Приложение. Требования к производственным и контрольным штаммам микроорганизмов

Приложение
к положению о порядке апробации новых
биологических препаратов, применяемых
в животноводстве и ветеринарии,
утвержденному 19 июля 1978 г.

Требования к производственным и контрольным штаммам микроорганизмов

1. Основные определения

1.1. Штамм - культура определенного вида микроорганизма с характерными для него генетически закрепленными свойствами.

1.2. В зависимости от степени патогенности производственные штаммы подразделяют на вирулентные ("полевые" или эпизоотические) и аттенуированные (вакцинные).

2. Производственные штаммы

2.1. Все производственные и контрольные штаммы должны быть классифицированы, клонированы и представлять собой однородную популяцию микроорганизмов, происходящих из одной клетки или вируссодержащей бляшки. Допускается наличие не более 5% диссоциированных форм при условии отсутствия отрицательного влияния их на генетические свойства штамма.

2.2. Производственные штаммы, предназначенные для изготовления инактивированных ("убитых") вакцин, анатоксинов или диагностикумов, - культуры типичных представителей определенных родов и видов микроорганизмов - должны сохранять высокий уровень вирулентности. Этот уровень устанавливается на соответствующем (определенном) виде восприимчивых сельскохозяйственных и лабораторных животных, птице, развивающихся эмбрионах птиц или культурах клеток и выражается количеством соответственно , , , , . По антигенным и другим свойствам производственные штаммы должны соответствовать (быть идентичными) большинству циркулирующих эпизоотических штаммов.

2.3. Вакцинный штамм - аттенуированная культура, стабильно сохраняющая высокий уровень иммуногенности при значительном снижении вирулентности с обязательным наличием характерных генетических признаков (маркеров), отличающих ее от "полевых" штаммов данного вида микроорганизмов.

2.4. Вакцинные штаммы не должны обладать выраженной контагиозностью. Допускается "остаточная" контагиозность и вирулентность штаммов при условии, что не вызывает их реверсии, они сохраняют на допустимом уровне вирулентность и это свойство является наследственно закрепленным.

Стабильность свойств (стойкость аттенуации) вакцинных штаммов проверяют многократными (не менее пяти) последовательными пассажами штаммов через организм восприимчивых животных (естественных хозяев данного вида возбудителя и чувствительных к нему лабораторных "моделей").

2.5. Вакцинный штамм должен обладать способностью размножаться и расселяться (приживляться) в организме восприимчивого животного, вызывая скоропроходящую генерализацию, которая сменяется наличием регионарных "находок" культуры вакцинного штамма и наступлением в большинстве случаев стерильной фазы иммунитета.

Длительность диссеминации культур разных штаммов может колебаться от нескольких суток до нескольких месяцев.

2.6. Дозы культур вакцинных штаммов выражают определенным количеством живых микроорганизмов, заключенных в единице объема.

2.7. Вирусы вакцинных штаммов должны иметь определенные титры активности (инфекционности) в той или иной конкретной биологической системе (макроорганизмах, развивающихся эмбрионах птиц, культурах клеток, тканей), а бактериофаги - на соответствующих им микроорганизмах.

2.8. Для каждого вакцинного штамма должны быть определены сроки его выделения от иммунизированных животных во внешнюю среду (с мочой, фекалиями, слюной, молоком и др.).

2.9. Живые культуры вакцинных штаммов, а также инактивированные вакцины и анатоксины должны вызывать образование длительного и напряженного иммунитета у 70-100% однократно вакцинированных животных в зависимости от их возраста и других физиологических особенностей.

2.10. Для определения иммунитета у вакцинированных животных необходимо иметь отработанные контрольные (вирулентные) штаммы микроорганизмов тех видов, против которых используют живые и инактивированные вакцины.

Контрольные штаммы должны отвечать всем требованиям, предъявляемым к производственным вирулентным штаммам.

3. Паспортизация штаммов

3.1. В паспортах на производственные штаммы, предназначаемые для изготовления из них препаратов (вакцин, анатоксинов, бактериофагов и диагностикумов), а также на контрольные штаммы указывают: лимиты вирулентности, за пределами которых данные штаммы для изготовления и контроля указанных препаратов считаются непригодными; естественно восприимчивых к ним сельскохозяйственных и лабораторных животных, основные пути и методы их заражения, продолжительность инкубационного периода, а также опасность для человека; подробную характеристику серологических свойств с указанием времени образования специфических антител у вакцинированных животных и титров антител соответственно в РСК, РДСК, РП, РДП в агаровом геле, РА, РЗГА, РН, , РНГА и других реакциях.

4. Хранение штаммов

4.1. Производственные и контрольные штаммы, как правило, хранят в лиофилизированном состоянии при минусовых температурах.

В процессе высушивания активность вирусов не должна снижаться более чем на 1,5 логарифма, а отмирание микробных клеток - превышать 50%.

4.2. Производственные штаммы хранят в строгом соответствии с инструкцией и другими указаниями, изданными Министерством сельского хозяйства СССР, по вопросу порядка хранения, обращения, отпуска, а также вывоза и ввоза в СССР из зарубежных стран культур микроорганизмов, токсинов и ядов животного и растительного происхождения, во Всесоюзном государственном научно-контрольном институте ветеринарных препаратов или в другом учреждении (с разрешения Главного управления ветеринарии) в виде эталонных образцов, используемых для производства и контроля соответствующих вакцин, анатоксинов и диагностикумов.

Дубликаты эталонных штаммов хранят в лиофильно-высушенном состоянии в ампулах в архивах отделов биологического контроля ВГНКИ ветеринарных препаратов, на биологических предприятиях, изготавливающих из них соответствующие вакцины, анатоксины и диагностикумы, с подробными на них паспортами.