Методические указания МУК 4.1.1738-03 "Измерение массовых концентраций 8-(3-(диметиламино)пропокси)-3,7-дигидро-1,3,7-триметил-1Н-пурин-2,6-дион а (проксифеина) в воздухе рабочей зоны методом высокоэффективной жидкостной хроматографии" (утв. Главным государственным санитарным врачом РФ 29 июня 2003 г.)

Методические указания МУК 4.1.1738-03
"Измерение массовых концентраций 8-(3-(диметиламино)пропокси)-3,7-дигидро-1,3,7-триметил-1Н-пурин-2,6-диона (проксифеина) в воздухе рабочей зоны методом высокоэффективной жидкостной хроматографии"
(утв. Главным государственным санитарным врачом РФ 29 июня 2003 г.)

Дата введения: с момента утверждения

1. Область применения

Настоящие методические указания устанавливают количественный хроматографический анализ воздуха рабочей зоны на содержание проксифеина в диапазоне массовых концентраций от 0,001 до 0,020 .

2. Характеристика вещества

2.1. Структурная формула

2.2. Эмпирическая формула .

2.3. Молекулярная масса 331,82.

2.4. Регистрационный номер CAS 65497-24-7.

2.5. Физико-химические свойства.

Проксифеин - кристаллическое вещество белого цвета, растворимо в воде и метиловом спирте, растворимо в смеси ацетонитрила и воды (элюенте), малорастворимо в эфире и других органических растворителях.

Агрегатное состояние в воздухе - аэрозоль.

2.6. Токсикологическая характеристика.

Проксифеин - высокотоксичное вещество. Способен проникать в организм через кожные покровы и через слизистые оболочки, оказывая иммунодепрессивное действие и токсическое влияние на кроветворную ткань, обладает способностью к функциональной кумуляции. Обладает слабым раздражающим действием на кожные покровы и слизистые оболочки. Необходима защита кожи и глаз.

Контрольный уровень измерения - 0,001 . Класс опасности - первый. Выброс в воздух рабочей зоны запрещен.

3. Погрешность измерений

Методика обеспечивает выполнение измерений массовых концентраций проксифеина с погрешностью не более при доверительной вероятности 0,95.

4. Метод измерений

Измерения массовой концентрации проксифеина основаны на использовании высокоэффективной жидкостной хроматографии с применением спектрофотометрического детектора при длине волны 278 нм.

Отбор проб проводится с концентрированием на фильтр.

Нижний предел измерения содержания проксифеина в хроматографируемом объеме раствора 0,020 мкг.

Нижний предел измерения концентрации проксифеина в воздухе 0,001 (при отборе 800 воздуха).

Метод специфичен в условиях производства готовой лекарственной формы проксифеина. Определению не мешают сопутствующие вещества (крахмал, целлюлоза микрокристаллическая, титана оксид, поливинилпирролидон низкомолекулярный).

5. Средства измерений, вспомогательные устройства, материалы, реактивы

5.1. Средства измерений, вспомогательные устройства, материалы

Хроматограф жидкостный микроколоночный "Милихром" со спектрофотометрическим детектором
Хроматографическая колонка стальная КАХ-44-3, 50х2 мм, заполненная сорбентом Сепарон С18, фракция 5 мкм
Весы аналитические ВЛА 200	ГОСТ 24104-88Е
Пробоотборное устройство ПУ-2Э	ГОСТ Р 51945-02
Фильтродержатель	ТУ 95.72.05-77
Пинцет медицинский	ГОСТ 21241-89
Набор для фильтрации растворов на 0,25 , производство НПФ "Биохром"
Испаритель ротационный вакуумный	ТУ 25-1173.102-84
Колбы мерные, вместимостью 50 и 500	ГОСТ 1770-74Е
Пипетки, вместимостью 0,2, 1, 2, 5 и 10	ГОСТ 29227-91
Цилиндр мерный, вместимостью 500	ГОСТ 1770-74Е
Бюксы 50/30	ГОСТ 25336-82Е
Колбы остродонные со шлифом, вместимостью 10	ГОСТ 25336-82Е
Фильтры АФА-ВП-10	ТУ 95-743-80

5.2. Реактивы

Проксифеин, содержание основного вещества не менее - 97%	ВФС 42-2812-96
Ацетонитрил "для жидкостной хроматографии"	ТУ-6-09-14-2167-84
Спирт метиловый, хч	ГОСТ 6995-77
Калий дигидрофосфат, хч	ГОСТ 4198-75
Кислота ортофосфорная, хч	ГОСТ 6552-58
Вода дистиллированная	ГОСТ 6709-72

Допускается применение иных средств измерения, вспомогательных устройств, реактивов и материалов, обеспечивающих показатели точности, установленные для данных методических указаний.

6. Требования безопасности

6.1. При работе с реактивами соблюдают требования безопасности, установленные для работы с токсичными, едкими и легковоспламеняющимися веществами по ГОСТ 12.1.005-88.

6.2. При проведении анализов горючих и вредных веществ соблюдают меры противопожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004-76.

6.3. При выполнении измерений с использованием хроматографа соблюдают правила электробезопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.019-79 и инструкцией по эксплуатации прибора.

7. Требования к квалификации оператора

К выполнению измерений и обработке результатов допускаются лица с высшим или средним специальным образованием, имеющие навыки работы на жидкостном хроматографе.

8. Условия измерений

8.1. Приготовление растворов и подготовку проб к анализу проводят в нормальных условиях при температуре воздуха ()°С, атмосферном давлении 84-106 кПа и относительной влажности воздуха не более 80%.

8.2. Измерения на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

9. Подготовка к выполнению измерения

9.1. Приготовление растворов

9.1.1. Стандартный раствор N 1 проксифеина в растворе элюента концентрацией 400 готовится растворением 20 мг вещества в мерной колбе вместимостью 50 .

9.1.2. Стандартный раствор N 2 проксифеина в растворе элюента концентрацией 40 готовится разбавлением элюентом 5 стандартного раствора N 1 в мерной колбе вместимостью 50 . Растворы устойчивы в течение месяца при хранении в холодильнике.

9.1.3. Раствор бигидрофосфата калия концентрацией 0,02 М готовят растворением 1,36 г указанной соли в дистиллированной воде в мерной колбе вместимостью 500 . Раствор можно хранить в течение месяца в холодильнике.

9.1.4. Раствор элюента готовят смешением с помощью мерного цилиндра 400 0,02 М раствора дигидрофосфата калия и 100 ацетонитрила. Раствор доводят до рН 5 ортофосфорной кислотой. Непосредственно перед измерением раствор фильтруют с помощью набора для фильтрации растворов.

9.2. Подготовка прибора

Общую подготовку прибора осуществляют согласно инструкции по эксплуатации.

9.3. Установление градуировочной характеристики

Градуировочную характеристику, выражающую зависимость величины хроматографического сигнала от массы анализируемого вещества в хроматографируемом объеме пробы, устанавливают по методу абсолютной градуировки с использованием серии градуировочных растворов, которые готовят разбавлением стандартного раствора N 2 согласно табл. 1. Градуировочные растворы устойчивы в течение месяца при хранении в холодильнике.

Растворы помещают в пробоотборное устройство хроматографа. Условия хроматографирования градуировочных смесей и анализируемых проб:

состав элюента: ацетонитрил - 0,02 М дигидрофосфат калия, 1:4, рН 5;

скорость потока элюента 100 ;

объем вводимой пробы 10 ;

длина волны спектрофотометрического детектора 278 нм;

время удерживания проксифеина 3 мин.

На полученной хроматограмме измеряют площади пиков с помощью интегратора хроматографа (в условных единицах) при анализе 6 растворов разных концентраций и холостой пробы, проводя не менее 5 параллельных определений для каждого раствора, и строят градуировочную зависимость площади пика от количества компонента в пробе (мкг).

Таблица 1

Растворы для установления градуировочной характеристики при определении проксифеина

N стандарта	Стандартный раствор проксифеина N 2,	Раствор элюента,	Концентрация вещества,	Содержание вещества в хроматографируемом объеме пробы, мкг
1	0	10	0	0
2	0,50	9,50	2	0,02
3	1,00	9,00	4	0,04
4	1,75	8,25	7	0,07
5	2,50	7,50	10	0,10
6	5,00	5,00	20	0,20
7	10,00	0	40	0,40

Проверку градуировочной характеристики проводят при изменении условий анализа, но не реже 1 раза в неделю.

9.4. Отбор пробы воздуха

Воздух с объемным расходом 40 аспирируют через фильтр АФА-ВП. Для измерения контрольного уровня содержания проксифеина достаточно отобрать 800 воздуха. Пробы можно хранить в течение трех суток.

10. Выполнение измерения

Фильтр с отобранной пробой помещают с помощью пинцета в бюкс с пришлифованной крышкой и приливают пипеткой 5 метилового спирта. Периодически встряхивая, выдерживают раствор в течение 5 мин. Отбирают раствор пипеткой в пробирку с пришлифованной пробкой, повторяют экстракцию и объединяют растворы. Степень экстракции с фильтра 95%. Отбирают 5 раствора, помещают в остродонную колбу со шлифом и упаривают досуха под вакуумом. Растворяют сухой остаток в 0,2 раствора элюента. Хроматографирование раствора пробы проводят в тех же условиях, что и хроматографирование градуировочных растворов. Количественное определение содержания анализируемого вещества в растворе проводят по предварительно построенной градуировочной характеристике.

11. Расчет концентрации

Массовую концентрацию проксифеина (С, ) в воздухе вычисляют по формуле:

, где

а - содержание вещества в анализируемом объеме пробы, найденное по градуировочной характеристике, мкг;

б - объем раствора пробы, взятого для хроматографирования, ;

в - общий объем раствора пробы после растворения сухого остатка, ;

- объем раствора пробы после экстракции, ;

- объем раствора пробы, взятого для упаривания, ;

V - объем воздуха, отобранного для анализа и приведенного к стандартным условиям, (см. прилож. 1).

12. Оформление результата анализа

Результат количественного анализа представляют в виде () , Р = 0,95, где - характеристика погрешности, .

13. Контроль погрешности методики

13.1. Метрологическая аттестация методики

Значения характеристики погрешности, норматива оперативного контроля погрешности и норматива оперативного контроля воспроизводимости приведены в табл. 2 в виде зависимости от значения массовой концентрации анализируемого компонента в пробе С.

Таблица 2

Результаты метрологической аттестации методики количественного химического анализа

Диапазон определяемых массовых концентраций проксифеина,	Наименование метрологической характеристики
	характеристика погрешности (), ; Р = 0,95	норматив оперативного контроля точности (К), ; Р = 0,90, m = 2	норматив оперативного контроля воспроизводимости (D), ; Р = 0,95, m = 2
от 0,001 до 0,020	0,2С + 0,0003	0,19С + 0,0004	0,14С + 0,0007

13.2. Оперативный контроль воспроизводимости

Оперативный контроль воспроизводимости выполняют в одной серии с анализом рабочих проб. Отбирают реальные пробы воздуха рабочей зоны из одного традиционного места отбора двумя пробоотборниками одновременно. Анализируют в соответствии с прописью методики, привлекая различных аналитиков и максимально варьируя условия проведения анализа: партии реактивов, наборы мерной посуды и т.д., и получают два результата и анализов. Результаты анализа не должны отличаться друг от друга на величину большую, чем норматив оперативного контроля воспроизводимости D:

При превышении расхождения между двумя результатами норматива оперативного контроля воспроизводимости эксперимент повторяют. При повторном превышении указанного норматива выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и устраняют их.

Внутренний оперативный контроль воспроизводимости проводят не реже, чем 1 раз в месяц.

13.3. Оперативный контроль точности

Оперативный контроль точности выполняют в одной серии с анализом рабочих проб. Отбирают реальные пробы воздуха рабочей зоны из одного традиционного места отбора двумя пробоотборниками одновременно. Затем к одной пробе, отобранной на фильтр, добавляют анализируемый компонент из раствора, нанося его на фильтр. Величина добавки должна соответствовать 50-150% от содержания компонента в пробе. Величина не должна выходить за верхнюю границу диапазона измерения. Результаты анализа без добавки и с добавкой получают по возможности в одинаковых условиях; одним аналитиком, с одной партией реактивов, одним набором посуды и т.д. Погрешность процедуры отбора проб контролируют путем поверки используемых пробоотборников. Расчет норматива оперативного контроля погрешности К проводят по характеристике погрешности методики за вычетом характеристики погрешности пробоотборника. Решение об удовлетворительной погрешности принимают при выполнении условия:

Внутренний оперативный контроль точности проводят не реже, чем 1 раз в месяц

14. Нормы затрат времени на анализ

Для проведения серии анализов из 6 проб при последовательном отборе проб воздуха требуется 6 ч.

Главный государственный санитарный врач Российской Федерации, Первый заместитель Министра здравоохранения Российской Федерации

Г.Г. Онищенко