Приложение 8. Состав и прописи питательных сред для первичного выделения культур

Приложение 8

Состав и прописи питательных сред для первичного выделения культур

Трехсахарный агар с мочевиной (Рессель I)

Состав:

N п/п	Ингредиенты	Количество
1	Сухой питательный агар	25,0 г
2	Глюкоза	1,0-1,5 г
3	Лактоза	7,0-10,0 г
4	Мочевина	3,0 г
5	Кальций хлористый	2,0 г
6	Феноловый красный, 1%-й водный р-р	2,0 мл
7	Метиленовый синий	1,0 мл
8	Вода дистиллированная	1 л

Приготовление

Твердые ингредиенты помещают в дистиллированную воду в любой последовательности. После того, как растворится агар, смесь нагревают до кипения, добавляют индикаторы - феноловый красный и метиленовый синий. РН 7,0-7,2 (в горячем виде среда грязно-зеленого цвета), разливают по пробиркам (5-6 мл в каждую) и стерилизуют автоклавированием 15 мин под давлением 0,5 атм.

Свежестерилизованная среда приобретает желтый или желто-оранжевый цвет в результате восстановления (обесцвечивание) метиленового синего при автоклавировании.

Осторожным встряхиванием (!) каждой пробирки в наклонном положении вновь придают еще горячей среде её исходную грязно-серую окраску. Это происходит за счет окисления метиленового синего кислородом воздуха.

Среду скашивают, оставляя столбик высотой 2 см и косую поверхность 4-5 см. Застывшая среда должна в течение 2-3 дней "дозреть", т.е. приобрести однотонную сиреневато-светло-коричневую окраску, что свидетельствует об окислении, т.е. о восстановлении цветности метиленового синего по всей глубине среды. Посев культуры осуществляют штрихами по скошенной поверхности и уколом в столбик среды.

Трехсахарный агар с сахарозой и маннитом (Рессель II)

Состав:

N п/п	Ингредиенты	Количество
1	Дистиллированная вода	1 л
2	Сухой питательный агар	25,0 г
3	Сухой пептон (Семипалатинский)	10,0 г
4	Сахароза	8,0-10,0 г
5	Маннит	0,8-10,0 г
6	Цистин	0,4 г
7	Тиосульфат натрия (гипосульфит)	0,3 г
8	Железоаммониевые квасцы	0,4 г
9	Феноловый красный, 1%-й водный р-р	3,5-4,0 мл
10	Крахмал	2,0 г

Приготовление

Ингредиенты вводят в следующем порядке: в холодной воде растворить квасцы, затем добавить крахмал и сухой питательный агар, дать им хорошо раствориться, после чего внести остальные компоненты.

Среду доводят до кипения, устанавливают рН 7.2-7,4, разливают в пробирки по 7-8 мл, автоклавируют при 0,5-0,7 атм. 15-20 мин, после чего скашивают. Цвет среды розово-красный.

Универсальный скошенный столбик

Состав:

N п/п	Ингредиенты	Количество
1	Агар сухой питательный	3,5 г
2	Лактоза	0,4 г
3	Глюкоза	0,08 г
4	Крахмал растворимый	0,05 г
5	Сахароза	1,5 г
6	Мочевина	0,25 г
7	Уксусно-кислый свинец	0,03 г
8	Тиосульфат натрия	0,03 г
9	Цистин	0,003 г
10	Феноловый красный, 1%-й водный р-р	2,5 мл
11	Дистиллированная вода	100 мл

Приготовление

Ингредиенты вносить в любом порядке. Количество питательного агара, вносимого в среду, зависит от его серии. Если на этикетке указано, что на 100 мл воды его надо брать 5 г, то в среду добавляют 3,5 г, если на этикетке имеется рекомендация 3,5 г на 100 мл, то добавляют 2,5 г. Среду кипятить в течение 10-15 мин, разливать в стерильные пробирки по 5 мл, автоклавировать при 0,5 атм. 15 мин, после чего скашивать. Цвет среды абрикосовый.