Методические указания МУК 4.1.1736-03 "Измерение массовых концентраций 3-[([диметиламино]карбонил)окси)]-N,N,N-триметилбензаммония метилсульфата (прозерина) в воздухе рабочей зоны методом высокоэффективной жидкостной хроматографии" (утв. Главным государственным санитарным врачом РФ 29 июня 2003 г.)

Методические указания МУК 4.1.1736-03
"Измерение массовых концентраций 3-[([диметиламино]карбонил)окси)]-N,N,N-триметилбензаммония метилсульфата (прозерина) в воздухе рабочей зоны методом высокоэффективной жидкостной хроматографии"
(утв. Главным государственным санитарным врачом РФ 29 июня 2003 г.)

Дата введения: с момента утверждения

1. Область применения

Настоящие методические указания устанавливают количественный хроматографический анализ воздуха рабочей зоны на содержание прозерина в диапазоне массовых концентраций от 0,005 до 0,100 .

2. Характеристика вещества

2.1. Структурная формула

2.2. Эмпирическая формула .

2.3. Молекулярная масса 334,29.

2.4. Регистрационный номер CAS 51-60-5.

2.5. Физико-химические свойства.

Прозерин - кристаллический порошок белого цвета без запаха, горького вкуса. Гигроскопичен, на свету приобретает розоватый оттенок, 142-145°С. Хорошо растворим в воде и этиловом спирте, хорошо растворим в элюенте; рН водного раствора 5,9-7,5. Агрегатное состояние в воздухе - аэрозоль.

2.6. Токсикологическая характеристика.

Прозерин - высокотоксичное вещество с антихолинэстеразной активностью. Проникает через неповрежденные кожные покровы в количестве, вызывающем смертельное отравление. Необходима защита кожи и глаз.

Ориентировочный безопасный уровень воздействия (ОБУВ) в воздухе рабочей зоны - 0,01 .

3. Погрешность измерений

Методика обеспечивает выполнение измерений массовых концентраций прозерина с погрешностью не более % при доверительной вероятности 0,95.

4. Метод измерений

Измерения массовых концентраций прозерина основаны на использовании высокоэффективной жидкостной хроматографии с применением спектрофотометрического детектора при длине волны 220 нм.

Отбор проб проводится с концентрированием на фильтр.

Нижний предел измерения содержания прозерина в хроматографи-руемом объеме раствора 0,020 мкг.

Нижний предел измерения массовых концентраций прозерина в воздухе 0,005 (при отборе 800 воздуха).

Метод специфичен в условиях производства готовой лекарственной формы прозерина. Определению не мешают сопутствующие вещества (магния карбонат, лактоза, карбоксиметилцеллюлоза, магния оксид, тальк поливинилпирролидон низкомолекулярный твин-80).

5. Средства измерений, вспомогательные устройства, материалы, реактивы

5.1. Средства измерений, вспомогательные устройства, материалы

Хроматограф жидкостный микроколоночный типа "Милихром" со спектрофотометрическим детектором
Хроматографическая колонка стальная КАХ-44-3, 50х2 мм, заполненная сорбентом Сепарон С18, фракция 5 мкм
Весы аналитические ВЛА-200	ГОСТ 24104-88Е
Пробоотборное устройство ПУ-3Э	ГОСТ Р 51945-02
Фильтродержатель	ТУ 95.72.05-77
Испаритель ротационный вакуумный	ТУ 25-1173.102-84
Набор для фильтрации растворов, производство НПФ "Биохром"
Пинцет медицинский	ГОСТ 21241-89
Колбы мерные, вместимостью 25, 50 и 500	ГОСТ 1770-74Е
Цилиндр мерный, вместимостью 500	ГОСТ 1770-74Е
Колбы остродонные со шлифом, вместимостью 10	ГОСТ 25336-82Е
Бюксы 50/30	ГОСТ 25336-82Е
Пипетки, вместимостью 0,2, 1, 2, 5 и 10	ГОСТ 29227-91
Фильтры АФА-ВП-10	ТУ 95-743-80

5.2. Реактивы

Прозерин, ФС 42-3001-93, содержание основного вещества не менее 97%
Ацетонитрил "для жидкостной хроматографии"	ТУ-6-09-14-2167-84
Калий дигидрофосфат, хч	ГОСТ 4198-75
Кислота ортофосфорная, хч	ГОСТ 6552-58
Вода дистиллированная	ГОСТ 6709-72

Допускается применение иных средств измерения, вспомогательных устройств, реактивов и материалов, обеспечивающих показатели точности, установленные для данных методических указаний.

6. Требования безопасности

6.1. При работе с реактивами соблюдают требования безопасности, установленные для работы с токсичными, едкими и легковоспламеняющимися веществами по ГОСТ 12.1.005-88.

6.2. При проведении анализов горючих и вредных веществ соблюдают меры противопожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004-76.

6.3. При выполнении измерений с использованием хроматографа соблюдают правила электробезопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.019-79 и инструкцией по эксплуатации прибора.

7. Требования к квалификации оператора

К выполнению измерений и обработке результатов допускаются лица с высшим или средним специальным образованием, имеющие навыки работы на жидкостном хроматографе.

8. Условия измерений

8.1. Приготовление растворов и подготовку проб к анализу проводят в нормальных условиях при температуре воздуха ()°С, атмосферном давлении 84-106 кПа и относительной влажности воздуха не более 80%.

8.2. Измерения на жидкостном, хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

9. Подготовка к выполнению измерения

9.1. Приготовление растворов

9.1.1. Стандартный раствор N 1 прозерина в растворе элюента концентрацией 500 готовится растворением 25 мг вещества в мерной колбе вместимостью 50 .

9.1.2. Стандартный раствор N 2 прозерина в растворе элюента концентрацией 100 готовится разбавлением 10 стандартного раствора N 1 элюентом в мерной колбе вместимостью 50 . Растворы устойчивы в течение двух недель при хранении в холодильнике.

9.1.3. Раствор дигидрофосфата калия концентрацией 0,02 М готовят растворением 1,36 г указанной соли в 500 дистиллированной воды в колбе данного объема.

9.1.4. Раствор элюента готовят смешиванием с помощью мерного цилиндра 250 0,02 М раствора дигидрофосфата калия и 250 ацетонитрила. Раствор доводят до рН 3 ортофосфорной кислотой. Непосредственно перед измерением раствор фильтруют с помощью набора для фильтрации растворов.

9.2. Подготовка прибора

Общую подготовку прибора осуществляют согласно инструкции по эксплуатации.

9.3. Установление градуировочной характеристики

Градуировочную характеристику, выражающую зависимость величины хроматографического сигнала от массы анализируемого вещества в хроматографируемом объеме пробы, устанавливают по методу абсолютной градуировки с использованием серии градуировочных растворов, которые готовят разбавлением стандартного раствора N 2 в колбе вместимостью 25 согласно табл. 1.

Условия хроматографирования градуировочных смесей и анализируемых проб:

состав элюента: ацетонитрил-0,02 М дигидрофосфата калия, 1:1, рН 3;

скорость потока элюента 100 ; объем вводимой пробы 5 ;

длина волны спектрофотометрического детектора 220 нм;

время удерживания прозерина 2 мин 20 с.

Таблица 1

Растворы для установления градуировочной характеристики при определении прозерина

N стандарта	Стандартный раствор прозерина N 2,	Раствор элюента,	Концентрация вещества,	Содержание вещества в хроматографируемом объеме пробы, мкг
1	0	25,0	0	0
2	1,0	24,0	4	0,02
3	2,0	23,0	8	0,04
4	3,5	21,5	14	0,07
5	5,0	20,0	20	0,10
6	10,0	15,0	40	0,20
7	20,0	5,0	80	0,40

На полученной хроматограмме измеряют площади пиков с помощью интегратора хроматографа (в условных единицах) при анализе 6 растворов разных концентраций и холостой пробы, проводя не менее 5 параллельных определений для каждого раствора и холостой пробы, и строят градуировочную зависимость площади пика (в условных единицах) от количества компонента в пробе (мкг).

Проверку градуировочной характеристики проводят при изменении условий анализа, но не реже 1 раза в неделю.

9.4. Отбор пробы воздуха

Воздух с объемным расходом 40 аспирируют через фильтр АФА-ВП. Для измерения 1/2 ОБУВ прозерина достаточно отобрать 800 воздуха. Пробы можно хранить в течение недели

10. Выполнение измерения

Фильтр с отобранной пробой помещают с помощью пинцета в бюкс и приливают пипеткой 10 ацетонитрила. Отбирают пипеткой 5 раствора и сливают в колбу для упаривания. Степень десорбции с фильтра 96%. Упаривают раствор досуха на вакуумном испарителе при комнатной температуре и растворяют в 0,5 элюента. Хроматографирование раствора пробы проводят в тех же условиях, что и хроматографирование градуировочных растворов. Количественное определение содержания анализируемого вещества в растворе проводят по предварительно достроенной градуировочной характеристике.

11. Расчет концентраций

Массовую концентрацию прозерина (С, ) в воздухе вычисляют по формуле:

, где

а - содержание вещества в анализируемом объеме пробы, найденное по градуировочной характеристике, мкг,

б - объем пробы, взятой для хроматографирования, ;

в - общий объем раствора пробы после растворения сухого остатка, ;

- объем жидкой пробы после экстракции, ;

- объем жидкой пробы, взятой для упаривания, ;

V - объем воздуха, отобранного для анализа и приведенного к стандартным условиям, (см. прилож. 1)

12. Оформление результата анализа

Результат количественного анализа представляют в виде () , Р = 0,95, где - характеристика погрешности, .

13. Контроль погрешности методики

13.1. Значения полученных метрологических характеристик погрешности, норматива оперативного контроля точности и норматива оперативного контроля воспроизводимости приведены в табл. 2 в виде зависимости от значения массовой концентрации анализируемого компонента в пробе С.

Таблица 2

Результаты метрологической аттестации методики количественного химического анализа

Диапазон определяемых массовых концентраций прозерина,	Наименование метрологической характеристики
	характеристика погрешности (), ; Р = 0,95	норматив оперативного контроля погрешности (К), ; Р = 0,90, m = 2	норматив оперативного контроля воспроизводимости (D), ; Р = 0,95, m = 2
от 0,005 до 0,100	0,18С + 0,00037	0,09С + 0,0069	0,17С + 0,0048

13.2. Оперативный контроль воспроизводимости

Оперативный контроль воспроизводимости выполняют в одной серии с анализом рабочих проб. Отбирают реальные пробы воздуха рабочей зоны из одного традиционного места отбора двумя пробоотборниками одновременно. Анализируют в соответствии с прописью методики разными аналитиками, максимально варьируя условия проведения анализа: партии реактивов, наборы мерной посуды и т.д., и получают два результата и анализов. Результаты анализа не должны отличаться друг от друга на величину большую, чем норматив оперативного контроля воспроизводимости D:

При превышении расхождения между двумя результатами норматива оперативного контроля воспроизводимости эксперимент повторяют. При повторном превышении указанного норматива выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и устраняют их.

Внутренний оперативный контроль воспроизводимости проводят не реже, чем 1 раз в месяц.

ГАРАНТ:

Нумерация подразделов приводится в соответствии с источником

13.2. Оперативный контроль точности

Оперативный контроль точности выполняют в одной серии с анализом рабочих проб. Отбирают реальные пробы воздуха рабочей зоны из одного традиционного места отбора двумя пробоотборниками одновременно. Затем к одной пробе, отобранной на фильтр, добавляют анализируемый компонент из раствора, нанося его на фильтр. Результаты анализа без добавки и с добавкой получают по возможности в одинаковых условиях: одним аналитиком, с одной партией реактивов, с одним набором посуды и т.д. Величина добавки должна соответствовать 50-150% от содержания компонента в пробе, а величина не должна выходить за верхнюю границу диапазона измерения.

Погрешность процедуры отбора проб контролируют путем поверки используемых пробоотборников. Расчет норматива оперативного контроля погрешности К проводят по характеристике погрешности методики за вычетом характеристики погрешности пробоотборника. Решение об удовлетворительной погрешности принимают при выполнении условия:

Внутренний оперативный контроль точности проводят не реже, чем 1 раз в месяц.

14. Нормы затрат времени на анализ

Для проведения серии анализов из 6 проб при последовательном отборе проб воздуха требуется 4 ч.

Главный государственный санитарный врач Российской Федерации, Первый заместитель Министра здравоохранения Российской Федерации

Г.Г. Онищенко