Государственный стандарт качества лекарственного средства. Общая фармакопейная статья ОФС 42- "Определение О-ацетильных групп"

Государственный стандарт качества лекарственного средства
Общая фармакопейная статья ОФС 42-
"Определение О-ацетильных групп"

Вводится взамен метода,
изложенного в ФС 42-3874-99

Метод предназначен для определения О-ацетильных групп в полисахаридных вакцинах. Принцин метода заключается в способности О-ацетильных групп образовывать с гидроксиламином в щелочной среде гидроксамовую кислоту, которая в кислой среде дает цветную реакцию с ионами железа (III). Определение О-ацетильных групп проводится колориметрическим методом.

Колориметрический метод

К 1 мл испытуемого раствора, прибавляют 2 мл свежеприготовленного реактива N 1, перемешивают и оставляют на 4 мин при температуре 18-20°С. К полученному раствору прибавляют 1 мл разведенной хлористоводородной кислоты, перемешивают, прибавляют 1 мл 0,37 М раствора железа (III) хлорида, вновь перемешивают и оставляют на 15 мин при температуре указанной выше.

Измеряют оптическую плотность испытуемого и калибровочных растворов при 540 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм по сравнению с контрольным раствором, содержащим 1 мл воды и реактивы, указанные выше, добавленные в той же последовательности.

Содержание О-ацетильных групп (Х) в мкмоль вычисляют по формуле:

, где

А - содержание О-ацетильных групп, найденное по калибровочному графику, мкмоль;

В - количество испытуемого образца, мл.

Содержание О-ацетильных групп в 1 мл испытуемого раствора должно быть от 1,5 до 2,5 мкмоль с учетом содержания влаги в лекарственном средстве.

Построение калибровочного графика. К 0,1; 0,2; 0,3; 0,4; 0,5; 0,6 мл основного раствора ацетилхолина иодистого 5 мкмоль О ацетильных групп, прибавляют воду до 1 мл (концентрация О-ацетильных групп 0,5; 1,0; 1,5; 2,0; 2,5; 3,0 мкмоль) далее анализ проводят, как указано выше.

Строят калибровочный график, откладывая по оси абсцисс концентрацию ацетилхолина иодистого в мкмолях О-ацетильных групп, а по оси ординат - показания оптической плотности растворов при 540 нм.

Калибровочный график воспроизводят при каждом анализе.

Примечания

Испытуемый раствор. 1 мл испытуемого раствора (0,1% раствор испытуемого лекарственного средства в воде), приготовленного, как указано в частной фармакопейной статье.

Основной стандартный раствор ацетилхолина иодистого 5 мкмоль О-ацетильных групп в 1 мл. 0,1360 г ацетилхолина иодистого помещают в мерную колбу, вместимостью 100 мл, прибавляют около 80 мл 0,001 М раствора натрия ацетата перемешивают, доводят общий объем раствора тем же растворителем до метки и вновь перемешивают. Раствор хранят при температуре 4 - 8°С в течение 3 мес.

2 М раствор гидроксиламина. 69,5000 г гидроксиламина гидрохлорида растворяют в воде в мерной колбе вместимостью 500 мл, доводят объем водой до метки и перемешивают. Раствор хранят при температуре 4-8°С в течение 1 мес.

3,5 М раствор натрия гидроксида. 70,0 г натрия гидроксида растворяют в воде в мерной колбе вместимостью 500 мл, доводят объем раствора водой до метки и перемешивают. Раствор хранят при температуре 18 - 25°С в течение 3 мес.

Реактив 1. Смешивают равные объемы 1 М раствора гидроксиламина и 3,5 М раствора натрия гидроксида. Реактив готовят в день проведения анализа.

Хлористоводородная кислота разведенная. Смешивают один объем кислоты хлористоводородной концентрированной с двумя объемами воды. Раствор хранят в вытяжном шкафу при температуре 18 - 25°С в течение 6 мес.

0,37 М раствор железа (III) хлорида. Растворяют 50,0 г железа (III) хлорида 6-водного в 0,1 М растворе хлористоводородной кислоты в мерной колбе вместимостью 500 мл, доводят объем раствора тем же растворителем до метки и перемешивают. Раствор хранят при температуре 4-8°С в течение 3 мес.

0,001 М раствор натрия ацетата. Растворяют 0,0680 г натрия ацетата тригидрата в воде в мерной колбе вместимостью 500 мл, доводят объем раствора водой до метки и перемешивают. Устанавливают в растворе рН 4,5 с помощью 1 М раствора уксусной кислоты. Раствор хранят при температуре 4-8°С в течение 3 мес.

1 М раствор хлористоводородной кислоты. 4,13 мл хлористоводородной кислоты концентрированной помещают в мерную колбу вместимостью 500 мл, доводят объем раствора водой до метки и перемешивают. Раствор хранят в вытяжном шкафу при температуре 18 - 25°С в течение 6 мес.

1 М раствора уксусной кислоты. Раствор готовят по ОФС "Реактивы. Индикаторы". Раствор хранят в вытяжном шкафу при температуре 18 - 25°С в течение 3 мес.