Государственный стандарт качества лекарственного средства. Фармакопейная статья ФС- "Интерферон человеческий лейкоцитарный"

Государственный стандарт качества лекарственного средства
Фармакопейная статья ФС-
"Интерферон человеческий лейкоцитарный"

Вводится впервые

Интерферон человеческий лейкоцитарный представляет собой группу белков (интерфероны альфа), синтезируемых лейкоцитами донорской крови человека в ответ на воздействие вируса - индуктора интерферона (вирус болезни Ньюкасла или вирус Сендай).

Основными характеристиками интерферона человеческого лейкоцитарного являются:

- универсальность (активен против большинства ДНК- и РНК-содержащих вирусов);

- выраженная видоспецифичность;

- последействие (после удаления вируса в обработанных клетках сохраняется способность подавлять размножение вируса);

- нечувствительность к антителам против вирусов, их индуцирующих.

Препараты интерферона человеческого лейкоцитарного не содержат стабилизаторов и консервантов.

Производство

Характеристика производственных штаммов

Для производства интерферона лейкоцитарного человеческого в качестве интерфероногена используют вирус болезни Ньюкасла или вирус парагриппа Сендай, депонированные в национальной или международной коллекции.

Вирус болезни Ньюкасла должен быть специфичным в реакции торможения гемагглютинации (РТГА) со штаммоспецифичной антисывороткой; не должен быть контаминирован бактериями, посторонними вирусами, микоплазмами; инфекционная активность должна быть не менее , титр гемагглютинации - не менее 1:128; должен оказывать цитопатическое действие на 3-х суточную культуру куриных фибробластов; должен репродуцироваться в 9-11 - суточных куриных эмбрионах при температуре °С в течение 48 ч.

Вирус Сендай должен быть специфичным в реакции нейтрализации гемагглютинации (РНГА) со штаммоспецифичной антисывороткой; не должен быть контаминирован бактериями, посторонними вирусами, микоплазмами; титр гемагглютининов должен быть не менее 1:160000 ГАЕ/мл при отсутствии цитопатического действия; должен репродуцироваться в 10-11 - суточных куриных эмбрионах при температуре °С в течение 72 ч.

Требования к донорской крови:

- стерильность, хранение при температуре °С не более 24 ч с момента забора;

- отсутствие поверхностного антигена вируса гепатита В, антител к вирусу гепатита С, антител к вирусу иммунодефицита человека (ВИЧ-1, ВИЧ-2); антител к возбудителю сифилиса, нуклеиновых кислот вируса гепатита В, С и ВИЧ-1.

- количество жизнеспособных лейкоцитов при подсчете должно быть не менее 90%.

Требования к куриным эмбрионам

- эмбрионы должны быть получены от клинически здоровых кур из благополучных в эпизоотилогическом отношении птицеводческих хозяйств, сертифицированных в отношении отсутствия заболеваемости кур туберкулезом, оспой и другими инфекциями, возраст эмбрионов при использовании вируса болезни Ньюкасла - 9-11 суток; при использовании вируса Сендай - 10-11 суток, сеть кровеносных сосудов должна быть хорошо развита;

- транспортирование должно осуществляться в перфорированных лотках, уложенными тупым концом вверх, лотки должны быть помещены в специальные контейнеры, обеспечивающие температуру эмбрионов °С, упаковка яиц должна обеспечивать целостность скорлупы и аллантоисного мешка;

- хранение до инкубации осуществляется при температуре °С и относительной влажности 70-80% с постоянным движением воздуха за счет вентиляционных устройств;

- аллантоисная вируссодержащая жидкость и рабочий посевной материал (лиофилизированная аллантоисная вируссодержащая жидкость) должны соответствовать требованиям, предъявляемым к производственным штаммам вирусов - индукторов.

Питательные среды

Производственные питательные среды не должны содержать компонентов, вызывающих аллергические или иные нежелательные реакции у человека. Сырье, реактивы и реагенты, используемые при производстве питательных сред, должны быть разрешены для медицинского применения, должны иметь фармакопейное качество, подтвержденное соответствующими сертификатами. Питательные среды должны быть стерильными.

Основные стадии производства интерферона

- Получение вируса индуктора (контрольные параметры (КП): стерильность, гемагглютинирующая активность, инфекционный титр, посторонние вирусы).

- Получение "чистых" лейкоцитов (КП: стерильность; отсутствие поверхностного антигена вируса гепатита В, антител к вирусу гепатита С; антител к вирусу иммунодефицита человека (ВИЧ-1, ВИЧ-2); антител к возбудителю сифилиса, нуклеиновых кислот вируса гепатита В, С и ВИЧ-1; количество жизнеспособных лейкоцитов, объем загрузки в реактор).

- Индукция интерфероногенеза и биосинтез интерферона (КП: активность вируса-индуктора, температура в реакторе, время прохождения стадии, скорость вращения центрифуги, рН).

- Очистка полуфабриката интерферона (КП: температура и давление внутри емкости с полуфабрикатом, стерильность, специфическая активность, специфическая безопасность, рН).

- Розлив (КП: номинальный объем, визуальный осмотр, стерильность).

- Сублимационное высушивание (для лиофилизированных форм) (КП: температура полок и время замораживания).

- Контроль препарата в первичной упаковке

- Упаковка, маркировка (КП: соответствие упаковки и маркировки)

Перечень показателей качества различных лекарственных форм препаратов интерферона и требования к ним приводят в частных фармакопейных статьях.

Описание. Приводят описание физических свойств соответствующей лекарственной формы лекарственного средства.

Подлинность. Должен представлять собой интерферон альфа-типа. Определение проводят в соответствии с ОФС "Биологические методы испытания препаратов интерферона с использованием клеточных культур".

Специфическая активность. Значение показателя должно соответствовать требованиям частной фармакопейной статьи. Определение проводят в соответствии с ОФС "Биологические методы испытания препаратов интерферона с использованием клеточных культур".

Овальбумин. Содержание овальбумина должно быть не более 0,05 мкг/мл. Определение проводят иммуноферментным методом (ИФА) с использованием тест-систем с чувствительностью не ниже 0,7 нг/мл, разрешенных к применению, в соответствии с прилагаемыми к ним инструкциями.

Время растворения (для лиофилизированных форм). Не более 3 минут, если нет других указаний в частной фармакопейной статье. В ампулу вносят, не встряхивая содержимого, 2 мл растворителя, предусмотренного требованиями частной фармакопейной статьи. Наблюдают визуально процесс растворения, время полного растворения определяют с помощью секундомера.

Извлекаемый объем (для жидких форм). Не менее номинального. Определяют в соответствии с ОФС "Определение номинального объема".

Цветность. Должна соответствовать требованиям частной фармакопейной статьи. Определение проводят в соответствии с ОФС "Степень окраски жидкостей".

Прозрачность. Должен выдерживать сравнение с эталоном II. Определение проводят в соответствии с ОФС "Прозрачность и степень мутности жидкостей".

Механические включения (для инъекционных форм). Должны отсутствовать. Определение проводят в соответствии с ОФС "Видимые механические включения в лекарственных формах для парентерального применения и глазных лекарственных формах".

рН. Допустимый интервал значений должен соответствовать требованиям частной фармакопейной статьи. Определение проводят потенциометрическим методом в соответствии с ОФС "Ионометрия". В случае определения рН после растворения следует указать растворитель и его объем.

Потеря в массе при высушивании (для лиофилизированных форм). Значение показателя не должно превышать 2%. Определение проводят в соответствии с ОФС "Потеря в массе при высушивании".

Белок. Содержание белка должно соответствовать требованиям частной фармакопейной статьи. Определение проводят в соответствии с ОФС "Определение белка" методом Лоури (метод А без предварительного осаждения).

Стерильность. Препарат должен быть стерильным. Определение проводят в соответствии с ОФС "Стерильность".

Микоплазмы. Должны отсутствовать. Определение проводят в соответствии с ОФС "Испытание на присутствие микоплазм".

Аномальная токсичность. Препарат должен быть нетоксичным. Определение проводят по ОФС "Аномальная токсичность. Тест для вакцин и сывороток".

Токсичность на культуре клеток. Препарат не должен оказывать токсического действия на культуру клеток. Клеточный слой после воздействия препарата должен оставаться неповрежденным, без признаков дегенерации и не отличаться от контрольных проб. Определение проводят в соответствии с ОФС "Биологические методы испытания препаратов интерферона с использованием клеточных культур".

Специфическая безопасность. Препарат не должен содержать живого вируса - индуктора интерферона. Испытание на полноту инактивации вируса - индуктора проводят одним из двух методов: с использованием (9-11) - суточных куриных эмбрионов или культуры фибробластов куриных эмбрионов.

1. Испытание на куриных эмбрионах

Испытуемый препарат вводят по 0,2 мл в аллантоисную полость не менее пяти эмбрионов (при использовании в качестве индуктора интерферона вируса болезни Ньюкасла (NDV) или десяти эмбрионов (при использовании в качестве индуктора интерферона вируса Сендай). Инкубируют при температуре  С в течение 48 часов (при использовании в качестве индуктора интерферона вируса болезни Ньюкасла (NDV) или в течение 72 часов (при использовании в качестве индуктора интерферона вируса Сендай). После инкубации гибель эмбрионов должна отсутствовать. Отдельно из каждого эмбриона отсасывают аллантоисную жидкость и проверяют ее в реакции гемагглютинации. В лунках 72-луночных планшетов для серологических реакций готовят 2-3 последовательных двукратных разведения аллантоисной жидкости в объеме 0,5 мл, используя натрия хлорида раствор 0,9%. Затем в каждую лунку добавляют равный объем 0,5% суспензии эритроцитов в натрия хлорида растворе 0,9%. Результаты учитывают визуально через 20-30 мин после оседания эритроцитов. Гемагглютинация во всех проверяемых образцах должна отсутствовать. При гибели хотя бы одного эмбриона или наличии гемагглютинации хотя бы в одной пробе испытание повторяют на удвоенном количестве эмбрионов. В случае повторной гибели эмбрионов или выявлении гемагглютинации препарат считают не прошедшим испытание.

2. Испытание на фибробластах куриных эмбрионов

Испытание на фибробластах куриных эмбрионов проводят в монослойной культуре клеток, выращенной в лунках 96-луночных планшетов с плоским дном на питательной среде 199 или Игла, содержащей 5-10% сыворотки крупного рогатого скота и 10 ед/мл гентамицина или канамицина. Посевная доза - не менее  кл/0,1 мл на лунку. Планшеты с культурой клеток инкубируют 24 ч при температуре °С в атмосфере 5% при влажности %. Среду сливают и в лунки планшетов вносят по 0,1 мл испытуемого препарата. На каждый образец препарата используют не менее 4 лунок. В такое же количество лунок с контрольной культурой клеток вносят питательную среду. Учет проводят под микроскопом при 100-кратном увеличении. Монослой клеток должен оставаться неповрежденным, цитопатическое действие должно отсутствовать. При наличии дегенерации культуры клеток испытание повторяют. При повторном выявлении цитопатического действия испытуемого препарата и отсутствии цитопатического эффекта в контрольных лунках препарат считают не прошедшим испытание.

Поверхностный антиген вируса гепатита В (HBsAg). Препарат не должен содержать поверхностного антигена вируса гепатита В. Определение проводят иммуноферментным методом с использованием тест-систем, разрешенных к применению в практике здравоохранения России и имеющих чувствительность не ниже 0,1 МЕ/мл.

Антитела к вирусу гепатита С. Антитела к вирусу гепатита С должны отсутствовать. Определение проводят иммуноферментным методом с использованием тест-систем, разрешенных к применению в практике здравоохранения России и имеющих чувствительность и специфичность не ниже 100%.

Антитела к вирусу иммунодефицита человека (ВИЧ-1 и ВИЧ-2). Препарат не должен содержать антител к вирусу иммунодефицита человека (ВИЧ-1 и ВИЧ-2). Определение проводят иммуноферментным методом с использованием тест-систем, разрешенных к применению в практике здравоохранения России и имеющих чувствительность и специфичность не ниже 100%.

Маркировка и упаковка. В соответствии с ОФС "Иммунобиологические лекарственные препараты (средства)".

Транспортирование и хранение. В соответствии с ОФС "Иммунобиологические лекарственные препараты (средства)". Не замораживать.