Государственный стандарт качества лекарственного средства. Фармакопейная статья ФС 42- "Вакцина оспенная инактивированная"

Государственный стандарт качества лекарственного средства
Фармакопейная статья ФС 42-
"Вакцина оспенная инактивированная"

Вводится впервые

Вакцина представляет собой вирус вакцины, выращенный на коже телят, очищенный фреоном 113, инактивированный гамма - излучением . 1 доза содержит: активный компонент - инактивированный антиген вируса вакцины - 50 мкг (величина расчетная определяется по содержанию общего белка); стабилизаторы: желатин - 1% и сахароза - 5% в конечной концентрации; соли буферной системы: кислота лимонная, натрий фосфорнокислый двузамещенный. Препарат не содержит антибиотиков и консервантов.

Производство.

Требования к животным.

В качестве продуцентов для производства вакцины оспенной инактивированной и посевного материала используют телят крупного рогатого скота. Животные должны поступать из хозяйств, благополучных в отношении инфекционных агентов. Каждая партия животных должна сопровождаться ветеринарным свидетельством, подтверждающим отсутствие инфекционных заболеваний. Все поступившие телята должны пройти 30-дневный карантин.

Требования к производственному штамму.

В качестве вакцинного штамма используют вирус вакцины, штамм Л-ИВП. Штамм Л-ИВП получен путем накожных пассажей на кроликах и телятах вакцины, приготовленной из штамма Lister института Листера (Англия, Элстри). Для поддержания стабильных свойств штамма, проводят один пассаж исходного материала штамма на коже кролика. Получают ляпиновакцину. Посевной вирус I и II генерации готовят из ляпиновакцины путем пассажей на телятах. Для приготовления вакцины используют только ляпиновакцину III генерации. Взвесь посевного вируса должна отвечать следующим требованиям:

- содержать не более 50 посторонних микроорганизмов в 1 мл, в том числе аэробных и факультативных анаэробных бактерий и грибов, не содержать бактерий семейства Enterobacteriaceae и вида Pseudomonas aeruginosa и Staphilococcus aureus, а также патогенных бактерий;

- быть генетически однородной: допускается образование на ХАО КЭ не более 10 поражений поверхностного диффузного типа на 1000 типичных оспин (от 0,5 до 3 мм);

- на скарифицированной коже кроликов образовывать типичные вакцинальные поражения (оспины);

- не вызывать некрозы при внутрикожном введении кроликам ООЕ/0,1 мл;

- не вызывать гибель кроликов при введении в мозг ООЕ/0,1 мл;

- быть безвредной для морских свинок при введении подкожно 1 мл посевного вируса и для белых мышей при введении 0,2 мл посевного вируса подкожно;

- иметь специфическую активность не менее ООЕ/мл.

Производство вакцины оспенной инактивированной должно проводиться в отдельных изолированных помещениях, в которых не допускается производство других лекарственных средств. Условия производства должны соответствовать требованиям Санитарных правил "Безопасность работы с микроорганизмами III-IV групп патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных болезней".

Этапы производства включают: получение оспенного соскоба с кожи телят, очистка оспенного соскоба от белка кожи центрифугированием, освобождение от микрофлоры обработкой фреоном, приготовление жидкой вакцины, инактивация гамма-излучением и внесение стабилизатора, розлив и герметизация ампул в атмосфере азота. В процессе производства обязательным является испытание качества исходных материалов, вакцинного штамма, ляпиновакцины I, II и III генераций посевного вируса. Определение общего белка проводят в полуфабрикате вакцины после разведения буферным раствором до добавления стабилизатора. Метод определения колориметрический с реактивом Несслера в соответствие с требованиями ОФС "Определение белка". Регламентированная норма 100 - 200 мкг/мл. Все исходные компоненты и вспомогательные материалы должны быть фармакопейного качества.

Описание. Пористая масса от белого до серо - белого цвета гигроскопичная. Вакцина, растворенная в 0,5 мл раствора натрия хлорида 0,9%, должна представлять собой опалесцирующую жидкость от бесцветной до серо - белой окраски. Метод определения - визуальный.

Подлинность. Вакцина должна вызывать образование вируснейтрализующих антител к вирусу вакцины в сыворотке крови белых крыс однократно иммунизированных внутривенно одной дозой вакцины. Метод определения - см. раздел "Антигенная активность".

Время растворения. Вакцина должна полностью растворяться в 0,5 мл раствора натрия хлорида 0,9% при встряхивании в течение 3 мин. Метод определения - визуальный.

Механические включения. Препарат не должен содержать видимых механических включений. Определение проводят по ОФС "Видимые механические включения в лекарственных формах для парэнтерального применения и в глазных лекарственных формах".

рН восстановленного препарата. От 6,8 до 7,6. Испытания проводят потенциометрическим методом по ОФС "Ионометрия".

Потеря в массе при высушивании. Не более 3%. Определение проводят по ОФС "Потеря в массе при высушивании".

Стерильность. Вакцина должна быть стерильной. Испытание проводят методом прямого посева или методом мембранной фильтрации по ОФС "Стерильность".

Пирогенность. Вакцина должна быть апирогенной. Испытание проводят в соответствии с ОФС "Пирогенность". Объём вводимого препарата не должен превышать 1,5 мл на 1 кг массы кролика.

Аномальная токсичность. Вакцина должна быть нетоксичной. Испытание проводят согласно ОФС "Аномальная токсичность". Тест - доза - по 0,5 мл подкожно двум морским свинкам с массой тела 250 - 300 г и по 0,5 мл внутрибрюшинно пяти белым мышам с массой тела 17-20г. Вакцину растворяют прилагаемым растворителем.

Специфическая безопасность. Не должна содержать живого вируса вакцины. Полноту инактивации вируса вакцины испытывают на хорионаллантоисных оболочках 12-дневных куриных эмбрионов (ХАО КЭ).

Примечание: Используют КЭ от кур породы: "Леггорн", или "Роменбраун", или "Родонит-2", или "Изобраун", или "Хайсекс", или пород кур, эмбрионы которых чувствительны к вирусу вакцины. Эмбрионы кур получают из хозяйств, свободных от вирусных и других возбудителей, патогенных для человека.

Подготовка КЭ. Овоскопию КЭ проводят в затемненной комнате. Каждый КЭ просматривают в направленном пучке света. Свет должен падать сверху на тупой конец КЭ. Бракуют КЭ с погибшим эмбрионом или имеющие кровоизлияния под оболочкой. В центре воздушного мешка и на боковой поверхности яйца, на участке между сосудами и их ответвлениями, карандашом делают отметку. В отмеченных местах пропиливают бормашиной с абразивным диском отверстия (щели) длиной 3-4 мм и шириной 1,5 мм, не повреждая оболочки. КЭ укладывают так, чтобы отверстие на боковой стороне было обращено вверх. Затем на отверстие, расположенное на боковой поверхности, вносят 0,1 мл стерильного фосфатно-цитратного буферного раствора Мак-Ильвейна 0,004 М, подогретого до температуры °С, и хирургической иглой осторожно продавливают подскорлупную оболочку. После этого практически вся капля раствора проходит под подскорлупную оболочку и частично отслаивает хорионаллантоисную оболочку (ХАО). Из отверстия в центре воздушного мешка резиновой грушей осторожно отсасывают воздух до полного опускания ХАО и создания искусственного воздушного мешка под боковой щелью. КЭ с опущенной ХАО помещают на лотки отверстием вверх и выдерживают 2 ч в термостате при температуре °С. Затем проводят овоскопию повторно и бракуют эмбрионы с воздушными мешками под ХАО, без искусственных воздушных мешков и имеющие кровоизлияния. При испытании специфической безопасности вакцины используют 20 подготовленных куриных эмбрионов и 10 ампул вакцины. Содержимое ампулы с вакциной растворяют в 0,5 мл буферного раствора Мак-Ильвейна. Каждую ампулу контролируют на 2 эмбрионах. По 0,1 мл растворенной вакцины наносят на ХАО одного эмбриона и равномерно распределяют по оболочке осторожным круговым вращением. Инокулированные КЭ помещают отверстием вверх на боковой поверхности и инкубируют 48 ч в термостате при температуре °С, затем проводят учет результатов. Параллельно определяют чувствительность КЭ к вирусу вакцины. Для этого используют не менее 12 подготовленных КЭ и ОСО вируса вакцины (ОСО 42-28-113-**). Все манипуляции проводят согласно "Инструкции по применению ОСО". Инкубируют параллельно с основным опытом. Через 42-48 час. КЭ вскрывают, разрезая скорлупу по длинной оси яйца. Отслаивают пинцетом участок ХАО, выстилающий полость искусственного мешка, и отмывают его от крови и белка водой. Каждую оболочку просматривают на черном фоне на наличие оспин. Препарат не должен вызывать специфических поражений на ХАО КЭ. В тесте должен быть подтвержден установленный титр ОСО вируса вакцины. При соблюдении данных условий делают заключение об отсутствии живого вируса в испытуемом препарате. В случае обнаружения типичных оспин в основном опыте проводят контроль удвоенного количества образцов препарата. При повторном обнаружении типичных оспин на ХАО куриных эмбрионов испытуемую вакцину бракуют. В случае обнаружения неспецифических поражений, участок ХАО измельчают и готовят суспензию в 2,0 мл буферного раствора Мак-Ильвейна. Взвесь центрифугируют в течение 15 мин при 2000 об/мин. Надосадочную жидкость наносят по 0,1 мл на ХАО 8 куриных эмбрионов. Отсутствие типичных поражений считают доказательством инактивации вируса. При обнаружении на ХАО КЭ специфических оспин вакцину бракуют.

Антигенная активность. Среднегеометрический титр (СГТ) вируснейтрализующих антител (ВНА) к вирусу вакцины в сыворотках крови белых крыс, иммунизированных внутривенно одной дозой вакцины, должен быть не менее 1:80. Контроль проводят на 6 белых крысах массой 80-100 г линии "Wistar" или нелинейных белых крысах без различия пола. Крысам вводят внутривенно в хвостовую вену растворенный препарат в объеме 0,5мл. Через 28 суток производят взятие крови от каждой крысы и получают сыворотки. Для контроля опыта получают сыворотку крови от не иммунизированной крысы. Все полученные сыворотки прогревают при температуре °С в течение 30 мин и исследуют в реакции нейтрализации. Постановку реакции нейтрализации проводят на ХАО 12-дневных КЭ. Для постановки реакции используют подготовленные куриные эмбрионы (см. раздел "Специфическая безопасность"), ОСО вируса вакцины и вакцину оспенную живую в качестве вируса. Определяют рабочее разведение вируса. Для этого готовят ряд последовательных десятикратных разведений вируса на буферном растворе Мак-Ильвейна (см. раздел "Специфическая безопасность"). Каждое разведение вируса в объёме 0,1 мл вводят на ХАО 6 КЭ. Инкубируют в термостате 48 ч при температуре °С. КЭ вскрывают, подсчитывают количество развившихся на ХАО оспин, рассчитывают среднее арифметическое количество оспин для каждого разведения. При постановке реакции нейтрализации используют то разведение вируса, которое дает на ХАО куриных эмбрионов 40-60 оспин (рабочее разведение). Готовят двукратные разведения исследуемых сывороток на буферном растворе Мак-Ильвейна от 1:10 до 1:640 и разведения нормальной сыворотки 1:10 и 1:20 в объёме 1,0 мл. К каждому разведению сыворотки добавляют равный объем вируса в рабочем разведении. При этом разведение сывороток увеличивается вдвое. Соответственно, в смесях получают разведения исследуемых сывороток от 1:20 до 1:1280 и нормальной сыворотки 1:20-1:40. Смеси выдерживают при температуре °С в течение двух часов. На ХАО КЭ наносят по 0,1 мл смеси, используя для каждой смеси по 5-6 эмбрионов. Инкубацию и вскрытие эмбрионов проводят так же, как при определении специфической безопасности.

Учет результатов. Подсчитывают количество развившихся на ХАО оспин и определяют их среднеарифметическое значение для каждого разведения сыворотки. Находят среднеарифметическое значение числа оспин, развившихся при исследовании двух разведений нормальной сыворотки. Титром ВНА считают конечное разведение иммунной сыворотки, дающее нейтрализацию 50% и более оспин от среднеарифметического числа, определенного в контроле с нормальной сывороткой. Допускается разброс вируснейтрализующих титров сывороток от 1:20 до 1:1280.

Пример расчета СГТ ВНА. При выявлении в реакции нейтрализации следующих титров ВНА в сыворотках 1:20, 1:80, 1:640, 1:640, 1:160, 1:160 для удобства расчета СГТ необходимо все значения привести к единому знаменателю (1:160=4:640, 1:80=8:640, 1:20=32:640), тогда

Растворитель, выпускаемый в комплекте с препаратом.

Растворитель - натрия хлорида раствор 0,9%.

Описание. Прозрачная бесцветная жидкость.

Подлинность.

Растворитель дает характерную реакцию на хлориды. Определение проводят одновременно с количественным определением по ОФС "Определение хлоридов методом осадительного титрования".

Растворитель дает характерную реакцию на натрий. 5 мл растворителя упаривают до 1 мл. 1 мл подкисляют разведенной уксусной кислотой, если необходимо, фильтруют, затем прибавляют 0,5 мл цинк - уранилацетата. Наблюдают образование желтого кристаллического осадка.

Прозрачность. Должен быть прозрачным. Определение проводят по ОФС "Прозрачность и степень мутности жидкостей".

Степень окраски растворителя. Должен быть бесцветным. Определение проводят по ОФС "Степень окраски жидкостей".

рН. От 5,5 до 7,5. Испытания проводят потенциометрическим методом по ОФС "Ионометрия".

Механические включения. Растворитель не должен содержать видимых механических включений. Определение проводят по ОФС "Видимые механические включения в лекарственных формах для парентерального применения и в глазных лекарственных формах".

Стерильность. Должен быть стерильным. Испытание проводят методом прямого посева или методом мембранной фильтрации по ОФС "Стерильность".

Количественное определение. В 1 мл растворителя должно быть от 0,0087 до 0,0093 г натрия хлорида.

10 мл растворителя титруют 0,1 М раствором серебра нитрата до оранжево - желтого окрашивания (индикатор - калия хромат). 1 мл 0,1 М раствора нитрата серебра соответствует 0,005844 г натрия хлорида.

Упаковка и Маркировка. В соответствии с ОФС "Иммунобиологические лекарственные препараты (средства)".

Транспортирование. При температуре от 2 до 8°С.

Хранение. В соответствии с ОФС "Иммунобиологические лекарственные средства".

Срок годности. В пределах срока годности, установленного частной фармакопейной статьей.

Назначение. Вакцина предназначена для вакцинации детей с двухлетнего возраста, подростков и взрослых при двухэтапном методе вакцинации (на втором этапе применяют вакцину оспенную живую).