Государственный стандарт качества лекарственного средства. Общая фармакопейная статья ОФС "Пробиотики, содержащие лактобактерии для медицинского применения"

Государственный стандарт качества лекарственного средства
Общая фармакопейная статья ОФС
"Пробиотики, содержащие лактобактерии для медицинского применения"

Вводится впервые

Данная общая фармакопейная статья распространяется на группу лекарственных средств - пробиотики, содержащие лактобактерии для медицинского применения (далее по тексту "лактосодержащие пробиотики").

Лактосодержащие пробиотики представляют собой биомассу живых бактерий рода Lactobacillus лиофильно высушенную в защитной среде сахарозо-желатиновой или сахарозо-желатино-молочной.

Лактосодержащие пробиотики по составу подразделяются:

- монокомпонентные - полученные, на основе одного производственного штамма лактобактерий (например, L.plantarum 8Р-А3 или L.acidophilus La CH-2);

- поликомпонентные - полученные, на основе нескольких производственных штаммов бактерий рода Lactobacillus, принадлежащих к одному виду (например, L.acidophilus 100аш, L.acidophilus NK и L.acidophilus К3Ш24), или к разным видам (например L.plantarum и L.acidophilus), или на основе нескольких производственных штаммов бактерий разных родов или семейств (например Lactobacillus fermentum 90Т-С4 и Bifidobacterium Bifidum 1), дополняющие или потенцирующие друг друга по ферментативным свойствам, антагонистической активности, продукции биологически активных веществ, механизму действия или другим свойствам.

- Комбинированные - полученные, на основе одного или нескольких производственных штаммов бактерий рода Lactobacillus, или на основе нескольких производственных штаммов бактерий разных родов или семейств и помимо живых микроорганизмов представителей нормофлоры содержащие другие активные вещества (например L.fermentum 90Т-С4, B.Bifidum 1 и Силимар экстракт сухой или L.rhamnosus,и витамины и микроэлементы).

Производственные штаммы бактерий рода Lactobacillus

Штаммы бактерий рода Lactobacillus, используемые для производства лактосодержащих пробиотиков депонируют в официальных коллекциях (табл.1).

Производственные штаммы бактерий рода Lactobacillus, проверяют по культуральным, тинкториальным, морфологическим и биохимическим свойствам, безопасности (in vitro и in vivo), на отсутствие контаминации (табл.2-3). Определение проводят в соответствии с ОФС "Производственные штаммы и штаммы для контроля" и "Безопасность пробиотиков для медицинского применения в тестах in vivo".

Таблица 1 - Производственные штаммы бактерий рода Lactobacillus, используемые в производстве лактосодержащих пробиотиков в РФ

Название производственного штамма бактерий рода Lactobacillus	Место депонирования, N депозита
L.acidophilus 100аш,	Всероссийская коллекция промышленных микроорганизмов (ВКПМ) ФГУП ГосНИИГенетика, ВКПМ N В-3190
L.acidophilus	Всероссийская коллекция промышленных микроорганизмов (ВКПМ) ФГУП ГосНИИГенетика, ВКПМ N В-3090
L.acidophilus	Всероссийская коллекция промышленных микроорганизмов (ВКПМ) ФГУП ГосНИИГенетика, ВКПМ N В-8957 (В центральной лаборатории ВНИМИ N 22/10)
L.acidophilus	Всероссийская коллекция промышленных микроорганизмов (ВКПМ) ФГУП ГосНИИГенетика, ВКПМ N В-8958
L.acidophilus	Всероссийская коллекция промышленных микроорганизмов (ВКПМ) ФГУП ГосНИИГенетика, ВКПМ N В-8959
L.acidophilus	Всероссийская коллекция промышленных микроорганизмов (ВКПМ) ФГУП ГосНИИГенетика, ВКПМ N В-8960
L.plantarum 8Р-А3	Государственная коллекция патогенных микроорганизмов, Россия (ГКПМ), N 900811
L.fermentum 90Т-С4	Государственная коллекция патогенных микроорганизмов, Россия (ГКПМ), N 900812
L.plantarum 38	Патент РФ N 1517353, зарегистрированный в Государственном реестре изобретений СССР
L.fermentum 39	Патент РФ N 1517352, зарегистрированный в Государственном реестре изобретений СССР

Производственные штаммы бактерий рода Lactobacillus, проверяют по культуральным, тинкториальным, морфологическим и биохимическим свойствам, безопасности (in vitro и in vivo), на отсутствие контаминации (табл.2-3). Определение проводят в соответствии с ОФС "Производственные штаммы и штаммы для контроля" и "Безопасность пробиотиков для медицинского применения в тестах in vivo".

Таблица 2 - Морфологические, тинкториальные и культуральные свойства производственных штаммов бактерий рода Lactobacillus

Название штамма	Описание морфологических и культуральных свойств
L.acidophilus 100аш L.acidophilus	Факультативные анаэробы, микроаэрофилы растут в присутствии азота и углекислого газа. Грамположительные прямые бесспоровые палочки, располагающиеся поодиночке или в виде цепочек из 2 - 4 и более клеток Штаммы, применяемые для изготовления препарата, могут находиться в S и R-форме. Величина клеток 18-часовой культуры в молоке состовляет 10-20 мкм. Клетки равномерно окрашиваются метиленовой синью. При выращивании на агаре с гидролизованным молоком, штаммы образуют через 48-72 ч роста "локонообразные" на поверхности агара и в виде "паучков" в глубине агара колонии. Диаметр колоний - 1-2 мм. Штаммы обладают высокой активностью свертывания молока. При оптимальной для роста температуре и внесении 3-5% посевного материала, должны за 1-12 ч свертывать молоко, снижать рН молока до уровня 3,8 - 4,2.
L.acidophilus L.acidophilus L.acidophilus L.acidophilus	Факультативные анаэробы, микроаэрофилы растут в присутствии азота и углекислого газа. Грамположительные прямые бесспоровые палочки, располагающиеся поодиночке или в виде цепочек из 2 - 4 и более клеток или поодиночке. Штаммы, применяемые для изготовления препарата, могут находиться в S и R-форме. Величина клеток 18-часовой культуры в молоке состовляет 10-20 мкм. Клетки равномерно окрашиваются по Граму. При выращивании на агаре с гидролизованным молоком, штаммы образуют через 48-72 ч роста "локонообразные" на поверхности агара и в виде "паучков" в глубине агара колонии. Диаметр колоний - 1-2 мм. При культивировании на среде МРС-5, штаммы образуют в анаэробных или микроаэрофильных условиях через 48-72 ч круглые без четких границ колонии. При выращивании на агаре с гидролизованным молоком, штаммы образуют через 48-72 ч роста "локонообразные" на поверхности агара и в виде "паучков" в глубине агара колонии. Диаметр колоний - 1-2 мм.
L.plantarum 8Р-А3 L.plantarum 38	Факультативные анаэробы, растут в атмосфере углекислого газа, азота, а также в присутствии кислорода. На жидкой среде МРС-1 вырастают в виде равномерной мути и гомогенного белого осадка на дне пробирки, на полужидкой среде МРС-2 образуют изолированные колонии в виде тяжей. На плотной среде МРС-4 образуют выпуклые, непрозрачные, белые колонии.
L.fermentum 90Т-С4 L.fermentum 39	Факультативные анаэробы, растут в атмосфере углекислого газа, азота, а также в присутствии кислорода. На жидкой среде МРС-1 вырастают в виде равномерной мути и гомогенного белого осадка на дне пробирки, на полужидкой среде МРС-2 образуют изолированные колонии в виде тяжей. На плотной среде МРС-4 образуют слабо выпуклые, полупрозрачные, сероватые колонии.

Таблица 3 - Физиолого-биохимические свойства производственных штаммов бактерий рода Lactobacillus,

Свойства	Штаммы бактерий рода Lactobacillus,
	L.acidophilus 100аш,		L.acidophilus , ,	L.pantarum 8Р-А3, 38	L.fermentum 90Т-С4 L.fermentum 39
Ферментация
- глюкозы		+	+	+	+
- лактозы		+	+	+	+
- галактозы		+	+	+	+
- маннозы		+	+	+	+
- декстрозу		+	+	+	+
- фруктозу		+	+	+	+
- мальтоза		+	+	+	+
- сахароза		+	+	+	+
- целлобиоза		+	+	+	в
- салицин		+	+	+	-
- манит		-	-	+	-
- рамноза		-	-	-	-
- ксилоза		-	-	в	в
- сорбит		-	-	+	-
- арабиноза		-	-	в	в
- эскулин		+	+	+	-
- меллибиозы		+	в	+	+
- троегалозы		в	в	+	в
мелецитоза		-	-	в	-
Образование газа из глюкозы	-		-	-	+.
Образование кислоты из глюкозы	+		+	+	+
Каталаза	-		-	-	-
Лизоцимная активность	?		?	-	+
Оптимальная температура роста	°С		°С	°С	°С
Рост при 61°С	+		+	-	-
Рост при 20°С	+		+	+	+
Рост при 15°С	-		-	+	-
Сквашивание молока	+ L(+)-DL- молочная кислота		+ L(+)-DL- молочная кислота	+	+
Рост в щелочной среде (рН=8),	+		+
Рост в присутствии 0,4-0,6%, фенола	+		+
Рост в присутствии солей желчи (до 20%)	+		+
Рост в 2% NaCl	+		+
Адгезивная активность	-		-	+	+
Активность кислотообразования	Не ниже 230 °Т		Не ниже 230 °Т	Не ниже 230 °Т	Не ниже 230 °Т
Антагонистическая активность (зоны задержки роста тест-штаммов в мм)	не менее 20		не менее 20	не менее 20	не менее 20

Таблица 4 - Изучение безвредности штаммов бактерий рода Lactobacillus,

Название микроорганизма (род, штамм)	Вводимая доза КОЕ/ 0,5 мл)	Кол-во живых/ павших мышей	Вводимая доза КОЕ/ 0,5 мл)	Кол-во живых/ павших мышей	Вводимая доза (х КОЕ/мл)	Кол-во живых/ павших мышей	Вводимая доза (мл)	Кол-во живых/ павших мышей
L.acidophilus 100аш	1	10/0	1	10/0	1	10/0	0,5	10/0
	5	10/0	5	10/0	5	10/0	1,0	10/0
	10	10/0	10	10/0	10	10/0
L.pantarum 8Р-А3, 38	1	10/0	1	10/0	1	10/0	0,5	10/0
	5	10/0	5	10/0	5	10/0
	10	10/0	10	10/0	10	10/0	1,0	10/0
L.fermentum 90Т-С4, 39М	1	10/0	1	10/0	1	10/0	0,5	10/0
	5	10/0	5	10/0	5	10/0
	10	10/0	10	10/0	10	10/0	1,0	10/0

Устойчивость к антибиотикам

Штаммы ацидофильных лактобацилл среднеустойчивы к колистину, триметоприму, астреонаму, канамицину, суфадиазину, норфлоксацину. Они чувствительны к антибиотикам группы цефалоспоринов.

Производство

Производство лактосодержащих пробиотиков основано на выращивании/культивировании производственного штамма бактерий рода Lactobacillus на оптимальной питательной среде, в соответствующих условиях, методом глубинного культивирования с лиофилизацией в защитной среде.

При производстве лактосодержащих пробиотиков проводят валидацию технологического процесса и методов контроля, которые в соответствии с принципами GMP, доказывают, что конкретная методика, процесс, оборудование, сырье, деятельность или система действительно приводят к ожидаемым результатам, и гарантируют, что лекарственное средство получено в соответствии со своим составом, не содержит посторонних контаминантов, маркировано надлежащим образом, упаковано и сохраняет свои свойства в течение всего срока годности.

При производстве лактосодержащих пробиотиков особое значение имеет постоянное выполнение на всех этапах производства внутрипроизводственного анализа основных показателей качества для оценки их воспроизводимости, анализа качества готовой продукции при выпуске и в течение всего срока хранения.

Лактосодержащие пробиотики для медицинского применения выпускают в следующих лекарственных формах:

- лиофилизат во флаконе

- таблетки

- капсулы (пероральные, вагинальные, капсула в капсуле)

- суппозитории

- мази

Показатели качества лекарственного средства оценивают по соответствующей лекарственной форме (лиофилизата во флаконе, таблеток, капсул или мази).

Испытания

Показатели качества лекарственного средства лекарственной форме лиофилизаты, таблетки и капсулы и мази оценивают в соответствие с требованиями ОФС "Таблетки" и "Капсулы", "Суппозитории" и "Мази".

ОФС "Таблетки", "Капсулы",

Описание. Приводится описание физических свойств соответствующей лекарственной формы лекарственного средства.

Подлинность. Подлинность подтверждают методами - микроскопическим (окраской мазков по Граму), морфолого-культуральным (описание вида колоний выросших на адекватных питательных средах) и/или бактериологическим (подтверждается специфической активностью). Испытание проводят в соответствии с ОФС "Производственные штаммы и штаммы для контроля", если в частной фармакопейной статье не указаны другие требования.

Время растворения (для лиофилизатов). Указывают применяемый растворитель, его объем и, при необходимости, условия растворения (температуру растворителя, перемешивание, встряхивание) и время необходимое для растворения лекарственного препарата.

При проведении данного теста учитывают, что время растворения для лиофилизатов и порошков должно быть не более 5 мин.

Время распадаемости (для таблеток и капсул). Испытание проводят в соответствии с ОФС "Распадаемость таблеток и капсул".

Указывают применяемый растворитель, его объем и, при необходимости, условия растворения (температуру растворителя, перемешивание, встряхивание, использование водяной бани).

При проведении теста "Распадаемость" следует учитывать время распадаемости: для таблеток не должно превышать 15 мин, для капсул - 30 мин, если в частной фармакопейной статье не указаны другие требования.

Температура плавления или Время полной деформации (для суппозиториев и мазей) Испытание проводят в соответствии с ОФС "Суппозитории".

Указывают применяемый растворитель, его объем, условия растворения (температуру растворителя, перемешивание, встряхивание, использование водяной бани).

При проведении теста "Температура плавления" или "Время полной деформации" учитывают, что время расплавления для суппозиториев и мазей должно быть не более 20 мин, если в частной фармакопейной статье не указаны другие требования.

рН (для лиофилизатов, капсул, таблеток). Испытание проводят потенциометрическим методом в соответствии с ОФС "Ионометрия". Указывается допустимый интервал значений рН. Следует указать растворитель и его объем).

Потеря в массе при высушивании (для лиофилизатов, капсул, таблеток). Определение проводят в соответствии с ОФС "Потеря в массе при высушивании".

Показатель потери в массе при высушивании должен составлять (если нет других указаний в частной фармакопейной статье) для:

- лиофилизатов - не более 3,5%;

- капсул - не более 4,5%;

- таблеток - не более 4,5%.

Средняя масса и отклонения от средней массы (для таблеток, содержимого капсул или капсул, суппозиториев и мазей). Приводятся требования к средней массе и максимально допустимые отклонения от средней массы в соответствии с ОФС "Однородность массы дозированных лекарственных форм".

Извлекаемый объем (для суспензий). Определение проводят в соответствии с ОФС "Извлекаемый объем".

Специфическая безвредность. Определение проводят в соответствии с ОФС "Безопасность пробиотиков для медицинского применения". Указываются требования и критерии специфической безвредности; требования к животным используемым для контроля (порода/линия, пол); их количество; групповая масса тела животных перед введением препарата и после окончания срока наблюдения; дозы, условия разведения и методы введения лекарственного средства; продолжительность наблюдения, учитываемые показатели. Лекарственное средство должено быть безвредным.

Отсутствие посторонних микроорганизмов и грибов. Определение посторонней контаминации испытуемого препарата проводят по методике приведенной ниже, либо в соответствии с ОФС "Микробиологическая чистота".

Лиофилизированные лекарственные средства не должны содержать посторонних микроорганизмов.

В 1 таблетке не допускается наличие энтеробактерий, протея, гемолитических бактерий, плесневых и дрожжеподобных грибов и допускается не более 100 КОЕ бактерий сапрофитов.

В 1 капсуле не допускается наличие энтеробактерий, протея, гемолитических бактерий, плесневых и дрожжеподобных грибов и допускается не более 100 КОЕ бактерий сапрофитов.

В 1 суппозитории не допускается наличие энтеробактерий, протея, гемолитических бактерий, плесневых и дрожжеподобных грибов и допускается не более 100 КОЕ бактерий сапрофитов.

В 1 г мази не допускается наличие Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa, бактерий семейства Enterobacteriaceae, представителей рода Bacillus, плесневых и дрожжеподобных грибов и допускается не более 100 КОЕ бактерий сапрофитов.

В препаратах (капсулах, таблетках) предназначенных для детей в возрасте с 3 месяцев не допускается наличие Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa, бактерий семейства Enterobacteriaceae, представителей рода Bacillus, плесневых и дрожжеподобных грибов и допускается не более 10 КОЕ/кап. (дозе) бактерий сапрофитов.

В препаратах (капсулах, таблетках) предназначенных для детей в возрасте с 2 лет не допускается наличие Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa, бактерий семейства Enterobacteriaceae, представителей рода Bacillus, плесневых и дрожжеподобных грибов и допускается не более 50 КОЕ/кап. (дозе) бактерий сапрофитов.

Специфическая активность. Специфическая активность определяется количеством жизнеспособных бактерий в одной дозе лекарственного средства и активностью кислотообразования (или антагонистическая активность) ОФС "Специфическая активность пробиотиков для медицинского применения".

В одной дозе (таблетке, капсуле и т.д.) препарата должно содержаться:

- ацидофильных лактобактерий - не менее КОЕ;

- лактобактерий вида плантарум не менее КОЕ.

Активность кислотообразования 220 °Т

Производственные штаммы и штаммы для контроля. Определение проводят в соответствии с ОФС "Производственные штаммы и штаммы для контроля".

В разделе должна содержаться информация:

1. Наименование производственных штаммов и штаммов для контроля, обоснование для включения в производство (депонирование в официальных коллекциях).

2. Производственные штаммы и штаммы для контроля должны быть проверены на отсутствие контаминации и соответствующим образом охарактеризованы по биологическим и биохимическим свойствам.

Упаковка и маркировка. В соответствии с ОФС "Иммунобиологические лекарственные средства".

Транспортирование и Хранение. Указывают условия транспортирования и хранения, обеспечивающие стабильность лекарственного средства. Пробиотики для медицинского применения транспортируются и хранятся при температуре от 2 до 8°С , если нет других указаний в частных фармакопейных статьях.