Государственный стандарт качества лекарственного средства. Общая фармакопейная статья ОФС "Определение специфической активности и остаточной аллергенности аллергоидов in vivo методом кожных проб"

Государственный стандарт качества лекарственного средства
Общая фармакопейная статья ОФС
"Определение специфической активности и остаточной аллергенности аллергоидов in vivo методом кожных проб"

Вводится впервые

Определение специфической активности и остаточной аллергенности in vivo - это метод кожного тестирования (скарификация, прик-тест) медицинских иммунобиологических препаратов - аллергоидов (водно-солевых экстрактов, обработанных формальдегидом) полученных из материалов природного происхождения, вызывающих развитие аллергического заболевания. В основе метода лежит выявление специфической реакции кожи у лиц чувствительных к соответствующему (тестируемому) аллергоиду соотнесенной с кожной реакцией на одноименный аллерген.

Принцип метода постановки кожных проб

Метод основан на способности кожи человека, сенсибилизированного к определенному природному аллергену, реагировать на введение соответствующего медицинского препарата аллергоида, развитием местной аллергической реакции немеленого типа в виде волдыря, гиперемии (накожные пробы) или папулы, гиперемии (внутрикожные пробы). В основе механизма данной реакции лежит процесс связывания вводимого в кожный покров сенсибилизированного человека аллергена со специфическим IgE антителами, фиксированные на поверхности клеток-мишеней, что приводит к освобождению из них медиаторов с последующим действием их на клетки-мишени кожи.

Аллергические кожные реакции представляют собой проявление местной аллергии и являются отражением общей сенсибилизации организма

Препараты аллергоидов.

Оценки специфической активности и остаточной аллергенности in vivo подлежат:

- Аллергоид пыльцевой тимофеевки луговой, раствор

для подкожного введении;

- Аллергоид пыльцевой овсяницы луговой, раствор для подкожного введения;

- Аллергоид пыльцевой ежи сборной, раствор для подкожного введения;

- Аллергоид пыльцевой амброзии полыннолистной, раствор для подкожного введения;

- Аллергоид пыльцевой полыни горькой, раствор для подкожного введения;.

- Микст-аллергоид пыльцевой ежи, овсяницы, тимофеевки, раствор для подкожного введения

- Микст-аллергоид пыльцевой ольхи, березы, лещины, раствор для подкожного введения;

- Аллергоид из домашней пыли, раствор для подкожного введения.

Аллергоиды для лечения представляют сбой водно-солевые растворы белково-полисахаридных комплексов обработанные формальдегидом (0,014%). Аллергоиды стандартизуются по содержанию в препарате единиц белкового азота, (PNU protein nitrogen unit. 1PNU - международная единица, принятая для выражения концентрации белкового азота, равная содержанию 0,00001 мг белкового азота), а специфическая активность и остаточная аллергенность устанавливается по результатам кожного тестирования при одномоментной постановки проб с аллергоидом, аллергеном у высочувствительных пациентов соответствующей сенсибилизации.

Аллергоиды пыльцевые и аллергоид из домашней пыли содержит от 7500 -12500 PNU/ мл.

Аллергоды предназначены для лечения выпускаются в комплекте с разводящей жидкостью ( фосфатно-солевой буферный раствор, рН от 6,8 до 7,2.

Область применения

Метод применяется:

- при определении специфической активности и остаточной аллергенности производственных серий аллергоидов.

Условия проведения оценки специфической активности и остаточной аллергенности аллергоидов in vivo методом кожных проб

Перед проведением оценки специфической активности и остаточной аллергенности аллергоида in vivo методом кожных проб, последний согласно требованиям нормативной документации на данный препарат проходит лабораторный контроль по показателям (физические свойства, биохимические показатели, стерильность, аномальная токсичность и др.).

Для постановки кожных проб проводят подбор 5 -10 пациентов в возрасти от 18 до 60 лет, имеющих повышенную чувствительность к тестируемому аллергоиду подтвержденную данными анамнеза, клиническими проявлениями заболевания, а также предварительными результатами кожного тестирования с одноименным аллергеном (от "++" до "++++").

Параллельно кожные пробы с тестируемым аллергоидом, аллергеном ставят у лиц, не имеющих повышенную чувствительность к указанным препаратам (контрольная группа). У всех лиц данной группы реакция кожи на аллергоид, аллерген должна быть отрицательной.

При проведении оценки специфической активности и остаточной аллергенности аллергоидов методом кожных проб проводит врач - аллергологт только в аллергологическом кабинете или аллергологическом отделении больницы, оснащенными препаратами противошоковой терапии.

Противопоказания при проведении кожных проб

- обострение аллергического заболевания;

- острые и хронические кожные заболевания;

- острые инфекционные заболевания;

- хронические заболевания в стадии декомпенсации;

- обострение психических заболеваний;

- онкологические заболевания;

- иммунопатологические состояния и иммунодефициты;

- туберкулез любой локализации в период обострения;

- беременность и лактация;

- сердечно-сосудистые заболевания при которых возможны осложнения при использовании адреналина;

- любые формы гормональной терапии, терапии антигистаминными препаратами, бронхоспазмалитиками, бета-адреноблокаторами.

Дополнительные требования при проведении кожных проб.

Кожные пробы проводят не ранее, чем через

- 1 неделю после постановки туберкулиновой пробы;

- 2 недели после применения инактивированных вакцин и антигистаминных препаратов;

- 4 недели после вакцинации живыми вакцинами;

- 8 недель после применения вакцины БЦ

После проведения кожного тестирования пациент

должен находиться под медицинским наблюдением не менее 60 минут.

Техника постановки кожных проб.

Материалы:

- тестируемая серия аллергоида - 10000 PNU/мл (специфическая реакция кожи - наличие волдыря, гиперемии);

- одноименный аллерген -10000 PNU/мл - той же серии водно-солевого экстракта, из которого получен аллергоид (специфическая реакция кожи - наличие волдыря, гиперемия);

- разводящая жидкость для алергоида - фосфатный буферный раствор в концентрации 0,1 моль/л., рН от 7,3 до 7,7 (отрицательный лонтроль);

- тест-контрольная жидкость - фосфатный буферный раствор рН от 6,8 до 7,2 (отрицательный контроль);

- гистамин 0.01% раствор - положительный контроль (обязательное наличие волдыря, гиперемии).

- стерильные одноразовые скарификаторы.

- стерильные одноразовые инъекционные иглы.

- шприцы одноразовые на 1 или 2 мл

- асептическое средство - спирт этиловый ректификованный

- Вата медицинская гигроскопическа.

Примечание. Приготовление 0,01% раствора гистамина:

0,01% раствор гистамина готовят разведением гистамина дигидрохлорида 0,1% - 1 часть и 9 частей натрия хлорида изотонического 0,9% раствора для инъекций.

Срок годности 0,01% раствора гистамина - в течение 6 ч. с момента приготовления.

При постановке скарификации аллергоид, аллерген, тест-контрольную жидкость, разводящую жидкость 0,01% раствор гистамина набирают с соблюдением всех правил асептики в маркированные шприцы вместимостью 1 или 2 мл и наносят по 1 капле (0.1 мл препарата) на дезинфицированную 70° этиловым спиртом кожу внутренней поверхности предплечья на расстоянии 30-40 мм друг от друга. Стерильными скарификаторами или инъекционными иглами, индивидуально дл каждого больного и для каждого препарата, наносят через капли препаратов царапины длиной 5 мм.

При постановке прик-теста (тест-укол) с помощью отдельных стерильных шприцев капли аллергена, тест-контрольной жидкости, гистамина наносят на кожу внутренней поверхности предплечья на расстоянии 30-40 мм друг от друга. Через каждую каплю инъекционными иглами индивидуальными для каждого больного и для каждого препарата производят укол в кожу. При этом иглу проводят через капли нанесенных растворов под углом 45 и прокалывают кожу таким образом, чтобы не выступила кровь, затем иглу вынимают, слегка приподнимая кожу.

Реакцию кожи при проведении скарификации и постановки прик-теста учитывают через 15-20 мин и регистрируют согласно прилагаемой схеме (реакция немедленного типа). Размеры волдыря измеряют масштабной полистироловой линейкой (мм). Размер волдыря определяют измерением максимального диаметра.

Реакция кожи на гистамин должна быть положительной. При отрицательной реакции кожи на гистамин-пробу с аллергоидом, аллергеном не учитывают.

Реакция кожи на тест-контрольную и разводящую жидкость должна быть отрицательной. При положительной реакции кожи на тест-контрольную или разводящую жидкость жидкость - пробу с аллергодом, аллергеном не учитывают.

Кожную реакцию на аллергоид, аллерген учитывают согласно прилагаемой схеме..через 15 -20 мин после после постановки проб.

Схема учета накожных реакций (скарификация, прик-тест)

Оценки реакции		Размер и характер реакции
Отрицательная (-)		Отсутствие волдыря, гиреремии
Положительная	один крест (+)	Волдырь 2-3 мм, гиперемия
Положительная	два креста (++)	Волдырь 4-5 мм, гиперемия
Положительная	три креста (+++)	Волдырь 6-10 мм, гиперемии или волдырь 6-10 мм с псевдоподиями, гиперемия.
Положительная	четыре креста (++++)	Волдырь более 10 мм гиперемия или волдырь более 10 мм с псевдоподиями, гиперемия.

Остаточная аллергенность

Аллергоид должен обладать сниженной аллергенной активностью и вызывать у лиц, чувствительных к одноименному аллергену, кожные аллергические реакции, выраженность которых в 1,5 и более раза меньше по размеру волдыря, чем на аналогичный аллерген.

Определение остаточной аллергенности проводят при оценке специфической активности у тех же пациентов, проводя замер минимального и максимального диаметров на аллергоид и аллерген. Используется средний показатель в мм.

Критерии оценки специфической активности и остаточной аллергенности аллергоида.

Аллергоид считают специфически активным, когда в условиях одномоментной постановки кожных проб с аллергоидом и одноименным аллергеном, при выявлении путем кожного тестирования специфической кожной реакции в виде волдыря, гиперемии (положительная проба) не менее чем у 3 из 5 лиц, имеющих повышенную чувствительность к тестируемому аллергоиду.

В группе лиц в составе 5 человек, не имеющих повышенную чувствительность к тестируемому аллергоиду и одноименному аллергену (контрольная группа) не должно быть зарегистрировано ни одной положительной реакции кожи (отрицательная проба).

При регистрации положительных реакций у меньшего количества лиц, имеющих повышенную чувствительность к тестируемому аллергоиду, проводят постановку кожных проб дополнительно еще у 5 пациентов. Положительные реакции должны быть выявлены не менее, чем у 5 из 10.

Препарат не будет считаться специфически активным, если положительная реакция кожи зарегистрирована менее, чем у 5-ти из 10-ти лиц, имеющих повышенную чувствительность к тестируемому аллергоиду, или, если выявлена хотя бы одна положительная реакция кожи у лиц контрольной группы.

Аллергоид будет обладать сниженной аллергенной активностью (остаточная аллергенность), когда в условиях одномоментной постановки кожных проб с одноименным аллергеном, при равнозначной концентрации белкового азота (10000 PNU/ мл) будут зарегистрированы кожные реакции не менее , чем у 3 из 5 или у 5 из 10 обследованных лиц с выраженностью положительной кожной реакции в 1,5 и более раза меньше по размеру волдыря, чем на одноименный аллерген.

В случае, когда зарегистрирована отрицательная кожная реакция на аллергоид, за снижении аллергенности последнего принимают количественное выражение размера волдыря на аллерген. (Например, если размер волдыря на аллерген равен 3 мм, то остаточая аллергенная активность аллергоида снижена в 3 раза).