Государственный стандарт качества лекарственного средства. Фармакопейная статья Анатоксин стафилококковый очищенный адсорбированный, суспензия для подкожного введения

Государственный стандарт качества лекарственного средства
Фармакопейная статья
Анатоксин стафилококковый очищенный адсорбированный, суспензия для подкожного введения

Вводится впервые

Анатоксин стафилококковый очищенный адсорбированный, суспензия для подкожного введения представляет собой токсин стафилококковый, обезвреженный формалином и теплом, очищенный от балластных белков способом, гарантирующим полную детоксикацию и отсутствие возможности реверсии токсичности при сохранении антигенной и иммуногенной активности, адсорбированный на алюминия гидроксиде или другом, разрешенном к применению, минеральном адсорбенте.

При подкожном введении Анатоксин стафилококковый очищенный адсорбированный вызывает образование специфических антител к экзотоксину стафилококковому.

Область применения

- Профилактика стафилококковых инфекций у лиц с повышенным риском заболевания (промышленные и сельскохозяйственные рабочие, подвергающиеся по роду своей деятельности частому травматизму), а также у больных, которым предстоят плановые операции.

- Иммунизация доноров с целью получения антистафилококковой плазмы и изготовления антистафилококкового иммуноглобулина.

Производство

Для получения токсина стафилококкового используют штамм Staphylococcus aureus О15 (или другой штамм стафилококка, обладающий аналогичными свойствами). Штамм Staphylococcus aureus О15 получен и депонирован в официальной коллекции. При культивировании на жидких питательных средах штамм должен образовывать экзотоксин (синонимы: токсин стафилококковый, альфатоксин, альфастафилолизин). Метод культивирования должен обеспечивать высокую продукцию токсина, сохранять гемолитические свойства штамма и исключать контаминацию штамма посторонней микрофлорой. Токсинсодержащая культуральная жидкость, освобожденная от микробных клеток и продуктов их распада, должна содержать токсин стафилококковый с гемолитической активностью не менее 500 DHM (минимальная гемолитическая доза) и иметь Lh (лимит гемолитического действия) токсина не более 0,4 мл. Способ детоксикации токсина стафилококкового должен гарантировать отсутствие и возможность реверсии токсичности при сохранении антигенной (не менее 2 ЕС/мл) и иммуногенной (способность вызывать образование специфических антител) активности анатоксина стафилококкового. Последующая концентрация должна обеспечить содержание в 1 мл концентрата. не менее 30 ЕС (единиц связывания).

Для производства анатоксина стафилококкового адсорбированного проводят сорбцию полученного концентрированного анатоксина, добавляя расчетное количество геля алюминия гидроксида. Сорбция должна быть полной

Для характеристики анатоксина стафилококкового очищенного адсорбированного, суспензии для подкожного введения, определяют: рН, дисперсность, размер частиц, время седиментационной устойчивости, стерильность, аномальную токсичность, специфическую безвредность, специфическую активность, полноту сорбции, формальдегид, гель алюминия гидроксида, мертиолят.

Испытания

Описание. Определяют визуально. Равномерная суспензия белого цвета с желтоватым оттенком, разделяющаяся при стоянии на прозрачную надосадочную жидкость и рыхлый осадок, полностью диспергируемый при встряхивании.

Подлинность. Должен вызывать образование антител к токсину стафилококковому. Испытание проводят в соответствии с ОФС "Определение содержания антиальфастафилолизина (специфических антител) в препаратах крови".

Извлекаемый объем. Нормативные требования должны быть указаны в частной фармакопейной статье. Определение проводят в соответствии с ОФС "Извлекаемый объем лекарственных форм для парентерального применения".

рН. От 6,2 до 7,4, если нет других указаний в частной фармакопейной статье. Испытание проводят потенциометрическим методом c неразведенным препаратом в соответствии с ОФС "Ионометрия".

Время седиментационной устойчивости. После встряхивания препарат не должен расслаиваться в течение 2 минут. Определяют визуально.

Размер частиц. Препарат должен проходить в шприц через иглу N 0840.

Дисперсность. Показатель оптической плотности должен быть от 0,6 до 1,4 при разведении препарата 1:1 0,9% раствором натрия хлорида. Испытание проводят в соответствии с методикой, описанной в частной фармакопейной статье.

Стерильность. Препарат должен быть стерильным. Определение проводят в соответствии с ОФС "Стерильность".

Аномальная токсичность. Препарат должен быть нетоксичным. Испытание проводят в соответствии с ОФС "Аномальная токсичность". Препарат вводят по 2,0 мл подкожно двум морским свинкам с массой тела 250-300 г и по 0,5 мл - внутрибрюшинно пяти белым мышам массой - 18-20 г.

Специфическая безвредность. Препарат должен быть безвредным.

Кролику массой тела 2,0 - 2,5 кг вводят подкожно по 2,5 мл в оба бока. Препарат считают выдержавшим испытание, если в течение 5 сут наблюдения кролик остаётся здоровым и в местах введения препарата отсутствуют явления некроза тканей.

Специфическая активность (иммуногенность). Содержание антиальфастафилолизина (специфических антител) в сыворотках крови трех кроликов, иммунизированных препаратом, должно быть не менее 3 МЕ в 1 мл. Испытание проводят в соответствии с ОФС "Определение содержания антиальфастафилолизина (специфических антител) в препаратах крови". Трем кроликам массой тела  кг препарат вводят подкожно двукратно в объеме 0,5 мл с интервалом 17 - 20 сут. Через 8 - 10 суток после последней иммунизации у кроликов берут кровь из краевой вены уха и определяют в сыворотке крови каждого иммунизированного животного содержание антиальфастафилолизина (специфических антител).

Примечание:

Для проведения испытаний по показателям "Специфическая безвредность" и "Специфическая активность (иммуногенность)" используют кроликов, содержащих не более 0,125 МЕ антиальфастафилолизина в 1 мл сыворотки крови. Определение проводят в соответствии с ОФС "Определение содержания антиальфастафилолизина (специфических антител) в препаратах крови".

Полнота сорбции. Сорбция стафилококкового анатоксина должна быть полной. Надосадочная жидкость не должна содержать свободного стафилококкового анатоксина. Допускается наличие в 1 мл надосадочной жидкости не более 0,2 ЕС антиальфастафилолизина. (1 ЕС представляет собой минимальное количество анатоксина, которое связывает 1 ME (Международная единица) антиальфастафилолизина).

Для определения полноты сорбции в 4 пробирки (опытный ряд) наливают надосадочную жидкость испытуемой серии препарата: в первую пробирку - 1 мл неразведенной надосадочной жидкости, в остальные пробирки вносят по 1мл надосадочной жидкости, разведенной 0,9% раствором натрия хлорида соответственно в 2, 5, 10 раз. В каждую пробирку добавляют по 1,0 мл раствора ОСО "Содержания антиальфастафилолизина (специфических антител) в препаратах крови", содержащего 0,2 МЕ/мл. Пробирки осторожно встряхивают и выдерживают 20 минут при температуре 18 - 20°С.

Проведение испытания сопровождается контролями:

1. Первый контроль - контроль "полноты" нейтрализации Lh токсина стафилококкового в условиях испытания. В пробирку наливают 1,0 мл раствора ОСО "Содержания антиальфастафилолизина (специфических антител) в препаратах крови", содержащего 0,2 МЕ/мл антиальфастафилолизина и прибавляют 1мл 0,9% раствора натрия хлорида.

2. Второй контроль на отсутствие спонтанного лизиса эритроцитов кролика. В пробирку вносят 2,0 мл 0,9% раствора натрия хлорида.

3. Третий контроль - контроль гемолитического действия токсина стафилококкового в условиях испытания. В пробирку вносят 2,0 мл 0,9% раствора натрия хлорида.

4. Четвертый контроль - отсутствие лизиса эритроцитов надосадочной жидкостью. В пробирку вносят 2,0 мл надосадочной жидкости испытуемого образца.

В пробирки опытного ряда и контрольные пробирки N 1 и N 3 добавляют токсин стафилококковый в дозе Lh/10. В контрольные пробирки N 2 и N 4 токсин не добавляют.

Все пробирки встряхивают и выдерживают 20 минут при температуре 18 - 22 °С. Далее в каждую пробирку добавляют по 2 капли (0,1 мл) 15% взвеси эритроцитов; пробирки вновь встряхивают и выдерживают в течение 1 ч при температуре °С, а затем - 1 ч при температуре 18 - 22°С.

Результаты испытания учитывают визуально по степени гемолиза эритроцитов:

"++++" - полный гемолиз эритроцитов;

"+++" - почти полный гемолиз эритроцитов;

"++" - частичный гемолиз (50%-ный гемолиз эритроцитов);

"+" - следы гемолиза эритроцитов;

"-" - отсутствие гемолиза эритроцитов.

Учет результатов испытания начинают с учета результатов контроля:

в первом, втором и четвертом контроле гемолиз эритроцитов должен отсутствовать. Отсутствие гемолиза в первом контроле свидетельствует о том, что 0,2 ME антиальфастафилолизина полностью нейтрализовали гемолитическое действие дозы токсина стафилококкового в условиях испытания; отсутствие гемолиза в четвертом контроле свидетельствует о том, что "цельная" неразведенная надосадочная жидкость не вызывает гемолиза эритроцитов кролика; в третьем контроле должен произойти полный гемолиз эритроцитов.

В пробирках опытного ряда признаков гемолиза не должно быть.

Наличие признаков гемолиза в опытном ряду означает присутствие в надосадочной жидкости свободного стафилококкового анатоксина, который связывает антиальфастафилолизин и оставшийся свободным токсин стафилококковый вызывает гемолиз эритроцитов кролика.

Например: в 1 пробирке опытного ряда (неразведенная надосадочная жидкость) зафиксирован почти полный гемолиз (+++). Это означает, что в 1 мл надосадочной жидкости содержится 0,1 ЕС стафилококкового анатоксина т. к 0,1 ЕС стафилококкового анатоксина связался с 0,1 ME антиальфастафилолизина, а оставшийся свободным токсин стафилококковый вызвал гемолиз эритроцитов кролика.

Примечание: Приготовление 15% взвеси эритроцитов кролика и определение Lh токсина в условиях испытания проводят в соответствии с ОФС "Определение содержания антиальфастафилолизина (специфических антител) в препаратах крови".

Производственный штамм

Раздел должен содержать следующую информацию: наименование штамма(ов); место депонирования; морфологическую характеристику; при необходимости - допустимое количество пассажей и методику их проведения с указанием субстрата и условий культивирования; дополнительные к паспортным данным требования к характеристикам штаммов.

Вспомогательные компоненты

Формальдегид. Содержание формальдегида должно быть не более 30 мкг/мл. Испытание проводят по ОФС "Определение формальдегида".

Консерванты. Тиомерсал. Содержание тиомерсала должно быть от 80 до 120 мкг/мл. Испытание проводят по ОФС "Определение тиомерсала (мертиолята)".

Сорбенты. Алюминия гидроксид. Содержание ионов алюминия должно быть от 0,9 до 1,3 мг/мл. Испытание проводят по ОФС "Комплексометрическое титрование. Определение ионов алюминия в сорбированных иммунобиологических препаратах".

Упаковка и маркировка. В соответствии с ОФС "Иммунобиологические лекарственные препараты (средства)".

Транспортирование и хранение.

Анатоксин стафилококковый очищенный адсорбированный, суспензия для подкожного введения должен транспортироваться и храниться при температуре от 2 до 8 °С.

Замораживание не допускается.