Государственный стандарт качества лекарственного средства. Фармакопейная статья ФС - 42 "Вакцина паротитная культуральная живая"

Государственный стандарт качества лекарственного средства
Фармакопейная статья ФС - 42
"Вакцина паротитная культуральная живая"

Вводится впервые

Вакцина паротитная культуральная живая (лиофилизат для приготовления раствора для подкожного введения) представляет собой препарат, содержащий аттенуированный вакцинный штамм вируса паротита Ленинград-3 (Л-3), выращенный на первичной культуре фибробластов эмбрионов перепелов (ФЭП). Вакцину восстанавливают непосредственно перед применением. Восстановленный препарат представляет собой прозрачную жидкость, которая может быть окрашена вследствие присутствия рН индикатора.

Введение вакцины приводит к развитию специфического иммунитета, который обеспечивает защиту от заболевания эпидемическим паротитом. Вакцина предназначена для плановой и экстренной профилактики эпидемического паротита.

Производство

Производство вакцины паротитной культуральной живой основано на системе посевных вирусов и использовании в качестве субстрата для накопления вируса первичной культуры ФЭП.

Состав:

Одна прививочная доза препарата (0,5 мл ) содержит:

- активный компонент: вирус паротита - не менее 20 000 (4,3 lg) тканевых цитопатогенных доз ();

- вспомогательные вещества: стабилизатор, состав и количество которого указывают в частной фармакопейной статье, и антибиотик - гентамицина сульфат - не более 20 мкг, если нет других указаний в частной фармакопейной статье.

Все этапы производственного процесса должны быть валидированы.

Производственный штамм

- вирусосодержащая жидкость, приготовленная путем пассирования вакцинного штамма вируса паротита в производственном клеточном субстрате и применяемая для производства вакцины. Производственный штамм должен быть идентифицирован с помощью документов, которые должны включать сведения о происхождении штамма , методе аттенуации и уровне пассажа, на котором аттенуация была подтверждена результатами клинических испытаний.

С помощью соответствующих лабораторных методов и клинических испытаний на восприимчивых к эпидемическому паротиту людях должно быть доказано, что штамм вируса эпидемического паротита, используемый в производстве вакцины, безопасен и иммуногенен.

Каждая новая серия производственного штамма должна быть специфична, бактериологически стерильна, не должна содержать микоплазм,* микобактерий и посторонних вирусов; обладать репродуктивной активностью, вызывать специфическую дегенерацию в чувствительных культурах клеток; не обладать аномальной токсичностью.

Примечание:

* Испытание на присутствие микоплазм производственного штамма, посевного вируса, производственного и рабочих банков клеточной культуры, сыворотки крупного рогатого скота должно проводиться двумя методами: цитохимическим и микробиологическим. Испытание на присутствие микоплазм вирусных сборов, нерасфасованной вакцины и готового продукта следует проводить одним микробиологическим методом.

Посевной вирус

- вируссодержащая жидкость, полученная путем однократного пассирования промежуточного пассажа на производственном субстрате. Служит в качестве посевного материала для изготовления вакцины. Посевной вирус должен обладать теми же характеристиками, что и штамм, из которого он получен. Каждая серия посевного вируса должна быть идентифицирована как вирус эпидемического паротита с помощью соответствующих методов. Методы культивирования должны обеспечивать сохранение иммуногенных свойств готового препарата, его безопасность и предотвращать контаминацию посторонними вирусами, бактериями, грибами и микоплазмами.

Каждая новая серия производственного штамма и посевного вируса не должны обладать остаточной нейровирулентностью и контагизностью, определение которых проводят в тесте на обезьянах по ОФС "Оценка специфической безопасности производственных штаммов и посевных серий вирусов кори, паротита и краснухи".

Пассажный уровень вируса в готовом препарате должен быть ограничен. Допускается пассирование производственного штамма и посевных вирусов в культуре ФЭП с таким расчетом, чтобы готовая вакцина содержала вирус, прошедший не более 10 пассажей от вакцинного штамма.

Особое внимание уделяют обеспечению стабильности таких параметров, как множественность заражения и условия культивирования (продолжительность и температура инкубации).

Рекомендуется хранить большой объем серии посевного вируса в качестве основного материала, который изготовитель должен использовать для производства отдельных партий вакцины. Серии посевного вируса в лиофилизированном виде следует хранить при температуре ниже минус 20°С, а в нелиофилизированном виде - при температуре ниже минус 60°С.

Рекомендуется оценивать генетическую стабильность новых серий производственного штамма и посевных серий вируса паротита. Сравнительный анализ секвенированных последовательностей генома указанных производственных материалов вируса паротита должен подтвердить их идентичность структуре вакцинного штамма.

Клеточный субстрат, используемый для производства

Субстратом для размножения и накопления вируса паротита является первичная культура ФЭП. Оплодотворенное перепелиное яйцо должно быть получено от птиц, которые содержатся в изолированных сертифицированных хозяйствах, свободных от микроорганизмов, патогенных для птиц. Птиц в этих хозяйствах постоянно контролируют на отсутствие аденовируса птиц 1-ой, 3-ей и 4-ой групп, энцефаломиелита птиц, гриппа птиц типа А, парамиксовируса, реовируса, пневмовируса, оспы и туберкулеза птиц, вируса анемии цыплят, инфекционного бронхита, бурсита и ларинготрахеита, лейкоза и микоплазмоза птиц, вирусов лимфоидного лейкоза, болезни Марека и Ньюкастля, гемофиллеза, сальмонеллеза, пастереллеза , орнитоза и др.

При культивировании клеток не допускается использование нативной сыворотки крови человека.

Питательная среда для клеток может содержать рН индикатор, например, феноловый красный, а также разрешенные антибиотики в минимальной эффективной концентрации. Не допускается использование пенициллина и стрептомицина.

Материалы от животных, которые используют при производстве вакцины, получают из хозяйств, благополучных в отношении бактериальных, вирусных, прионовых и других заболеваний, патогенных для человека. Сыворотка крови крупного рогатого скота должна быть получена от животных из стада, в котором, согласно выданному сертификату, отсутствуют такие заболевания, как спонгиформная энцефалопатия и лейкоз крупного рогатого скота. Трипсин, используемый для приготовления клеточной культуры, не должен содержать микоплазм, цирко- и парвовирусов свиней, а также должен быть испытан на отсутствие контаминации бактериями и грибами.

Вещества, вносимые в препарат.

К веществам, вносимым в препарат, относят сыворотку крови крупного рогатого скота, которая используется для выращивания клеточной культуры. Сыворотка должна быть испытана на отсутствие контаминации вирусами, бактериями, грибами, микоплазмами.

Сыворотка крови животных должна быть удалена после инокуляции культуры клеток посевным вирусом. Перед сбором вируса культуру клеток отмывают, и ростовую среду заменяют бессывороточной поддерживающей средой. Наличие остаточного количества бычьего сывороточного альбумина (БСА) строго регламентировано и не должно превышать 50 нг в одной прививочной дозе (0,5 мл). Если готовая нерасфасованная вакцина выдерживает испытание на БСА, то его контроль может не проводиться на серии готового продукта. Определение проводят подходящим иммунохимическим методом.

Испытания на этапах производства

В процессе производства проводят исследование на отсутствие контаминантов в культуральной жидкости, собранной с культур контрольных клеток, в образцах индивидуальных вирусных сборов и в образцах объединенных вирусных сборов. Индивидуальные вирусные сборы контролируют на стерильность и специфическую активность. Объединенные вирусные сборы контролируют на стерильность, присутствие микоплазм, микобактерий, содержание белка, интактных клеток, специфическую активность. В готовой жидкой нерасфасованной вакцине проводится контроль содержания БСА, специфической активности, стерильности, присутствия микоплазм.

Все исходные материалы и сырье, используемое при производстве, должны иметь сертификаты соответствия.

При производстве вакцины особое значение имеет постоянное выполнение на всех этапах производства внутрипроизводственного анализа основных показателей качества и анализа качества готовой продукции при выпуске.

Испытания готового продукта.

Описание. Лиофилизат - однородная пористая масса розового цвета. Определение проводят визуально.

Подлинность. Препарат должен содержать вирус паротита. Определяют в реакции нейтрализации на культуре клеток Vero. Подлинность вируса паротита в вакцине устанавливают на основании нейтрализации цитопатогенного действия вируса паротита специфической иммунной сывороткой, содержащей антитела к вирусу паротита. В реакции используют аттестованный стандартный образец паротитных антител.

Время растворения. Вакцина должна растворяться в течение 3 мин при внесении в ампулу 0,5 мл растворителя для паротитной вакцины на дозу. Определение проводят визуально.

Прозрачность и цветность. Восстановленный препарат - прозрачная жидкость, которая может быть окрашена вследствие присутствия рН-индикатора. Цветность восстановленного препарата указывают в частной фармакопейной статье. Определение проводят визуально.

Механические включения. Восстановленный препарат не должен содержать видимых механических включений. Определение проводят в соответствии с ОФС "Видимые механические включения в лекарственных формах для парэнтерального применения и в глазных лекарственных формах"

рН восстановленного препарата. От 7,2 до 7,8, если нет других указаний в частной фармакопейной статье. Определение проводят потенциометрическим методом в соответствии с ОФС " Ионометрия".

Потеря в массе при высушивании. Не более 2%. Определение проводят весовым методом в соответствии с ОФС "Потеря в массе при высушивании".

Бычий сывороточный альбумин. Не более 50 нг в одной прививочной дозе. Определение проводят подходящим иммунохимическим методом, указанным в частной фармакопейной статье. Если готовая нерасфасованная вакцина выдерживает испытание на бычий сывороточный альбумин, то оно может не проводиться на серии готового продукта.

Стерильность. Препарат не должен содержать бактерий и грибов. Определяют методом прямого посева или мембранной фильтрации с использованием одной тиогликолевой среды при двух температурных режимах в соответствии с ОФС "Стерильность"

Присутствие микоплазм. Препарат не должен содержать микоплазм. Определяют микробиологическим методом, который описывается в частной фармакопейной статье. Если в испытаниях на присутствие микоплазм сырья и материалов при входном контроле и на всех контрольных точках в технологическом процессе контаминация микоплазмами надлежащими методами не обнаружена, то испытание готовой серии препарата на присутствие микоплазм может не проводиться.

Аномальная токсичность. Препарат должен быть нетоксичным. Испытание проводят биологическим методом на белых мышах и на морских свинках обоего пола. Животным вводят по одной прививочной дозе препарата в объеме 0,5 мл внутрибрюшинно, если нет других указаний в частной фармакопейной статье. Определение проводят по ОФС "Аномальная токсичность".

Специфическая активность. Прививочная доза (0,5мл) должна содержать не менее 20000 (4,3 lg) вируса паротита. Титр вируса определяют в каждой из 5 ампул каждой серии готового препарата раздельно по ЦПД вируса на культуре клеток Vero. Каждый образец вакцины должен иметь специфическую активность не ниже регламентированной, в противном случае проводят повторный контроль специфической активности дополнительных 5 образцов, результат которого считают окончательным. Минимально регламентированное содержание вируса в прививочной дозе должно сохраняться в течение всего срока годности.

Одновременно с определением титра вируса в образцах серии проводят титрование стандартного образца (СО) активности вируса паротита. Одну ампулу стандартного образца титруют три раза для подтверждения достоверности каждого количественного определения активности.

Учет результатов проводят по ЦПД с помощью инвертированного микроскопа (увеличение: объектив 10x - окуляр 10x) в сроки, указанные в частной фармакопейной статье. Наибольшее разведение вакцины, вызывающее ЦПД в 50% лунок с зараженной клеточной культурой, принимают за титр вируса. Титр вируса в вакцине рассчитывают по методу Рида и Менча или Спирмена-Кербера. При титровании вакцины в лунки планшетов вносят по 0,1 мл каждого разведения вакцины, т.е. объем, в 5 раз меньший, чем прививочная доза. Для расчета активности вируса в прививочной дозе к титру вируса, рассчитанному в lg /0,1мл, добавляют постоянную величину, равную lg 5, т.е. 0,7.

Критерии приемлемости результатов:

- доверительный интервал (Р=0,95) среднего значения титра СО, определенного при трехкратном титровании 1 ампулы, не должен превышать lg ;

- титр вируса в СО не должен отличаться более, чем на 0,5 lg от аттестационного значения.

Термостабильность. Препарат должен быть термостабильным. Испытание проводят, определяя специфическую активность при одновременном титровании 5 образцов вакцины, инкубированных при температуре °С в течение 7 сут и 5 образцов вакцины, хранившихся при температуре от 2 до 8°С.

Препарат считают прошедшим испытание, если средняя геометрическая величина титра вируса образцов после прогревания снижается не более, чем на 1 lg .

Производственный штамм. Производственный штамм вируса паротита готовят из вакцинного штамма Л-3, который депонирован в официальной Государственной коллекции.

Производственный штамм должен отвечать следующим требованиям:

- быть специфичным; обладать генетической стабильностью;

- иметь специфическую активность не ниже  мл;

- быть бактериологически стерильным, не содержать микоплазм, микобактерий и посторонних вирусов;

- должен обладать репродуктивной активностью: вызывать специфическую дегенерацию в чувствительных культурах клеток, сопровождающуюся накоплением вируса в питательной среде;

- не быть токсичным;

- не быть нейровирулентным при интрацеребральном введении обезьянам; отсутствие нейровирулентности подтверждается клиническими и патогистологическими данными;

- не быть контагиозным;

- должен храниться в лиофилизированном виде при температуре минус °С

- потеря в массе при высушивании должна быть не более 2%.

Гентамицина сульфат. Не более 20 мкг в одной прививочной дозе, если нет других указаний в частной фармакопейной статье. Определение проводят в каждой из 3-х ампул вакцины методом диффузии в агар в соответствии с ОФС "Определение антимикробной активности антибиотиков методом диффузии в агар", с использованием тест-микроорганизма Вас. Рumilus NCTC 8241. Содержимое ампулы растворяют при внесении 0,5 мл растворителя для вакцины на дозу.

При использовании другого антибиотика приводят указания в частной фармакопейной статье.

Упаковка и маркировка. В соответствии с ОФС "Иммунобиологические лекарственные препараты (средства). Дополнительная информация: субстрат культивирования вируса и предупредительные надписи: "Хранить при температуре от 2 до 8°С в недоступном для детей месте", "Избегать контакта вакцины с дезинфицирующими средствами".

Транспортирование и Хранение. При температуре от 2 до 8°С.