Приложение А (справочное). Результаты исследований компоненты неопределенности, связанной с этапами приготовления подпроб и исходной суспензии

Приложение А
(справочное)

Результаты исследований компоненты неопределенности, связанной с этапами приготовления подпроб и исходной суспензии

А.1 Презентация протокола экспериментальных исследований

Исследования были организованы AFSSA (Франция) в интересах ИСО/ТК34/ПК9 в 2003 и 2004 годах. Задачей исследований была оценка степени влияния различных матриц (пищевых продуктов) на компоненты неопределенности измерений, связанные с такими этапами микробиологического анализа, как отбор подпроб из пробы, представленной на анализ (т.е. из аналитической пробы) и приготовление исходной суспензии [18].

Протокол испытаний включал в себя приготовление для каждой пробы продукта восьми образцов для испытаний, как показано на рисунке А.1.

Рисунок А.1 - Схема процедуры экспериментальных исследований

На рисунке А.1:

- индексами ИС(А) и ИС(В) обозначены две исходные суспензии, приготовленные независимо друг от друга и в условиях, настолько различных, насколько это возможно (т.е. были привлечены к работе разные операторы, использованы разные весы, разные партии разбавителя и пр.);

- словами "Условия 1" и "Условия 2" обозначены две группы условий испытаний, отличающиеся между собой настолько, насколько это возможно (разные операторы, разные партии культуральных сред, разные термостаты и пр.);

- индексами , и т.п. обозначены две повторности испытаний, осуществленные в условиях повторяемости (т.е. две серии разбавлений исходной суспензии для каждого из вариантов условий испытаний).

Необходимо отметить, что рисунок 2 настоящего стандарта, иллюстрирующий процедуру проведения экспериментальных исследований (см. 5.2.2), - это упрощенный вариант рисунка А.1: из всех результатов-повторностей, присутствующих на рисунке А.1, на рисунке 2 указаны только результаты-повторности и .

А.2 Результаты

А.2.1 Общие сведения

В экспериментальных исследованиях принимали участие 79 лабораторий, и каждая из них проводила испытания с использованием одного или более методов анализа, одной или более матриц, в результате чего были сформированы 124 комплекта результатов испытаний {1 лаборатория х 1 метод х 1 матрица}. Из них 28 комплектов были отвергнуты, как не отвечающие заданным критериям приемки результата испытаний для его использования в проводившихся исследованиях.

Таким образом, были получены 96 численных значений стандартных отклонений воспроизводимости (), относящихся к одной лаборатории, одному методу анализа и одной матрице. Кроме того, дисперсионный анализ предоставил возможность для каждого стандартного отклонения воспроизводимости оценить вклад в варьирование результатов анализа, связанный с тремя источниками неопределенности:

a) источник, связанный с матрицей, с операцией отбора подпроб для испытаний и с операцией приготовления исходного разбавления;

b) источник, связанный с условиями воспроизводимости (оператор/время);

c) случайные погрешности в условиях повторяемости.

А.2.2 Классификация матриц

На основе результатов этих исследований была уточнена классификация матриц.

Было предложено различать четыре категории матриц в зависимости от физического состояния продукта:

- Категория i): жидкие и порошкообразные продукты (такие как молоко, молоко кокоса, сухое молоко и т.п.);

- Категория ii): хорошо перемешанные твердые продукты (такие как молотое мясо, протертый мясной фарш, паштеты, взбитый крем, молочное мороженое, соевая паста и т.п.);

- Категория iii): продукты, состоящие из небольших (или очень небольших) твердых частиц (такие как сушеная петрушка или сушеные грибы, тертая морковь или пастернак, сухие корма, дробленый фундук и т.п.);

- Категория iv): иные твердые продукты (такие как мясо в кусках, сыры, кондитерские изделия и т.п.).

Эти физические свойства продуктов существенно влияют на величину и величину стандартных отклонений из-за двух источников неопределенности: один из них связан с влиянием матрицы (включая этап отбора подпроб) на результаты анализа, а другой связан с этапом приготовления исходного разбавления. Парные сравнения показали наличие статистически значимых различий результатов, полученных для двух первых категорий матриц (жидкости, порошки и хорошо перемешанный твердый продукт), и результатов, относящихся к двум последним категориям (продукты из небольших по размеру твердых частиц и иного вида продукты).

Для продуктов двух первых категорий матрицы были ответственны за часть величины стандартного отклонения, составляющую примерно 0,1 единиц (см. примечание в 5.3) от общего значения стандартного отклонения, независимо от того, в какой лаборатории проводятся испытания и какая микрофлора проверяется. Для двух других категорий матриц не представилось возможным оценить порядок величины эффекта вне зависимости от вида микрофлоры и от лаборатории. Заметим, что большинство продуктов двух последних категорий могут быть измельчены с помощью блендера, и тогда они могут рассматриваться как продукты, относящиеся ко второй категории матриц.

А.2.3 Конкретные результаты

Конкретные результаты, основанные на использовании 96 комплектов измерений, представлены в таблицах А.1 - А.5 для каждого из видов целевых микроорганизмов.

В каждой из таблиц:

- категория матрицы установлена в соответствии с А.2.2;

- представляет собой "компоненту" стандартного отклонения, возникающую из-за варьирования свойств исходной суспензии (включая влияние матрицы и влияние этапов приготовления подпроб и исходной суспензии);

- - стандартное отклонение воспроизводимости;

- представляет собой "компоненту" стандартного отклонения, возникающую из-за варьирования условий проведения испытаний (включая такие факторы, как оператор и время проведения испытаний);

- представляет собой остаточное стандартное отклонение (включая эффекты случайных ошибок).

Значения всех стандартных отклонений выражены в логарифмической шкале как (КОЕ/г) или ().

Таблица А.1 - Стандартные отклонения при определении аэробной мезофильной микрофлоры

Код лаборатории	Наименование продукта	Категория
2	Рыба	iv	0,36	0,43	0,23	0,06
2	Замороженная молотая телятина	ii	0,07	0,25	0,24	0,06
3	Кондитерские изделия	iv	0,12	0,18	0,11	0, 07
4	Рыба	iv	0,37	0,51	0,29	0,20
7	Готовые к употреблению кулинарные изделия	iv	0,24	0,33	0,17	0,13
8	Молотая говядина в вакуумной упаковке	ii	0,09	0,15	0,10	0,06
10	Упакованный листовой салат	iii	0,10	0,45	0,17	0,41
10	Порошок сушеного лука	ii	0,17	0,24	0,13	0,11
11	Паштет	iv	0,72	0,78	0,10	0,29
11	Кондитерские изделия	iv	0,05	0,19	0,12	0,13
11	Сушеные грибы	iii	0,14	0,26	0,15	0,16
12	Кожа куриных шеек	iv	0,19	0,20	0,06	0,02
13	Приготовленные улитки	iv	0,06	0,13	0,10	0,05
14	Кондитерские изделия	iv	0,32	0,35	0, 11	0,08
20	Кожа куриных шеек	iv	0,14	0,16	0,05	0,06
20	Протертый фарш из мяса индейки	ii	0,10	0,13	0,06	0,05
20	Протертый фарш из куриного мяса	ii	0,10	0,14	0,09	0,05
25	Паштет	iv	0,46	0,47	0,07	0,03
26	Сыр из непастеризованного молока	iv	0,16	0,26	0,09	0,19
27	Ветчина ломтиками	iv	0,30	0,31	0,06	0,05
30	Кондитерские изделия	iv	0,09	0,12	0,06	0,05
31	Тертая морковь	iii	0,09	0,14	0,08	0,08
32	Сырые свиные сосиски	iv	0,20	0,24	0,12	0,05
34	Свежая свинина	iv	0,70	0,70	0,06	0,05
38	Ванильное мороженое	ii	0,03	0,10	0,09	0,02
41	Сухое молоко	i	0,05	0,14	0,10	0,08
42	Сухое молоко в порошке	i	0,02	0,05	0,04	0,02
43	Замороженные креветки	iii	0,19	0,20	0,05	0,05
44	Замороженные креветки	iii	0,09	0,18	0,14	0,08
48	Молоко	i	0,04	0,12	0,06	0,09
49	Кукурузный крахмал	i	0,09	0,14	0,06	0,08
55	Упакованный листовой салат	iii	0,15	0,20	0,06	0,11
72	Казеинат	i	0,03	0,09	0,08	0,04
76	Вода	i	0,04	0,10	0,09	0,03
77	Молотая говядина	ii	0,07	0,09	0,05	0,03
79	Молотое мясо домашней птицы	ii	0,03	0,13	0,09	0,07
Метод спирального посева
1	Сыр из непастеризованного молока	iv	0,29	0,38	0,12	0,21
24	Сухой корм для собак	iii	0,18	0,24	0,13	0,09
59	Молотое мясо	ii	0,17	0,23	0,15	0,05

Таблица A.2 - Стандартные отклонения при определении колиформных бактерий

Код лаборатории	Наименование продукта	Категория
1	Молотая говядина в вакуумной упаковке	iv	0,32	0,35	0,11	0,07
3	Кондитерские изделия	iv	0,16	0,23	0,15	0,07
6	Свежая говядина	iv	0,33	0,35	0,05	0,09
10	Упакованный листовой салат	iii	0,41	0,78	0,33	0,58
12	Кожа куриных шеек	iv	0,15	0,20	0,12	0,06
20	Кожа куриных шеек	iv	0,07	0,12	0,09	0,05
26	Сыр из непастеризованного молока	iv	0,30	0,33	0,09	0,10
29	Протертый куриный фарш	ii	0,10	0,15	0,07	0,08
30	Кондитерские изделия	iv	0,15	0,19	0,09	0,07
32	Сырокопченая колбаса	iv	0,15	0,31	0,21	0,13
44	Сыр из непастеризованного молока	iv	0,11	0,21	0,10	0,14
45	Свежее мясо	iv	0,17	0,22	0,10	0,09
58	Замороженное кокосовое молоко	i	0,12	0,18	0,11	0,08
74	Взбитый крем	ii	0,07	0,20	0,13	0,13

Таблица А.3 - Стандартные отклонения при определении Е. coli

Код лаборатории	Наименование продукта	Категория
9	Сыр из непастеризованного молока	iv	0,45	0,47	0,10	0,06
16	Сыр из непастеризованного молока	iv	0,09	0,13	0,07	0,07
17	Куриное мясо без кожи	iv	0,27	0,35	0,10	0,20
18	Сыр из непастеризованного молока	iv	0,25	0,27	0,07	0,06
19	Куриная печень	iv	0,12	0,16	0,09	0,05
35	Сыр из непастеризованного молока	iv	0,13	0,18	0,12	0,03
37	Замороженный говяжий фарш	ii	0,13	0,17	0,10	0,05
47	Соевый крем	ii	0,13	0,44	0,15	0,39
50	Сыр из непастеризованного молока	iv	0,29	0,30	0,04	0,02
50	Сыр из непастеризованного молока	iv	0,24	0,26	0,08	0,05
51	Сыр из непастеризованного молока	iv	0,13	0,15	0,07	0,02
52	Колбасный фарш	ii	0,08	0,11	0,07	0,03
59	Молотое мясо	ii	0,15	0,19	0,08	0,09
Метод наиболее вероятного числа
78	Мидии	iii	0,15	0,31	0,15	0,11

Таблица A.4 - Стандартные отклонения при определении коагулазоположительных стафилококков

Код лаборатории	Наименование продукта	Категория
1	Сыр из непастеризованного молока	iv	0,26	0,33	0,16	0,14
16	Сыр из непастеризованного молока	iv	0,08	0,16	0,11	0,09
28	Сыр из непастеризованного молока	iv	0,15	0,24	0,17	0,08
46	Макаронные изделия	iii	0,09	0,13	0,08	0,05
50	Сыр из непастеризованного молока	iv	0,15	0,16	0,05	0,01
50	Сыр из непастеризованного молока	iv	0,12	0,14	0,05	0,04
9	Сыр из непастеризованного молока	iv	0,43	0,45	0,10	0,05
36	Сыр из непастеризованного молока	iv	0,21	0,22	0,06	0,04
71	Сыр из непастеризованного молока	iv	0,20	0,23	0,09	0,04
73	Сыр из непастеризованного молока	iv	0,32	0,48	0,28	0,03

Таблица А.5 - Стандартные отклонения при определении другой микрофлоры

Код лаборатории	Наименование продукта	Микроорганизмы	Категория
10	Порошок сушеного лука	Дрожжи+плесени	i	0,08	0,23	0,09	0,20
11	Сухие грибы	Bacillus cereus	iii	0,21	0,26	0,12	0,09
15	Куриное мясо без кожи	Pseudomonas	iv	0,20	0,34	0,14	0,24
20	Протертый фарш из индейки	Сульфитредуцирующие бактерии	ii	0,05	0,10	0,08	0,03
20	Протертый куриный фарш	Сульфитредуцирующие бактерии	ii	0,09	0,14	0,09	0,06
21	Сыр из непастеризованного молока	L. monocytogenes	iv	0,59	0,60	0,10	0,05
22	Корм для кошек в порошке	Энтеробактерии	iii	0,31	0,33	0,11	0,05
33	Тертый корень сельдерея	Lactic acid flora	iii	0,08	0,25	0,14	0,20
39	Сухое молоко	Bifidobacterium	i	0,09	0,14	0,08	0,08
40	Сушеная зелень петрушки	Bacillus cereus	iii	0,17	0,27	0,18	0,12
45	Сырое мясо	Salmonella	iv	0,21	0,24	0,09	0,07
53	Молотое мясо индейки	Сульфитредуцирующие бактерии	ii	0,07	0,25	0,12	0,21
54	Сухие фиги	Дрожжи+плесени	iv	0,74	0,75	0,07	0,01
55	Кукурузные хлопья	Плесени	iii	0,32	0,36	0,11	0,12
56	Сырое куриное мясо	Энтеробактерии	iv	0,35	0,52	0,29	0,27
57	Молотая говядина	Энтеробактерии	ii	0,01	0,04	0,03	0,02
70	Орехи фундука	Дрожжи+плесени	iii	0,28	0,29	0,03	0,07
76	Вода	Streptococcus	i	0,08	0,17	0,14	0,03
76	Вода	Enterococcus	i	0,12	0,16	0,09	0,02

A.3 Использование

В рамках настоящего стандарта результаты описанных исследований, т.е. установление 4 основных категорий продуктов, как указано в А.2.2, а также данные, приведенные в А.2.3, могут служить руководством для лабораторий при выборе матриц для исследований, проводимых с целью оценки неопределенности результатов микробиологического анализа (см. 5.2.1).