Государственный стандарт качества лекарственного средства. Фармакопейная статья ФС 42 "Аллерген туберкулезный рекомбинантный в стандартном разведении"

Государственный стандарт качества лекарственного средства
Фармакопейная статья ФС 42
"Аллерген туберкулезный рекомбинантный в стандартном разведении"

Вводится впервые

Аллерген туберкулезный рекомбинантный представляет собой гибридный белок молекулярной массой около 27 кДа, состоящий из двух антигенов CFP10 - ESAT6, продуцируемый генетически модифицированной культурой Еscherichia соli BL21(DE3)/pCFP-ESAT. Предназначен для идентификации туберкулезной инфекции.

Производство. Производство препарата должно отвечать требованиям, предъявляемым к производству генно-инженерных МИБП.

Выращенную культуру клеток продуцентов отделяют от среды и лизируют для высвобождения белка. Лизат клеток продуцентов проходит стадию хроматографического выделения и очистки целевого белка-концентрата. Стандартное разведение аллергена получают путем разведения полученного концентрата изотоническим фосфатным буферным раствором до содержания 0,2 мкг гибридного белка в 0,1 мл.

Описание. Бесцветная прозрачная жидкость без посторонних примесей.

Подлинность. Препарат при внутрикожном введении морским свинкам, зараженных тест-штаммом Mycobacterium tuberculosis, должен вызывать положительные кожные реакции, а у вакцинированных БЦЖ реакции должны отсутствовать (см. разделы "Специфическая активность", "Специфичность").

Прозрачность. Должен быть прозрачным. Определение проводят визуально по ОФС "Прозрачность и степень мутности жидкостей".

Цветность. Должен быть бесцветным. Определение проводят визуально по ОФС "Степень окраски жидкостей"

Извлекаемый объем. Не менее номинального, указанного в частной фармакопейной статье. Определяют по ОФС "Извлекаемый объем лекарственных форм для парэнтерального применения".

рН. От 7,35 до 7,55. Определяют потенциометрически по ОФС "Ионометрия".

Аномальная токсичность. Должен быть нетоксичным. Испытание проводят по ОФС "Аномальная токсичность" на 5 белых мышах массой 17-20 г, тест-доза 0,5 мл вводят внутрибрюшинно. Период наблюдения составляет 7 сут.

Бактериальные эндотоксины. Не более 5 ЕЭ/мл (определяют по ОФС "Бактериальные эндотоксины".

Стерильность. Должен быть стерильным. Определение проводят по ОФС "Стерильность".

Специфическая активность. В 0,1 мл препарата должно содержаться 0,2 мкг аллергена туберкулезного рекомбинантного. Индекс специфической активности должен быть равен . Испытание проводят на морских свинках, зараженных живой культурой Mycobacterium tuberculosis.

Альбиносов или белокожих морских свинок массой  г. содержат на постоянном пищевом рационе и в одинаковых условиях окружающей среды. Сенсибилизацию проводят путем заражения вирулентным штаммом Mycobaсterium tuberculosis. Подготовку и способ введения культуры определяет частная ФС.

Свинок используют для постановки проб не более 2 раз в период от 30 до 120 сут после инфицирования, с интервалом между постановками проб не менее 30 сут. При повторном использовании животных пробы ставят на участках кожи, ранее не подвергавшихся воздействию препаратов.

За 24 ч до постановки туберкулиновых проб шерсть на спине или боках морских свинок удаляют сплошной полосой шириной 3-4 см.

Испытание проводят на 6 зараженных микобактериями туберкулеза морских свинках. Заполняют 4 шприца испытуемым препаратом и 4 шприца разведенным стандартным образцом предприятия (СОп). Каждой морской свинке по методу случайных чисел вводят внутрикожно по 0,1 мл 4 пробы испытуемого препарата и 4 пробы СОп. Реакцию учитывают через 24 ч, измеряя 2 взаимно перпендикулярных диаметра эритемы в мм. Подсчитывают суммы реакций на испытуемый препарат и на СОп. Специфическую активность оценивают по индексу специфической активности (I) - отношению суммы реакций на испытуемый препарат к сумме реакций на РСОп и достоверности различий между средними реакциями на эти препараты. Если полученные результаты выходят за указанные пределы, испытание повторяют. Результаты двух испытаний усредняют.

Специфичность. Испытание проводят на 3 морских свинках не ранее 30 дней после введения 0,5 мг препарата вакцины БЦЖ каждой. На внутрикожное введение 0,1 мл аллергена туберкулезного рекомбинантного в стандартном разведении морские свинки, вакцинированные БЦЖ, не должны реагировать, а на введение 2 ТЕ ОСО ППД-Л-2 давать положительные реакции - папулы диаметром не менее 5 мм.

Фенол. От 0,20 до 0,30%. Определение проводят спектрофотометрически по ОФС "Определение фенола".

Производственные штаммы. Escherichia coli BL21 (DE3) pCFP-ESAT - прототрофный штамм Escherichia coli В, (депонирован в ИБХ РАН), обладает следующими характеристиками, отличающими его от штамма предшественника: быстрый рост на минимальной среде, способность к синхронизации, устойчивый рост культуры в условиях биосинтеза белка и недостатка питательных веществ, дефектность системы рестрикции ДНК В-типа. Штамм несет оригинальную плазмиду pCFP-ESAT, содержащую генетическую конструкцию из двух генов Mycobacterium tuberculosis - cfp10 и esat 6 и ген устойчивости к ампициллину (bla). Штамм устойчив к ампициллину (100-150 мкг/мл) и чувствителен к остальным антибиотикам.

Для контроля качества препарата используют тест-штаммы Mycobacterium tuberculosis H37Rv (N 700403) и Mycobaсterium bovis BCG (N 700001), которые получают из Государственной коллекции патогенных микроорганизмов.

Маркировка. В соответствии с законодательными актами РФ.

Транспортирование. При температуре от 2 до 8°С в условиях, исключающих замораживание. Допускается транспортирование при температуре не выше 18°С в течение 15 дней.

Хранение. При температуре от 2°С до 8°С. Не замораживать.