Приложение N 3. Инструкция для специалистов организаций Роспотребнадзора в субъектах Российской Федерации по отбору, сбору и транспортировке проб материала для исследования на вирусы гриппа

Процедура по сбору и транспортировке проб от животных с целью диагностики вируса гриппа птиц с помощью молекулярных методов

Все работы по сбору, хранению и транспортировке полевого материала, подозрительного на содержание вируса гриппа птиц типа А, проводят в соответствии с санитарно-эпидемиологическими правилами СП 1.2.036-"Порядок учета, хранения, передачи и транспортирования микроорганизмов I - IV групп патогенности".

Работу по сбору полевого материала проводят в сезонной защитной одежде, дополненной респиратором, защитными очками и резиновыми перчатками.

Мазки из клоаки и трахеи берут сухими стерильными зондами с ватными тампонами. После забора материала тампон (рабочую часть зонда) помещают в стерильную одноразовую криопробирку с 1 мл стерильного фосфатно-солевого буферного раствора. Конец зонда отламывают или отрезают с расчетом, чтобы он позволил закрыть крышку пробирки.

Фекалии птиц следует собирать стерильным шпателем или стерильной ватной палочкой в пробирку. Объем образца - приблизительно 1 мл. Пробирку маркировать. Обязательно следует брать единичный (отдельный) образец свежих, невысохших, недолго лежащих фекалий. При долгом нахождении на открытом воздухе вирус разрушается под действием высыхания, ферментов фекалий и солнечного ультафиолета. Можно собирать свежие образцы при взлете моновидовой стаи птиц. В этом случае фиксировать вид птицы. При невозможности идентификации вида птицы, фиксировать приблизительно группу птиц, например: утка, кулик, чайка, крачка и т.д. Можно делать фото для последующего определения.

Криопробирки маркируются и помещаются в штатив для криопробирок. Закрытый штатив с криопробирками помещаются в термоконтейнер, содержащий сухой лед в количестве, достаточном для поддержания отрицательной температуры до доставки образцов в лабораторию, где штатив с образцами помещают в низкотемпературное хранилище при температуре ниже минус 40 0С, не допуская оттаивания образцов. На маркировке обязательно должно быть отражено, полевой номер образца, время и место сбора, вид птицы, от которой взята проба. Допускается маркировка только полевым номером, тогда вся дополнительная информация заносится в полевой журнал.

Состав фосфатно-солевого буферного раствора (ФСБР): NaCl-8 г, KCl-0,2 г, Na2HPO4 - 1,15 г, KH2PO4 - 0,2 г, H2Oдист - довести до 1 л. Автоклавировать ФСБР. К одному литру ФСБР добавить Пенициллин G -2*106 ед, Стрептомицин - 200 мг, Полимиксин B 2*106 ед, Гентамицин -250 мг, Нистатин -0,5*106 ед, Ofloxacin HCl - 60 мг, Sulfamethoxazole -200 мг. В случае отсутствия какого-то из антибиотиков - заменить аналогичным или делать без него. В стерильные пробирки добавить по 1 мл транспортной среды. Пробирки со средой предпочтительнее хранить при -200С, допускается при +40С.

Внутренние органы (фрагменты трахеи, легких, селезенки, мозга, синусы, воздухоносные мешки, кишечник) от забитой или павшей птицы, птенцов, а также мелких млекопитающих получают при вскрытии животных. При заборе проб органов используют стерильный хирургический инструмент (ножницы, скальпели, пинцеты) и стерильную посуду. Перед вскрытием тушку погружают в дезинфицирующий раствор (5% хлорамин Б) на 20-сек. При взятии проб органов животных место будущего разреза обрабатывают 5%-ным раствором йода или 70 %-ным раствором этилового спирта и стерильными инструментами разрезают кожу, мышцы брюшной стенки или кости черепа. Разрез стенки брюшной полости делают "фартуком", доводя боковые линии разреза по ребрам выше уровня сердца, и откидывают образовавшийся лоскут, чтобы обнажить внутренние органы. Перед взятием головного мозга срезают всю затылочную часть черепа. С помощью второго набора инструментов отсекают кусочки внутренних органов размером от небольшой горошины до лесного ореха, над пламенем горелки укладывают пробы в стерильные одноразовые пластиковые пробирки или контейнеры, герметично закрывают.

Криопробирки маркируются и помещаются в штатив для криопробирок. Закрытый штатив с криопробирками помещаются в термоконтейнер, содержащий сухой лед в количестве, достаточном для поддержания отрицательной температуры до доставки образцов в лабораторию, где штатив с образцами помещают в низкотемпературное хранилище при температуре ниже минус 40 0С, не допуская оттаивания образцов. На маркировке обязательно должно быть отражено, полевой номер образца, время и место сбора, вид птицы, от которой взята проба. Допускается маркировка только полевым номером, тогда вся дополнительная информация заносится в полевой журнал.

Транспортный термоконтейнер обертывают бумагой (обшивают материалом), ошнуровывают, опечатывают и транспортируют в лабораторию с нарочным. К доставляемому материалу прилагают сопроводительное письмо, акт упаковки. На термоконтейнере должен быть особый знак (ярлык с отметкой) "Опасно! Не открывать во время перевозки". Если предполагается хранение и транспортировка материала в термоконтейнере с сухим льдом, для забора материала используют герметичные пластиковые контейнеры, устойчивые к низким температурам, или криопробирки. Контейнеры с сухим льдом запрещается закрывать герметически, чтобы не препятствовать выходу медленно испаряющейся углекислоты. При работе с сухим льдом используют защитные хлопчато-бумажные перчатки.

Для обеспечения биологической безопасности работ при проведении эпизоотологического мониторинга в потенциальных природных очагах гриппа птиц необходимо учитывать следующее:

в проведении обследования участвуют сотрудники противочумных учреждений, а также могут привлекаться сотрудники других медико-биологических организаций и Институтов, имеющих допуск к работе с ПБА I групп патогенности. Вспомогательный персонал (водители, стрелки и т.п.) допускается к работе после проведения инструктажа;

весь состав отряда или экспедиции должен быть ознакомлен с требованиями биологической безопасности при работе с возбудителями природно-очаговых инфекций, циркулирующих на данной территории. Ответственным за соблюдение этих требований при проведении отлова диких животных и сбора полевого материала является руководитель (начальник) эпидемиологического отряда (экспедиции);

любой материал считается потенциально опасным в отношении возможного содержания возбудителей природно-очаговых болезней, свойственных той ландшафтной зоне, в пределах которой он собран;

рекогносцировочное обследование местности, установку орудий лова осуществляют в специальной одежде (комбинезон или противоэнцефалитный костюм, сапоги);

проверку выставленных орудий лова и сбор полевого материала проводят в рабочей одежде, дополненной фартуками и нарукавниками из водонепроницаемой ткани (пленки), резиновыми перчатками (2 пары) [по окончании работ фартуки, нарукавники и перчатки дезинфицируют];

для защиты органов дыхания используют одноразовые ватно-марлевые повязки или противопылевые респираторы (предпочтение отдается респираторам "Лепесток"или респираторам класса не ниже FFP2);

защиту органов зрения осуществляют плотно прилегающими очками;

дезинфекцию орудий лова и других инструментов проводят ежедневно по окончании работы путем прогревания на солнце (в летнее время), кипячения, обработки дезинфицирующими растворами с последующим проветриванием, ящики и отсадники обрабатываются дезинфицирующими растворами;

разбор полевого материала, вскрытие животных проводят в противочумном костюме I типа (защита органов дыхания аналогична п. 6 настоящего раздела, особенности забора материала и подготовки проб для транспортировки в лабораторию изложены в разделе 4.4. "Сбор полевого материала для лабораторного исследования");

по окончании работ, приведенных в п. 9, инструменты и защитную одежду дезинфицируют (см. приложение 4), использованные наконечники, пипетки обеззараживают погружением в 6 %-й раствор перекиси водорода на 60 мин, дозаторы обеззараживают двукратным протиранием с интервалом 15 мин 6 %-м раствором перекиси водорода (экспозиция 120 мин);

остатки полевого материала, не подлежащего лабораторному исследованию, сжигают или обеззараживают автоклавированием, образовавшиеся отходы помещают в вырываемые ямы, которые закапывают;

транспортировку материала в диагностическую лабораторию осуществляют транспортом экспедиции;

участники экспедиции подвергаются ежедневной термометрии, по окончании работ устанавливается обсервация сроком 7 дней;

аптечка экстренной профилактики должна быть укомплектована в соответствии с санитарно-эпидемиологическими правилами СП 1.3.1285-03 "Безопасность работы с микроорганизмами I-II групп патогенности (опасности)"и дополнена двумя из следующих противовирусных препаратов: озельтамивир, занамивир.

Процедура по сбору и транспортировке проб от людей с целью диагностики вируса гриппа с помощью молекулярных методов

Сбор клинического материала и его упаковку осуществляет медицинский работник медицинского учреждения, обученный требованиям и правилам биологической безопасности при работе и сборе материала, подозрительного на зараженность ВГПА. Забор производят в стерильные одноразовые флаконы, пробирки, контейнеры, стерильными инструментами. Все виды работ проводят с соблюдением противоэпидемического режима, согласно санитарно-эпидемиологическим правилам СП 1.3.1285-03 "Безопасность работы с микроорганизмами I-II групп патогенности (опасности)".

Упаковка, условия хранения и транспортирования материала для проведения лабораторной диагностики ВГПА должны соответствовать требованиям санитарно-эпидемиологических правил СП 1.2.036-95 "Порядок учета, хранения, передачи и транспортирования микроорганизмов I-IV групп патогенности".

Для исследования забирают следующие виды клинического материала:

- смывы из полости носа и ротоглотки;

- мазки из полости носа;

- носоглоточное отделяемое.

Перечисленные выше процедуры по забору клинического материала врачи осуществляют в противочумных костюмах IV типа (или длинном хирургическом халате, с завязками на спине, шапочках), дополненных ватно-марлевыми повязками или респираторами типа ШБ-1 (или РБ) "Лепесток-200". На руки надевают резиновые перчатки. Целесообразно также включать в исследование аспираты из трахеи, бронхоальвеолярный лаваж и биоптаты легких при возможности их забора.

Данные процедуры осуществляет врачебный персонал, одетый в противочумный костюм I типа (или длинный хирургический халат, с завязками на спине, дополненный фартуком, бахилами, косынкой, очками, ватно-марлевой повязкой или респиратором типа ШБ-1 (или РБ) "Лепесток-200"и перчатками). Выбор времени забора клинического материала очень важен, так как наиболее высокое содержание вируса в дыхательных органах человека регистрируется в течение первых четырех дней после появления признаков заболевания. Образцы должны быть собраны в течение 3 сут. после появления клинических признаков. Для постмортальной диагностики используют аутоптаты легких, трахеи и селезенки. От одного больного должно забираться не менее двух видов клинического материала. Обязательно следует забирать мазки из полости носа и роторлотки . Каждый образец материала помещают в отдельную транспортную криопробирку, содержащую транспортную среду, пробирка плотно герметично закрывается, после чего помещается в штатив для криопробирок. На маркировке обязательно должно быть отражено, номер образца, время и место сбора.

Допускается маркировка только номером, тогда вся дополнительная информация заносится в журнал, где указывается наименование направляющего учреждения, ФИО больного, возраст, место жительства, предварительный диагноз, эпидемиологический анамнез, вид материала, дата и время взятия материала.

Закрытый штатив с криопробирками помещаются в термоконтейнер, содержащий сухой лед в количестве, достаточном для поддержания отрицательной температуры до доставки образцов в лабораторию, где штатив с образцами помещают в низкотемпературное хранилище при температуре ниже минус 40 0С, не допуская оттаивания образцов. К наружной стенке термоконтейнера или термоса прикрепляют этикетку с указанием вида материала, условий транспортирования, названия пункта назначения. Транспортирование проб клинического материала в референс-лабораторию, вирусологические лаборатории и лаборатории учреждений противочумной системы Роспотребнадзора осуществляется нарочным(и), информированным о правилах доставки материала в соответствии с п. 3.4. санитарно-эпидемиологических правил СП 1.2.036-95 "Порядок учета, хранения, передачи и транспортирования микроорганизмов I-IV групп патогенности".

Транспортный термоконтейнер обертывают бумагой (обшивают материалом), ошнуровывают, опечатывают и транспортируют в лабораторию с нарочным. К доставляемому материалу прилагают сопроводительное письмо, акт упаковки. На термоконтейнере должен быть особый знак (ярлык с отметкой) "Опасно! Не открывать во время перевозки". Если предполагается хранение и транспортировка материала в термоконтейнере с сухим льдом, для забора материала используют герметичные пластиковые контейнеры, устойчивые к низким температурам, или криопробирки. Контейнеры с сухим льдом запрещается закрывать герметически, чтобы не препятствовать выходу медленно испаряющейся углекислоты. При работе с сухим льдом используют защитные хлопчато-бумажные перчатки.

Рекомендуется использование следующей стабилизирующей среды для хранения и транспортировки материала от людей для дальнейших вирусологических исследований:

Состав:

- среда для культур клеток N199, содержащая 0,5% BSA;

фильтрованием через нитроцеллюлозный стерильный фильтр в стерильную же посуду.- пенициллин 2 х 10(6) ед./л, стрептомицин 200 мг/л, полимиксин В 2 х 10(6) ед./л, гентамицин 250 мг/л, нистатин 0,5 х 10(6) ед./л.

Среда готовится в стерильных условиях, автоклавирование не допускается, можно стерилизовать фильтрованием.

Способы взятия, условия хранения и транспортирования клинического материала для лабораторной диагностики вируса гриппа

При работе соблюдают требования санитарно-эпидемиологических правил СП 1.2.036-95 "Порядок учета, хранения, передачи и транспортировки микроорганизмов I-IV групп патогенности".