Государственный стандарт качества лекарственного средства. Фармакопейная статья ФС 42- "Тетра-(три-)анатоксин адсорбированный"

Государственный стандарт качества лекарственного средства
Фармакопейная статья ФС 42-
"Тетра-(три-)анатоксин адсорбированный"

Вводится впервые

Данная фармакопейная статья распространяется на иммунобиологическое лекарственное средство Тетра-(три-) анатоксин адсорбированный, который представляет собой смесь ботулинических типов А, В и Е (трианатоксин) и столбнячного (тетраанатоксин) анатоксинов, адсорбированных на алюминия гидроксиде или другом, разрешенном к применению, минеральном сорбенте, предназначенное для профилактики ботулизма и столбняка.

Производство

Ботулинические анатоксины типов А, В и Е и столбнячный анатоксин

получают путем детоксикации соответствующих токсинов.

Для получения ботулинических и столбнячного токсинов используют высокотоксигенные штаммы Clostridium botulinum типов А, В и Е и Clostridium tetani, полученные и депонированные в официальной коллекции. Микробные клетки культивируют на жидких питательных средах, обеспечивающих высокую степень токсинообразования. Методы детоксикации ботулинических и столбнячных экзотоксинов должны обеспечивать сохранение антигенной активности полученных анатоксинов и гарантировать их безопасность: отсутствие остаточной токсичности и реверсии токсических свойств. Ботулинические и столбнячный анатоксины должны быть максимально очищены от балластных примесей.

Прививочная доза трианатоксина (1 мл) содержит 5 ЕС ботулинического анатоксина типа А и по 3 ЕС ботулинических анатоксинов типов В и Е. Прививочная доза (1 мл) тетраанатоксина наряду с указанными компонентами содержит 2,5 ЕС столбнячного анатоксина. В состав лекарственного средства может входить антимикробный консервант тиомерсал (мертиолят).

Испытания

Описание

Мутная жидкость белого или белого с сероватым или желтоватым оттенком цвета. При отстаивании разделяется на рыхлый осадок белого или белого с сероватым или желтоватым оттенком цвета, легко разбивающийся при встряхивании, и прозрачную бесцветную надосадочную жидкость.

Подлинность

Должен содержать ботулинические типов А, В и Е (трианатоксин) и столбнячный (тетраанатоксин) анатоксины, обладающие специфической активностью, обеспечивая защиту от действия соответствующих токсинов. (См. раздел "Специфическая активность"). В частных фармакопейных статьях могут быть указаны альтернативные методы, подтверждающие наличие в лекарственном средстве ботулинических и столбнячного анатоксинов.

Механические включения

Видимые механические включения должны отсутствовать. Определение проводят в соответствии с ОФС "Видимые механические включения в лекарственных формах для парентерального применения и глазных лекарственных формах".

рН

От 6,0 до 7,0, если в частной статье нет других указаний. Испытания проводят потенциометрическим методом с неразведенным тетра-(три-) анатоксином в соответствии с ОФС "Ионометрия".

Стерильность

Должен быть стерильным. Испытания проводят методами прямого посева или мембранной фильтрации в соответствии с ОФС "Стерильность"

Аномальная токсичность

Должен быть нетоксичным. Испытания проводят в соответствии с ОФС "Аномальная токсичность". Белым мышам препарат вводят внутрибрюшинно по 1 мл, морским свинкам массой тела 250-350 г - подкожно по 5,0 мл (по 2,5 мл в оба бока).

Специфическая безопасность

Должен быть безопасным. Испытания проводят при подкожном введении 5 морским свинкам массой  г 5 прививочных доз для человека (по 2,5 мл в оба бока). Через 21 сут все животные должны остаться живыми без признаков специфической интоксикации.

Специфическая (иммуногенная) активность

Должен обладать иммуногенной активностью в отношении каждого из анатоксинов, входящих в его состав. Выживаемость иммунизированных мышей при летальном заражении должна составлять не менее 70% для каждого компонента препарата. Условия проведения испытания по оценке иммуногенной активности компонентов препарата представлены в таблице 1.

Испытания специфической активности ботулинических анатоксинов типов А, В и Е тетра-(три-) анатоксина проводят на мышах линии BALB/c массой тела  г, столбнячного анатоксина - на белых беспородных мышах той же массы тела. Иммунизацию для оценки специфической активности ботулинических анатоксинов проводят внутрибрюшинно,

Таблица 1 - Схема опыта по испытанию специфической (иммуногенной) активности тетра-(три-) анатоксина

Компоненты тетра-(три-) анатоксина	Иммунизирующая доза		Разрешающая доза токсина/ способ введения
	ЕС	мл
Анатоксин ботулинический типа А	5	1,0	25 /внутривенно
Анатоксин ботулинический типа В	1,2	0,4	50 /внутривенно
Анатоксин ботулинический типа Е	1,2	0,4	25 /внутривенно
Анатоксин столбнячный	2,0	0,8	100 /подкожно

столбнячного анатоксина - подкожно, в область внутренней поверхности верхней трети бедра группам не менее чем из 10 животных. Разрешающие дозы токсинов вводят животным спустя 21 сут после иммунизации. Опыты сопровождают контролем активности токсинов, вводя по 0,5, 1,0 и 2 каждого токсина не менее чем 4 животным из той же партии. Результаты оценивают ежедневно в течение 4 сут. Результаты опыта учитывают, если при контроле активности токсинов введение дозы 2 вызвало гибель 100%, а дозы, равной 1 - не менее 50% мышей к концу срока наблюдения.

Полнота сорбции

В 1 мл надосадочной жидкости содержание неадсорбированного ботулинического анатоксина типа А должно быть не более 0,25 ЕС, типов В и Е - 0,15 ЕС, неадсорбированного столбнячного анатоксина - не более 0,1 ЕС, если нет других указаний в частной фармакопейной статье. Полноту сорбции определяют путем индикации неадсорбированных ботулинических и столбнячного анатоксинов в надосадочной жидкости тетра-(три-) анатоксина. Определение проводят в соответствии с ОФС "Определение концентрации анатоксинов в реакции антитоксинсвязывания".

Формальдегид

Не более 100 мкг/мл. Определение проводят колориметрическим методом в соответствии с ОФС "Определение формальдегида".

Производственные штаммы микроорганизмов

Раздел должен содержать следующую информацию: наименование штаммов; место их депонирования; допустимое количество пассажей (при необходимости) и методику их проведения с указанием условий культивирования; при необходимости дополнительные к паспортным данным требования к характеристикам штаммов.

Консерванты

В качестве консерванта используют тиомерсал (мертиолят). Определение проводят в соответствии с ОФС "Определение тиомерсала". Концентрация консерванта не должна быть ниже минимально эффективной и не превышать указанную на упаковке более чем на 15% .

Сорбенты

Алюминия гидроксид. Содержание алюминия гидроксида (по алюминию) должно быть не более 1,2 мг/мл, если в частной фармакопейной статье нет других указаний. Определение проводят комплексонометрическим методом в соответствии с ОФС "Комплексонометрическое титрование".

Извлекаемый объем

Не менее номинального. Определение проводят в соответствии с ОФС "Извлекаемый объем лекарственных форм для парентерального применения".

Упаковка и маркировка

В соответствии с ОФС "Иммунобиологические лекарственные препараты (средства). На первичную упаковку наносят дополнительное указание "Встряхивать!". На вторичную упаковку наносят дополнительные указания "Перед употреблением встряхивать", "Замораживание не допускается".

Транспортирование и хранение

Тетра-(три-) анатоксин должен транспортироваться и храниться при температуре от 2 до 8°С.