Методические указания МУК 4.1.1752-03 "Измерение массовых концентраций 1-[(4-фторфенил)метил]-N-[1-[2-(4-метоксифенил)этил] пиперидин-4-ил]-1H-бензимидазол-2-амина (астемизола) в воздухе рабочей зоны методом высокоэффективной жидкостной хроматографии" (утв. Главным государственным санитарным врачом РФ 29 июня 2003 г.)

Методические указания МУК 4.1.1752-03
"Измерение массовых концентраций 1-[(4-фторфенил)метил]-N-[1-[2-(4-метоксифенил)этил] пиперидин-4-ил]-1H-бензимидазол-2-амина (астемизола) в воздухе рабочей зоны методом высокоэффективной жидкостной хроматографии"
(утв. Главным государственным санитарным врачом РФ 29 июня 2003 г.)

Дата введения: с момента утверждения

1. Область применения

Настоящие методические указания устанавливает количественный хроматографический анализ воздуха рабочей зоны на содержание астемизола в диапазоне массовых концентраций от 0,025 до 0,500

2. Характеристика вещества

2.1. Структурная формула

2.2. Эмпирическая формула

2.3. Молекулярная масса 458,63.

2.4. Регистрационный номер CAS 68844-77-9.

2.5. Физико-химические свойства,

Астемизол (1-[(4-фторфенил)метил]-N-[1-[2-(4-метоксифенил)этил]-4-пи перидинил]-1н-бензимидазол-2-амин) - кристаллическое вещество белого цвета, растворимо в этиловом спирте, плохо растворимо в воде, растворимо в элюенте.

Агрегатное состояние в воздухе - аэрозоль.

2.6. Токсикологическая характеристика.

Астемизол обладает общетоксическим действием.

Предельно допустимая концентрация (ПДК) в воздухе рабочей зоны 0,05 . Класс опасности - первый.

3. Погрешность измерений

Методика обеспечивает выполнение измерений массовых концентраций астемизола с погрешностью не более при доверительной вероятности 0,95.

4. Метод измерений

Измерения массовых концентраций астемизола основаны на использовании высокоэффективной жидкостной хроматографии с применением спектрофотометрического детектора при длине волны 278 нм.

Отбор проб проводится с концентрированием на фильтр.

Нижний предел измерения содержания астемизола в хроматографируемом объеме раствора 0,02 мкг.

Нижний предел измерения массовых концентраций астемизола в воздухе 0,025 (при отборе 800 воздуха).

Метод специфичен в условиях производства готовой лекарственной формы астемизола. Определению не мешают сопутствующие вещества (магния карбонат, натрия карбоксиметилцеллюлоза, титана оксид, тальк, твин-80).

5. Средства измерений, вспомогательные устройства, материалы, реактивы, растворы

5.1. Средства измерений, вспомогательные устройства, материалы

Хроматограф жидкостный микроколоночный "Милихром" со спектрофотометрическим детектором
Хроматографическая колонка стальная КАХ-44-3, 50x2 мм, заполненная сорбентом
Сепарон С18, фракция 5 мкм
Весы аналитические ВЛА-200	ГОСТ 24104-88Е
Пробоотборное устройство ПУ-3Э	ГОСТ Р 51945-02
Фильтродержатель	ТУ 95.72.05-77
Ультразвуковая ванна УЗВ 1.3, производство ПКФ "Сапфир"
Набор для фильтрации растворов, производство НПФ "Биохром"
Пинцет медицинский	ГОСТ 21241-89
Колбы мерные, вместимостью 25, 50 и 500	ГОСТ 1770-74Е
Цилиндр мерный, вместимостью 500	ГОСТ 1770-74E
Бюксы 50/30	ГОСТ 25336-82Е
Пипетки, вместимостью 0,2, 1, 2, 5 и 10	ГОСТ 29227-91
Фильтры АФА-ВП-10	ТУ 95-743-80

5.2. Реактивы

Астемизол, N регистрации 009069 от 13.09.97, содержание основного вещества не менее 99,5%
Ацетонитрил "для жидкостной хроматографии"	ТУ-6-09-14-2167-84
Калий дигидрофосфат, хч	ГОСТ 4198-75
Кислота ортофосфорная, хч	ГОСТ 6554-58
Вода дистиллированная	ГОСТ 6709-72

Допускается применение иных средств измерения, вспомогательных устройств, реактивов и материалов, обеспечивающих показатели точности, установленные для данных методических указаний.

6. Требования безопасности

6.1. При работе с реактивами соблюдают требования безопасности, установленные для работы с токсичными, едкими и легковоспламеняющимися веществами по ГОСТ 12.1.005-88.

6.2. При проведении анализов горючих и вредных веществ соблюдают меры противопожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004-76.

6.3. При выполнении измерений с использованием хроматографа соблюдают правила электробезопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.019-79 и инструкцией по эксплуатации прибора,

7. Требования к квалификации оператора

К выполнению измерений и обработке результатов допускаются лица с высшим или средним специальным образованием, имеющие навыки работы на жидкостном хроматографе.

8. Условия измерений

8.1. Приготовление растворов и подготовку проб к анализу проводят в нормальных условиях при температуре воздуха ()°С, атмосферном давлении 630-800 мм рт. ст. и относительной влажности воздуха не более 80%.

8.2. Измерения на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

9. Подготовка к выполнению измерения

9.1. Приготовление растворов

9.1.1. Стандартный раствор N 1 астемизола в растворе элюента концентрацией 1 готовится растворением 25 мг вещества в мерной колбе вместимостью 25 .

9.1.2. Стандартный раствор N 2 астемизола в растворе элюента концентрацией 100 готовится разбавлением 5 стандартного раствора N 1 элюентом в мерной колбе на 50 . Растворы устойчивы в течение двух недель при хранении в холодильнике.

9.1.3. Раствор дигидрофосфата калия концентрацией 0,02 М готовят растворением 1,36 г указанной соли в дистиллированной воде в колбе вместимостью 500 .

9.1.4. Раствор элюента готовят смешиванием с помощью мерного цилиндра вместимостью 500 ; 400 0,02 М раствора дигидрофосфата калия и 100 ацетонитрила смешивают в мерной колбе вместимостью 500 . Раствор доводят до рН 6 ортофосфорной кислотой. Непосредственно перед измерением раствор фильтруют с помощью набора для фильтрации растворов.

9.2. Подготовка прибора

Общую подготовку прибора осуществляют согласно инструкции по эксплуатации.

9.3. Установление градуировочной характеристики

Градуировочную характеристику, выражающую зависимость величины хроматографического сигнала от массы анализируемого вещества в хроматографируемом объеме пробы, устанавливают по методу абсолютной градуировки с использованием серии градуировочных растворов, которые готовят в колбе вместимостью 20 разбавлением стандартного раствора астемизола согласно табл. 1. Растворы устойчивы в течение недели при хранении в холодильнике.

Таблица 1

Растворы для установления градуировочной характеристики при определении астемизола

N стандарта	Стандартный раствор N 2 астемизола,	Раствор элюента,	Концентрация вещества,	Содержание вещества в хроматографируемом объеме пробы, мкг
1	0	20,0	0	0
2	0,8	19,2	4	0,02
3	1,6	18,4	8	0,04
4	2,4	17,6	12	0,06
5	4,0	16,0	20	0,10
6	10,0	10,0	50	0,25
7	16,0	4,0	80	0,40

Растворы помещают в пробоотборное устройство хроматографа. Условия хроматографирования градуировочных смесей и анализируемых проб:

состав элюента: ацетонитрил-0,02 М дигидрофосфат калия, 4:1, pH 6;

скорость потока элюента 100 ;

объем вводимой пробы 5 ;

длина волны спектрофотометрического детектора 278 нм;

время удерживания астемизола 2 мин.

На полученной хроматограмме измеряют высоты пиков с помощью интегратора хроматографа (в условных единицах) при анализе 6 растворов разных концентраций и растворителя, проводя не менее 5 параллельных определений для каждого раствора, и строят градуировочную зависимость площади пика (в условных единицах) от количества компонента в пробе (мкг).

Проверку градуировочной зависимости проводят при изменении условий анализа, но не реже 1 раза в неделю.

9.4. Отбор пробы воздуха

Воздух с объемным расходом 50 аспирируют через фильтр АФА-ВП. Для измерения 1/2 ПДК достаточно отобрать 800 воздуха. Пробы можно хранить в течение трех суток.

10. Выполнение измерения

Фильтры с отобранными пробами помещают с помощью пинцета в бюкс и приливают пипеткой 5 раствора элюента. Периодически встряхивая, выдерживают раствор в течение 5 мин. Степень десорбции с фильтра 92%. Хроматографирование раствора пробы проводят в тех же условиях, что и хроматографирование градуировочных растворов. Количественное определение содержания анализируемого вещества в растворе проводят по предварительно построенной градуировочной характеристике.

11. Расчет концентрации

Массовую концентрацию астемизола (С, ) в воздухе вычисляют по формуле:

, где

а - содержание вещества в анализируемом объеме пробы, найденное по градуировочной характеристике, мкг;

б - объем пробы, взятой для хроматографирования, ;

в - общий объем раствора пробы, ;

V - объем воздуха, отобранного для анализа и приведенного к стандартным условиям, (см. прилож. 1).

12. Оформление результата анализа

Результат количественного анализа представляют в виде () , Р = 0,95, где - характеристика погрешности, .

13. Контроль погрешности методики

Значения полученных метрологических характеристик погрешности, норматива оперативного контроля точности и норматива оперативного контроля воспроизводимости приведены в табл. 2 в виде зависимости от значения массовой концентрации анализируемого компонента в пробе С.

Таблица 2

Результаты метрологической аттестации методики количественного химического анализа астемизола

Диапазон определяемых концентраций астемизола,	Наименование метрологической характеристики
	характеристика погрешности (), ; Р = 0,95	норматив оперативного контроля точности (К), ; P = 0,90, m = 2	норматив оперативного контроля воспроизводимости (D), ; Р = 0,95, m = 2
от 0,025 до 0,500	0,21С + 0,002	0,21С + 0,003	0,17С + 0,005

13.1. Оперативный контроль воспроизводимости

Оперативный контроль воспроизводимости выполняют в одной серии с анализом рабочих проб. Отбирают реальные пробы воздуха рабочей зоны из одного традиционного места отбора двумя пробоотборниками одновременно. Анализируют в соответствии с прописью методики разными аналитиками, максимально варьируя условия проведения анализа: партии реактивов, наборы мерной посуды и т.д., и получают два результата и анализов. Результаты анализа не должны отличаться друг от друга на величину большую, чем норматив оперативного контроля воспроизводимости D:

При превышении расхождения между двумя результатами норматива оперативного контроля воспроизводимости эксперимент повторяют. При повторном превышении указанного норматива выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и устраняют их.

Внутренний оперативный контроль воспроизводимости проводят не реже, чем 1 раз в месяц.

13.2. Оперативный контроль точности

Оперативный контроль точности выполняют в одной серии с анализом рабочих проб. Отбирают реальные пробы воздуха рабочей зоны из одного традиционного места отбора двумя пробоотборниками одновременно. Затем к одной пробе, отобранной на фильтр, добавляю анализируемый компонент из раствора, нанося его на фильтр. Результаты анализа без добавки и с добавкой получают по возможности в одинаковых условиях: одним аналитиком, с одной партией реактивов, одним набором посуды и т.д. Величина добавки должна соответствовать 50-150% от содержания компонента в пробе, а величина не должна выходить за верхнюю границу диапазона измерения.

Погрешность процедуры отбора проб контролируют путем поверки используемых пробоотборников. Расчет норматива оперативного контроля погрешности К проводят по характеристике погрешности методики за вычетом характеристики погрешности пробоотборника. Решение об удовлетворительной погрешности принимают при выполнении условия:

Внутренний оперативный контроль точности проводят не реже, чем 1 раз в месяц.

14. Нормы затрат времени на анализ

Для проведения серии анализов из 6 проб требуется 3 ч.

Главный государственный санитарный врач Российской Федерации, Первый заместитель Министра здравоохранения Российской Федерации

Г.Г. Онищенко