Приложение III. Валидация методов обнаружения, идентификации и количественного анализа события трансформации и требования к контрольным образцам и сертифицированному справочному материалу

Приложение III

Валидация методов обнаружения, идентификации и количественного анализа события трансформации и требования к контрольным образцам и сертифицированному справочному материалу

1. Введение

1. В целях имплементации Статьи 5(3)(i) и (j), Статьи 17(3)(i) и (j) Регламента (ЕС) 1829/2003 настоящим Приложением устанавливаются требования к:

(a) характеристикам эффективности представленного(ых) метода(ов);

(b) техническим требованиям, касающимся вида информации, которую заявитель должен предоставить таким образом, чтобы подтвердить, что указанные требования соблюдены;

(c) образцам пищевых продуктов и кормов и их контрольным образцам;

(d) сертифицированному справочному материалу.

2. Заявитель должен включить информацию о методе как таковом, а также о методе испытания, проведенного заявителем.

3. Заявитель также должен принимать во внимание дополнительные руководящие указания и информацию об оперативных процедурах процесса валидации, предоставленную референтной лабораторией ЕС (EURL), указанной в Статье 32 Регламента (ЕС) 1829/2003, получающей поддержку со стороны Европейской сети лабораторий ГМО*.

2. Определения

Для целей настоящего Приложения применяются следующие определения:

(a) "сертифицированный справочный материал" означает справочный материал, указанный в Статьях 5(3)(j) и 17(3)(j) Регламента (EC) 1829/2003, и представляет собой любой материал или вещество, одно или несколько свойств которых имеют значения, которые являются сертифицированными для целей калибровки и контроля качества применяемых методов. К сертифицированному справочному материалу прилагается сертификат, который содержит значение определенного свойства, связанную с ним неопределенность и декларацию о метрологической прослеживаемости;

(b) "требования к эффективности метода" означают критерии минимальной эффективности, которые метод должен продемонстрировать на момент завершения валидационного исследования, проведенного EURL в соответствии с признанными на международном уровне техническими положениями.

3. Валидация метода

3.1. Информация о методе

A. Метод(ы) должен (должны) содержать указание всех методологических шагов, необходимых для анализа соответствующего пищевого и кормового материала в соответствии со Статьями 5(3)(i) и 17(3)(i) Регламента (EC) 1829/2003.

Для определенного пищевого и кормового материала методологические шаги должны включать методы экстракции ДНК и последующего количественного анализа в системе полимеразной цепной реакции (ПЦР) в режиме реального времени. В таком случае весь процесс (от экстракции до ПЦР-метода) представляет собой один метод. Заявитель должен предоставить информацию о методе в целом.

B. Заявителю должно быть предоставлено право сослаться на имеющиеся и подходящие валидированные протоколы методов модулей, используемые в аналитической процедуре, такие, как протокол экстракции ДНК из определенной матрицы.

В указанном случае заявитель должен предоставить экспериментальные данные внутренней валидации, в ходе которой метод модуля был успешно применен в контексте заявления для авторизации.

C. Заявитель должен продемонстрировать, что метод(ы) удовлетворяет(ют) следующим требованиям:

1. метод(ы) должен (должны) быть специфичным(и) для события трансформации (далее - "специфичными для события") и, таким образом, должны быть функциональными только для генетически модифицированного организма или полученного на его основе генетически модифицированного продукта, и не должны быть функциональными при применении к другим, уже авторизированным событиям трансформации; в противном случае метод не может применяться для однозначного обнаружения/идентификации/количественного анализа. Вышеуказанное должно быть продемонстрировано посредством отбора нецелевых трансгенных авторизованных событий трансформации и природных аналогов. Данное исследование должно включать тесно связанные события трансформации;

2. метод(ы) должен (должны) применяться к образцам пищевых продуктов или кормов, контрольным образцам и сертифицированному справочному материалу;

3. при разработке метода обнаружения заявитель должен принимать во внимание следующие документы:

(a) пищевые продукты - методы анализа для обнаружения генетически модифицированных организмов и производных продуктов - общие требования и определения: ISO 24276;

(b) пищевые продукты - методы анализа для обнаружения генетически модифицированных организмов и производных продуктов - экстракция нуклеиновой кислоты: ISO 21571;

(c) пищевые продукты - методы анализа для обнаружения генетически модифицированных организмов и производных продуктов - количественные методы с использованием нуклеиновой кислоты: ISO 21570;

(d) пищевые продукты - методы анализа для обнаружения генетически модифицированных организмов и производных продуктов - качественные методы с использованием нуклеиновой кислоты: проект европейского стандарта ISO 21569;

4. метод также должен учитывать более детальные требования, изложенные в общих критериях, установленных EURL и ENGL в отношении минимальных требований к эффективности аналитических методов испытания ГМО. Данные критерии являются частью руководящих указаний EURL.

D. В целях имплементации Статей 5(3)(i) и 17(3)(i) Регламента (EC) 1829/2003 заявитель должен представить специфичный(ые) для события метод(ы) количественного обнаружения генетически модифицированного материала. Заявитель должен рассмотреть валидность и ограничения методов обнаружения в различных видах пищевых продуктов и кормов (различных матрицах), которые предназначены для размещения на рынке.

Е. Заявитель должен представить полное и подробное описание метода.

Заявителем должны быть четко указаны следующие аспекты:

1. научная основа: заявитель должен представить общее описание принципов работы метода. Данное общее описание должно включать ссылки на соответствующие научные публикации;

2. сфера применения метода: заявитель должен указать матрицу(ы) (например, обработанный пищевой продукт, сырье), вид образцов и процентный диапазон случаев, к которым может применяться указанный метод;

3. оперативные характеристики метода: должно быть указано оборудование, необходимое для применения метода, имеющее отношение к анализу как таковому и к подготовке образца. Дополнительная информация о любых важнейших специфических аспектах применения метода также должна быть предоставлена;

4. протокол: заявитель должен предоставить полный оптимизированный протокол метода. Протокол должен содержать все детали, необходимые для передачи и независимого применения метода в других лабораториях;

5. модель прогнозирования (или аналогичный инструмент), необходимая для интерпретации результатов и подведения выводов, должна быть описана в подробных деталях. Заявителем должны быть предоставлены инструкции для правильного применения модели;

6. заявителем должны быть представлены схемы селекции, которые подлежат применению при изготовлении генетически модифицированных пищевых продуктов и кормов, а также данные об их влиянии на интерпретацию результатов.

3.2. Информация о проведенном заявителем испытании метода

A. Заявитель должен предоставить все имеющиеся и необходимые данные в отношении проведенной оптимизации и испытаниях метода.

Вышеупомянутые данные и результаты должны быть предоставлены во всех возможных и необходимых случаях при использовании указанных в пункте 3.1.C.4. параметров эффективности. Заявитель должен также предоставить резюме проведенного испытания и его основных результатов, а также все данные, включая резко отклоняющиеся значения.

B. Заявитель должен обеспечить, чтобы предоставленная информация демонстрировала надежность метода применительно к межлабораторной передаваемости. Для этой цели заявитель должен представить результаты испытания метода как минимум одной лаборатории, которая отличается от лаборатории, разработавшей метод.

C. Заявитель должен предоставить следующую информацию в отношении разработки и оптимизации метода:

1. испытанные пары праймеров и при необходимости проба, включая обоснование того, каким образом и почему была выбрана предлагаемая пара праймеров;

2. исследование стабильности, которое осуществляется путем представления экспериментальных результатов испытания метода при использовании различных сортов растений;

3. специфичность, которая определяется путем предоставления информации о полной последовательности введенного(ых) фрагмента(ов) в стандартном электронном формате вместе с данными о базовых парах принимающих фланкирующих последовательностей таким образом, чтобы EURL могла провести оценку специфичности предложенного метода путем выполнения поиска гомологии в молекулярной базе данных;

4. точность, относительное стандартное отклонение повторяемости, которое должно быть меньше или равно 25% по отношению к массовой доле во всем динамическом диапазоне метода.

D. Помимо информации, требуемой согласно положениям Разделов A, B и C, заявитель должен предоставить следующую информацию в отношении исследования:

1. участвующие лаборатории, время анализа и общее описание экспериментального дизайна, включая подробную информацию о количестве серий, образцов, репликаций и т.д.;

2. описание лабораторных образцов (в частности, размер, качество, дата отбора образца), положительного и отрицательного контроля, а также сертифицированного справочного материала, использованных плазмид и подобных им веществ;

3. описание подходов, которые были использованы в анализе результатов испытаний и резко отклоняющихся значений;

4. любые конкретные моменты, наблюденные в ходе испытания;

5. ссылки на соответствующую литературу или технические положения, использованные при проведении исследования.

3.3. Образцы пищевых продуктов и кормов и их контрольные образцы

В целях имплементации Статей 5(3)(j) и 17(3)(j) Регламента (EC) 1829/2003 наряду с информацией, требуемой в соответствии с Разделами 1, 2 и 3 настоящего Приложения, заявитель также должен предоставить образцы пищевых продуктов и кормов и их контрольные образцы тех видов и в том количестве, которые устанавливаются EURL применительно к конкретному заявлению для авторизации.

Прилагаемая к контрольным образцам информация должна включать данные о селекции растения, которое использовалось для изготовления контрольных образцов, а также данные о зиготности введенного(ых) фрагмента(ов).

Заявитель может использовать один и тот же исходный материал для изготовления сертифицированного справочного материала и для изготовления контрольных образцов.

4. Сертифицированный справочный материал

Сертифицированный справочный материал должен изготавливаться в соответствии с ISO Guide 34 (Общие требования к компетентности производителей справочного материала) производителем, аккредитованным согласно ISO Guide 34.

Заявитель должен предоставить информацию о месте, где можно получить доступ к сертифицированному справочному материалу. К указанной информации должны прилагаться достоверные сведения, подтверждающие то, что наличие сертифицированного справочного материала будет обеспечиваться на протяжении всего периода валидности авторизации. Для проверки и задания значений должен использоваться метод, который был надлежащим образом валидирован (смотреть ISO/IEC 17025: Общие требования к компетентности испытательных и калибровочных лабораторий).

Неопределенности должны быть оценены в соответствии с ISO Guide по Экспрессии неопределенности в измерении (GUM).

Основными характеристиками вышеуказанных признанных на международном уровне технических положений являются следующие:

1. контейнеры, содержащие генетически модифицированный справочный материал:

(a) контейнер, содержащий генетически модифицированный справочный материал (например, колбы, флаконы, ампулы), должен быть герметичным и должен содержать количество материала не меньшее, чем то, которое указано;

(b) коммутативность генетически модифицированного справочного материала должна быть гарантирована;

(c) упаковка должна соответствовать цели использования материала;

(d) маркировка должна иметь хороший внешний вид и качество.

2. Исследование однородности:

(a) образцы должны иметь соответствующую однородность;

(b) однородность содержимого в отдельных контейнерах должна быть проверена;

(c) любая возможная неоднородность содержимого в отдельных контейнерах должна быть учтена в общей оценке неточности справочного материала. Вышеуказанное требование должно применяться даже в тех случаях, когда отсутствует статистически значимая изменчивость содержимого в отдельных контейнерах. В указанном случае общая неточность должна включать либо изменчивость, обусловленную методом, либо фактически исчисленную изменчивость содержимого в отдельных контейнерах, в зависимости от того, какое значение изменчивости является большим.

3. Исследование стабильности:

(a) образцы должны обладать соответствующей стабильностью;

(b) стабильность должна положительно подтверждаться соответствующей статистической экстраполяцией срока годности генетически модифицированного справочного материала, который должен быть в пределах указанной неопределенности; неопределенность, связанная с вышеуказанным подтверждением, является частью оценки неточности справочного материала. Заданные значения являются действительными только в течение ограниченного периода времени и являются предметом мониторинга стабильности.

4. Характеристика партии:

1. Методы, используемые для проверки и сертификации, должны:

(a) применяться в условиях, которые являются приемлемыми с метрологической точки зрения;

(b) быть надлежащим образом проверенными в техническом отношении перед использованием;

(c) иметь точность и правильность, совместимые с целевой неопределенностью.

2. Каждая серия измерений должна:

(a) быть прослеживаемой по указанным ссылкам;

(b) сопровождаться указанием неопределенности при наличии возможности.

3. Участвующие лаборатории должны:

(a) иметь необходимую компетенцию для выполнения задачи;

(b) быть в состоянии обеспечить прослеживаемость по необходимым указанным ссылкам;

(c) быть в состоянии провести оценку неточности их измерения;

(d) иметь достаточные и соответствующие системы обеспечения качества.

5. Окончательное хранение:

1. во избежание ухудшения качества после производства образца все образцы до начала измерений должны храниться в условиях, предусмотренных для окончательного хранения генетически модифицированного сертифицированного справочного материала;

2. в противном случае они должны транспортироваться "от двери к двери" и постоянно содержаться в таких условиях хранения, при которых было доказано отсутствие любого влияния на заданные значения.

6. Введение сертификата для сертифицированного справочного материала

Должен быть введен сертификат, дополняемый отчетом о сертификации и содержащий всю информацию, которая является значимой и необходимой для пользователя.

Сертификат и отчет должны предоставляться во время дистрибуции генетически модифицированного сертифицированного справочного материала.

Информация, прилагаемая к сертифицированному справочному материалу, должна включать данные о селекции растения, которое использовалось для изготовления справочного материала, а также данные о зиготности введенного(ых) фрагмента(ов).

Сертифицированное значение содержания ГМО должно быть указано в массовой доле и, при наличии, в количестве копий на эквивалент гаплоидного генома.

Сертифицированные значения (например, количество генетически модифицированного материала, выраженное в массовой доле) должны быть прослеживаемыми по указанным ссылкам и должны сопровождаться декларацией о расширенной неопределенности, действительной в течение всего срока годности генетически модифицированного сертифицированного справочного материала.

______________________________

* http://gmo-crl.jrc.ec.europa.eu/guidancedocs.htm.