомерсала (мертиолята) в испытуемом образце в мкг/мл рассчитывают по калибровочному графику с помощью программного обеспечения к прибору с учетом разведения испытуемого образца.

Построение калибровочного графика. Отбирают 0,1; 0,2; 0,3; 0,4; 0,5; 0,6 мл стандартного раствора тиомерсала N 4 (2 мкг/мл), доводят объем растворов водой очищенной до 1 мл и перемешивают (концентрация тиомерсала: 0,2; 0,4; 0,6; 0,8; 1,0; 1,2 мкг/мл). Строят калибровочный график, откладывая по оси абсцисс количество мертиолята в мкг/мл, а по оси ординат - среднее значение оптической плотности атомного пара ртути. Калибровочный график воспроизводят при каждом определении.

Метод электротермической атомно-абсорбционной спектрометрии применим для ИБЛС с содержанием тиомерсала от 20 до 120 мкг/мл, а также для анализа остаточного содержания тиомерсала.

Приложения

Испытуемый раствор. Испытуемый раствор разводят водой очищенной до 0,3-0,6 мкг/мл тиомерсала или, как указано в частной фармакопейной статье.

Основной стандартный раствор тиомерсала 1 мг/мл (Раствор N 3). 100 мг тиомерсала (точная навеска) помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, растворяют в воде очищенной, доводят объем раствора водой до метки и перемешивают. Раствор хранят в склянке из темного стекла с притертой пробкой при температуре 4 - 8°С в течение 1 месяца.

Стандартный раствор тиомерсала 2 мкг/мл (Раствор N 4). К 20 мкл стандартного раствора N 3 прибавляют 9,98 мкл воды очищенной и перемешивают. Раствор хранят в склянке из темного стекла с притертой пробкой при температуре 4 - 8°С в течение 3 дней.

Стандартный образец (СО) "Содержание мертиолята в сорбированных препаратах" с диапазоном содержания мертиолята от 20 до 120 мкг/мл. СО разводят водой очищенной, до концентрации от 0,20 до 0,6 мкг/мл, как указано в частной фармакопейной статье, отбирают соответственно по 10 или 20 мкл СО, прибавляют 990 или 980 мкл воды очищенной и перемешивают. Раствор СО используют свежеприготовленным в день проведения анализа.

Методы оценки качества тиомерсала (мертиолята)

О-этилртутьтиосалицилат натрия М.м. 404,8

Описание. Белый с легким кремовым оттенком порошок со слабым характерным запахом.

Растворимость. 1 г реактива без остатка растворяется при температуре 18 - 22°С в 1 мл воды, а также в 35 мл спирта. Раствор должен быть бесцветным или светло-желтым. Препарат почти не растворим в бензоле и эфире.

рН 6,0 - 8,0. Используют 1% раствор на свежепрокипяченной воде. Определение проводят потенциометрически по ОФС "Ионометрия".

Подлинность. 0,05 г реактива растворяют в 5 мл воды. К раствору прибавляют 1,0 мл 10% раствора меди сульфата. Образуется осадок зеленого цвета.

0,5 г реактива растворяют в 10 мл воды и прибавляют 1 мл 2 М раствора кислоты хлористоводородной. Выделившийся осадок отфильтровывают на воронке Бюхнера и промывают водой до исчезновения хлорид ионов. Осадок, высушенный в присутствии фосфора (V) оксида при давлении не более 0,667 кПа (5,0 мм рт.ст.) и комнатной температуре до постоянной массы, имеет температуру плавления 110°С.

Ртутные соли. 0,1 г реактива растворяют в 5 мл воды. К раствору прибавляют 1 мл 5% свежеприготовленного раствора натрия сульфида. Выпавший осадок не должен изменять цвета при выдерживании в темном месте в течение 30 мин.

Растворимые в эфире вещества. 0,5 г реактива (точная навеска) встряхивают с 20 мл эфира в течение 10 мин, фильтруют через плотный фильтр. После испарения эфира остаток, высушенный в течение 22 - 24 ч в присутствии фосфора (V) оксида при давлении не более 0,667 кПа (5,0 мм рт.ст.) и комнатной температуре, должен весить не более 4 мг.

Потеря в массе при высушивании. 0,5 г реактива высушивают в течение 24 ч в присутствии фосфора (V) оксида до постоянной массы. Потеря в массе при высушивании не должна превышать 0,5%. Определение проводят по ОФС "Потеря в массе при высушивании".

Количественное определение. 0,3 г реактива (точная навеска) растворяют в 10 мл воды, прибавляют 1,5 г растертого калия перманганата и хорошо перемешивают. Через 5 мин в колбу осторожно прибавляют при постоянном перемешивании по каплям 5 мл кислоты серной концентрированной.

Через 5 - 10 мин образовавшийся осадок растворяют при постепенном прибавлении 4 - 8 мл 3% раствора водорода пероксида. К обесцвеченному раствору прибавляют по каплям 5% раствор калия перманганата до исчезающего розового окрашивания. Раствор вновь обесцвечивают добавлением по каплям 4% раствора кислоты щавелевой. Полученный раствор после прибавления 5 мл 10% раствора железоаммонийных квасцов медленно титруют 0,1 М раствором аммония роданида до изменения окраски. 1 мл 0,1 М раствора аммония роданида соответствует 0,02024 г тиомерсала (мертиолята).

Высушенный в присутствии фосфора (V) оксида реактив должен содержать не менее 98% и не более 101% тиомерсала (мертиолята).

Хранение. ЯД! Хранят в банке с притертой пробкой, в защищенном от света сейфе.

Реактив подвергают контролю 1 раз в 3 месяца.

Если тиомерсал не соответствует одному из перечисленных требований, его бракуют.