Методические указания МУК 4.1.1748-03 "Измерение массовых концентраций стрихнидин-10-она нитрата (стрихнина нитрата) в воздухе рабочей зоны методом высокоэффективной жидкостной хроматографии" (утв. Главным государственным санитарным врачом РФ 29 июня 2003 г.)

Методические указания МУК 4.1.1748-03
"Измерение массовых концентраций стрихнидин-10-она нитрата (стрихнина нитрата) в воздухе рабочей зоны методом высокоэффективной жидкостной хроматографии"
(утв. Главным государственным санитарным врачом РФ 29 июня 2003 г.)

Дата введения: с момента утверждения

1. Область применения

Настоящие методические указания устанавливают количественный хроматографический анализ воздуха рабочей зоны на содержание стрихнина нитрата в диапазоне массовых концентраций от 0,0075 до 0,1500 .

2. Характеристика вещества

2.1 Структурная формула

2.2. Эмпирическая формула .

2.3. Молекулярная масса 397,4.

2.4. Регистрационный номер CAS 66-32-0.

2.5. Физико-химические свойства.

Стрихнина нитрат - кристаллический порошок белого цвета или бесцветные игольчатые блестящие кристаллы. Имеет чрезвычайно горький вкус. 268°С. Малорастворим в холодной воде и в этиловом спирте, хорошо растворим в кипящей воде, нерастворим в этиловом эфире, растворим в смеси ацетонитрила и воды 1:1 при рН 4, растворим в смеси ацетонитрила и уксусной кислоты. Водные растворы имеют нейтральную или слабокислую реакцию. Агрегатное состояние в воздухе - аэрозоль.

2.6. Токсикологическая характеристика.

Стрихнина нитрат - чрезвычайно токсичное вещество. Обладает нейротоксическим действием. Проникает через неповрежденные кожные покровы, необходима защита кожи и глаз.

Ориентировочный безопасный уровень воздействия (ОБУВ) в воздухе рабочей зоны - 0,015 .

3. Погрешность измерений

Методика обеспечивает выполнение измерений массовых концентраций стрихнина нитрата с погрешностью не более % при доверительной вероятности 0,95.

4. Метод измерений

Измерения массовых концентраций стрихнина нитрата основаны на использовании высокоэффективной жидкостной хроматографии с применением спектрофотометрического детектора при длине волны 254 нм.

Отбор проб проводится с концентрированием на фильтр.

Нижний предел измерения содержания стрихнина нитрата в хроматографируемом объеме раствора 0,040 мкг.

Нижний предел измерения массовых концентраций стрихнина нитрата в воздухе 0,0075 (при отборе 400 воздуха).

Метод специфичен в условиях производства готовой лекарственной формы стрихнина нитрата. Определению не мешают сопутствующие вещества (магния карбонат, натрия карбоксиметилцеллюлоза, аэросил, твин-80).

5. Средства измерений, вспомогательные устройства, материалы, реактивы

5.1. Средства измерений, вспомогательные устройства, материалы

Хроматограф жидкостный микроколоночный типа "Милихром" со спектрофотометрическим детектором
Хроматографическая колонка стальная КАХ-44-3, 50х2 мм, заполненная сорбентом
Сепарон С18, фракция 5 мкм
Весы аналитические ВЛА-200	ГОСТ 24104-88Е
Пробоотборное устройство ПУ-2Э	ГОСТ Р 51945-02
Фильтродержатель	ТУ 95.72.05-77
Ультразвуковая ванна УВМ-5	ТУ 25-7401.0111-93
Испаритель ротационный вакуумный	ТУ 25-1173.102-84
Набор для фильтрации растворов, производство НПФ "Биохром"
Пинцет медицинский	ГОСТ 21241-89
Колбы мерные, вместимостью 25, 50 и 500	ГОСТ 1770-74Е
Цилиндр мерный, вместимостью 500	ГОСТ 1770-74Е
Колбы остродонные со шлифом, вместимостью 10	ГОСТ 25336-82Е
Бюксы 50/30	ГОСТ 25336-82Е
Пипетки, вместимостью 0,2, 1, 2, 5 и 10	ГОСТ 29227-91
Фильтры АФА-ВП-10	ТУ 95-743-80

5.2. Реактивы

Стрихнин, ГФХ, ст. 639, содержание основного вещества не менее 97%
Кислота уксусная ледяная	ГОСТ 61-75
Ацетонитрил "для жидкостной хроматографии"	ТУ-6-09-14-2167-84
Калий дигидрофосфат, хч	ГОСТ 4198-75
Кислота ортофосфорная, хч	ГОСТ 6552-58
Вода дистиллированная	ГОСТ 6709-72

Допускается применение иных средств измерения, вспомогательных устройств, реактивов и материалов, обеспечивающих показатели точности, установленные для данных методических указаний.

6. Требования безопасности

6.1. При работе с реактивами соблюдают требования безопасности, установленные для работы с токсичными, едкими и легковоспламеняющимися веществами по ГОСТ 12.1.005-88.

6.2. При проведении анализов горючих и вредных веществ соблюдают меры противопожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004-76.

6.3. При выполнении измерений с использованием хроматографа соблюдают правила электробезопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.019-79 и инструкцией по эксплуатации прибора.

7. Требования к квалификации оператора

К выполнению измерений и обработке результатов допускаются лица с высшим или средним специальным образованием, имеющие навыки работы на жидкостном хроматографе.

8. Условия измерений

8.1. Приготовление растворов и подготовку проб к анализу проводят в нормальных условиях при температуре воздуха ()°С, атмосферном давлении 84-106 кПа и относительной влажности воздуха не более 80%.

8.2. Измерения на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

9. Подготовка к выполнению измерения

9.1. Приготовление растворов

9.1.1. Стандартный раствор N 1 стрихнина нитрата в растворе элюента концентрацией 500 готовится растворением 25 мг вещества в мерной колбе вместимостью 50 . При растворении колбу помещают на 5 мин в ультразвуковую ванну.

9.1.2. Стандартный раствор N 2 стрихнина нитрата в растворе элюента концентрацией 100 готовится разбавлением 5 стандартного раствора N 1 в колбе вместимостью 50 . Растворы устойчивы в течение месяца при хранении в холодильнике.

9.1.3. Раствор дигидрофосфата калия концентрацией 0,02 М готовят растворением 1,36 г указанной соли в 500 дистиллированной воды в колбе данного объема.

9.1.4. Раствор элюента готовят смешиванием с помощью мерного цилиндра 250 0,02 М раствора дигидрофосфата калия и 250 ацетонитрила. Раствор доводят до рН 4 ортофосфорной кислотой. Непосредственно перед измерением раствор фильтруют с помощью набора для фильтрации растворов.

9.1.5. Раствор уксусной кислоты в ацетонитриле готовят в мерной колбе на 100 , Приливают в колбу несколько ацетонитрила, добавляют пипеткой 2 уксусной кислоты и доводят до метки ацетонитрилом.

9.2. Подготовка прибора

Общую подготовку прибора осуществляют согласно инструкции по эксплуатации.

9.3. Установление градуировочной характеристики

Градуировочную характеристику, выражающую зависимость величины хроматографического сигнала от массы анализируемого вещества в хроматографируемом объеме пробы, устанавливают по методу абсолютной градуировки с использованием серии растворов согласно табл. 1.

Растворы помещают в пробоотборное устройство хроматографа.

Условия хроматографирования градуировочных смесей и анализируемых проб:

состав элюента: ацетонитрил - 0,02 М дигидрофосфат калия, 1:1, рН4;

скорость потока элюента 100 ;

объем вводимой пробы 10 ;

длина волны спектрофотометрического детектора 254 нм;

время удерживания стрихнина нитрата 2 мин 20 с.

Таблица 1

Растворы для установления градуировочной характеристики при определении стрихнина нитрата

N стандарта	Стандартный раствор стрихнина нитрата N 2,	Раствор элюента,	Концентрация вещества,	Содержание вещества в хроматографируемом объеме пробы, мкг
1	0	25,0	0	0
2	1,0	24,0	4	0,04
3	2,0	23,0	8	0,08
4	3,5	21,5	14	0,14
5	5,0	20,0	20	0,20
6	10,0	15,0	40	0,40
7	20,0	5,0	80	0,80

На полученной хроматограмме измеряют площади пиков с помощью интегратора хроматографа (в условных единицах) при анализе 6 растворов разных концентраций и холостой пробы, проводя не менее 5 параллельных определений для каждого раствора, и строят градуировочную зависимость площади пика (в условных единицах) от количества компонента в пробе (мкг). Проверку градуировочной характеристики проводят при изменении условий анализа, но не реже 1 раза в неделю.

9.4. Отбор пробы воздуха

Воздух с объемным расходом 20 аспирируют через фильтр АФА-ВП. Для измерения содержания стрихнина нитрата на уровне 1/2 ОБУВ достаточно отобрать 400 воздуха. Пробы можно хранить в течение недели.

10. Выполнение измерения

Фильтр с отобранной пробой помещают с помощью пинцета в бюкс и приливают пипеткой 7,5 раствора уксусной кислоты в ацетонитриле, обрабатывают ультразвуком в течение 5 мин. Отбирают пипеткой 5 раствора и сливают в колбу для упаривания. Степень десорбции с фильтра 95%. Упаривают раствор досуха на вакуумном испарителе при комнатной температуре и растворяют в 0,5 элюента, обрабатывая ультразвуком в течение 5 мин. Хроматографирование раствора пробы проводят в тех же условиях, что и хроматографирование градуировочных растворов. Количественное определение содержания анализируемого вещества в растворе проводят по предварительно построенной градуировочной характеристике.

11. Расчет концентрации

Массовую концентрацию стрихнина нитрата (С, ) в воздухе вычисляют по формуле:

, где

а - содержание вещества в анализируемом объеме пробы, найденное по градуировочной характеристике, мкг;

б - объем пробы, взятой для хроматографирования, ;

в - общий объем раствора пробы после растворения сухого остатка, ;

- объем жидкой пробы после экстракции, ;

- объем жидкой пробы, взятой для упаривания, ;

V - объем воздуха, отобранного для анализа и приведенного к стандартным, условиям, (см, прилож. 1).

12. Оформление результата анализа

Результат количественного анализа представляют в виде () , Р = 0,95, где - характеристика погрешности, .

13. Контроль погрешности методики

Значения характеристики погрешности, норматива оперативного контроля погрешности и норматива оперативного контроля воспроизводимости приведены в табл. 2 в виде зависимости от значения массовой концентрации анализируемого компонента в пробе С.

Таблица 2

Результаты метрологической аттестации методики количественного химического анализа

Диапазон определяемых массовых концентраций стрихнина нитрата,	Наименование метрологической характеристики
	характеристика погрешности (), ; Р = 0,95	норматив оперативного контроля погрешности (К), , Р = 0,90, m = 2	норматив оперативного контроля воспроизводимости, (D), ; Р = 0,95, m = 2
от 0,0075 до 0,1500	0,18С + 0,0005	0,20С+0,0009	0,13С+0,0011

13.1. Оперативный контроль воспроизводимости

Оперативный контроль воспроизводимости выполняют в одной серии с анализом рабочих проб. Отбирают реальные пробы воздуха рабочей зоны из одного традиционного места отбора двумя пробоотборниками одновременно. Анализируют в соответствии с прописью методики разными аналитиками, максимально варьируя условия проведения анализа: партии реактивов, наборы мерной посуды и т.д., и получают два результата и анализов. Результаты анализа не должны отличаться друг от друга на величину большую, чем норматив оперативного контроля воспроизводимости D:

При превышении расхождения между двумя результатами норматива оперативного контроля воспроизводимости эксперимент повторяют. При повторном превышении указанного норматива выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и устраняют их.

Внутренний оперативный контроль воспроизводимости проводят не реже, чем 1 раз в месяц.

13.2. Оперативный контроль точности

Оперативный контроль точности выполняют в одной серии с анализом рабочих проб. Отбирают реальные пробы воздуха рабочей зоны из одного традиционного места отбора двумя пробоотборниками одновременно. Затем к одной пробе, отобранной на фильтр, добавляют анализируемый компонент из раствора, нанося его на фильтр. Результаты анализа без добавки и с добавкой получают по возможности в одинаковых условиях: одним аналитиком, с одной партией реактивов, одним набором посуды и т.д. Величина добавки должна соответствовать 50-150% от содержания компонента в пробе, а величина не должна выходить за верхнюю границу диапазона измерения.

Погрешность процедуры отбора проб контролируют путем поверки используемых пробоотборников. Расчет норматива оперативного контроля погрешности К проводят по характеристике погрешности методики за вычетом характеристики погрешности пробоотборника. Решение об удовлетворительной погрешности принимают при выполнении условий:

Внутренний оперативный контроль точности проводят не реже, чем 1 раз в месяц.

14. Нормы затрат времени на анализ

Для проведения серии анализов из 6 проб при последовательном отборе проб воздуха требуется 3,5 ч.

Главный государственный санитарный врач Российской Федерации, Первый заместитель Министра здравоохранения Российской Федерации

Г.Г. Онищенко