Наставление по проведению симультанной аллергической пробы с применением туберкулина и комплексного аллергена из атипичных микобактерий (КАМ) при диагностике туберкулеза у животных (утв. Главным управлением ветеринарии Минсельхоза СССР 27 ноября 1978 г.)

1. Симультанную аллергическую пробу применяют для исследования на туберкулез крупного и мелкого рогатого скота и кур в условно благополучных по туберкулезу животных хозяйствах при первичной постановке диагноза на туберкулез, а также в благополучных хозяйствах в случае, если у животных (включая кур) реакции на туберкулин обусловлены атипичными микобактериями или кислотоустойчивыми сапрофитами.

Проба является групповой и дает возможность ориентироваться в ситуации по туберкулезу лишь в целом по стаду или группе исследуемых животных.

2. Симультанная проба заключается в одновременном внутрикожном введении животным двух аллергенов - сухого очищенного туберкулина, соответствующего виду исследуемых животных (для млекопитающих или для птиц), и сухого очищенного комплексного аллергена из атипичных микобактерий (КАМ) и в определении различия в интенсивности реакций на эти аллергены.

3. Исследование животных проводят комиссионно с участием представителя ветеринарного отдела областного (краевого) управления сельского хозяйства, министерства сельского хозяйства автономной республики или главного управления (управления) ветеринарии министерства сельского хозяйства союзной республики, не имеющей областного деления.

4. Проведение симультанной пробы допускается не ранее чем через 30 дней после последней туберкулинизации животных.

5. Туберкулин и КАМ непосредственно перед использованием растворяют в растворителе, содержащемся в ампулах (флаконах), рассылаемых биопредприятием вместе с аллергенами, в соответствии с наставлениями по применению этих препаратов.

При проведении исследования животных обработку кожи в месте инъекции аллергенов, подготовку к использованию шприцев и инъекционных игл проводят в порядке, указанном в наставлении по применению туберкулинов.

6. Туберкулин и КАМ вводят с противоположных сторон тела строго симметрично млекопитающим животным в дозе 0,2 мл, птицам - 0,1 мл:

крупному рогатому скоту (кроме быков и волов) - внутрикожно в области средней трети шеи, быкам (волам) - также внутрикожно в подхвостовые складки;

козам, овцам - в толщу нижних век, ниже края век на 1,5-2 см;

курам - в бородки.

7. Учет и оценку реакции па туберкулин и КАМ проводят у крупного рогатого скота через 72 часа, у овец и коз - через 48 часов, у кур - через 30-36 часов.

При учете реакции у каждого исследуемого животного пальпируют место введения аллергенов, а у крупного рогатого скота (за исключением быков и волов), кроме того, при обнаружении изменений в коже на введение хотя бы одного аллергена измеряют кутиметром толщину кожной складки в миллиметрах и определяют величину ее утолщения сравнением с толщиной неизмененной складки кожи.

8. Животных считают реагирующими на аллергены:

крупный рогатый скот (кроме быков и волов) - при утолщении кожной складки на 2 мм и более (независимо от характера реакции);

быков (волов), овец, коз и кур - при образовании припухлости в месте введения препаратов, степень которой оценивается в плюсах (+, ++, +++, ++++).

Степень проявления реакции (в миллиметрах, плюсах) является показателем ее интенсивности.

9. Результаты исследования записывают в ведомость учета симультанной пробы (см. приложение 1). По таблице (см. приложение 2) определяют достоверность различия в интенсивности реакций у животных на туберкулин и КАМ, при этом учитывают только тех животных, которые реагируют на туберкулин с различием в интенсивности реакций на аллергены.

Примечание. Под достоверностью понимают степень различия в проявлении реакций на туберкулин и КАМ, которая дает возможность с уверенностью не менее 95% сделать заключение о состоянии по туберкулезу исследуемой группы животных.

10. Достоверно большая интенсивность реакции на туберкулин указывает на выражение животных туберкулезом соответствующего им вида (млекопитающих - возбудителем туберкулеза бычьего или человеческого, птиц - птичьего вида); при достоверно более выраженной реакции на КАМ реакции на туберкулин считают обусловленными другими причинами.

При отсутствии достоверности различия в интенсивности реакций на туберкулин и КАМ результаты симультанной пробы считают неопределенными. В этом случае часть животных, реагирующих в большей степени на туберкулин, подвергают убою и исследованию на туберкулез. Окончательное заключение о состоянии стада или группы животных по туберкулезу делают по результатам патологоанатомического или лабораторного исследований.

В некоторых хозяйствах возможно инфицирование животных туберкулезными и нетуберкулезными микобактериями. В этом случае при достоверно более интенсивной реакции на КАМ в целом по стаду (группе) у отдельных животных могут наблюдаться реакции на туберкулин при менее выраженных или совсем отсутствующих реакциях на КАМ. Для уточнения диагноза такие животные подлежат убою и исследованию на туберкулез.

Примеры пользования ведомостью учета симультанной пробы и таблицей определения различия реакций на туберкулин и КАМ у животных

В ведомости в верхней ее части представлен пример учета результатов исследования животных, у которых оценка реакции проводится по утолщению кожной складки в миллиметрах (крупный рогатый скот, кроме быков и волов), в нижней части - по степени припухлости в плюсах в месте введения аллергенов (быки, волы, овцы, козы, куры). В правой графе указывается результат сравнительной оценки интенсивности реакций на туберкулин и КАМ у исследуемых животных, обозначенный знаками "+", "-" или "=", выражающими соответственно большую, меньшую или равную степень реакции на туберкулин по сравнению с реакцией на КАМ. Количество плюсов и минусов используют при определении достоверности различия в интенсивности реакций по таблице.

Как указано в пункте 9, при определении достоверности различия в интенсивности реакций на аллергены животных, не реагирующих на туберкулин, не учитывают. Не подлежат также учету животные с равными реакциями на оба аллергена. Таким образом, в примере, приведенном в верхней части ведомости, имеются лишь 17 животных с отличающимися реакциями ("+" или "-"). Из этого числа подсчитывают большее количество животных с одинаковым результатом сравнения реакций ("+" или "-"). В данном случае больше животных (14), реагирующих на туберкулин интенсивнее (обозначены знаком "+"), чем на КАМ. Согласно таблице (приложение 2), различие в интенсивности реакций при учете ее у 17 животных (первая графа таблицы) достоверно при условии, если не менее 13 из них (вторая графа таблицы) имеют одинаковый результат сравнения реакций ("+" или "-:"). В примере таких животных 14. Следовательно, можно сделать вывод, что реакции на туберкулин с достоверностью не менее 95% более интенсивны, чем на КАМ, это свидетельствует о заражении животных возбудителем туберкулеза бычьего или человеческого типа.

В примере, приведенном в нижней части ведомости, видно, что различие в интенсивности реакций на аллергены недостоверно (из 14 учитываемых животных реакции менее выражены на туберкулин только у 9). В этом случае с животными следует поступить, как указано во втором абзаце пункта 10 наставления.