Приложение. Рецепты приготовления питательных сред

Приложение
К Методическим указаниям по
Лабораторной диагностике
Пастереллезов животных и птиц.

Рецепты приготовления питательных сред

1. Сывороточный мясо-пептонный бульон.

В качестве основы используют мясо-пептонный бульон рН 7,2-7,4, к которому, соблюдая правила асептики, добавляют 10% стерильной без консерванта сыворотки крови лошади.

2. Сывороточный мясо-пептонный агар.

В качестве основы используют 2,0-2,5%-ный мясо-пептонный агар, рН 7,2-7,4 расплавленный и охлажденный до 45-50 гр С, к которому, соблюдая правила асептики, 10% стерильной сыворотки крови лошади без консерванта. Смесь тщательно перемешивают, следя за тем, чтобы не образовывалась пена, и разливают в чашки Петри.

3. Сывороточный бульон Хоттингера.

Для приготовления бульона основой перевар Хоттингера разводят дистиллированной водой до содержания в нем 180-200 мг % аминного азота, добавляют 0,5% хлорида натрия, 0,1% двузамещенного фосфата калия (К2НРО4), устанавливают рН 7,2-7,4 и кипятят 15-20 мин.

Приготовленный таким образом бульон фильтруют через ватно-марлевый или бумажный фильтр, разливают во флаконы и стерилизуют при 120°С в течение 20-30 мин. Перед употреблением к бульону Хоттингера добавляют 10% неинактивированной стерильной сыворотки крови лошади.

4. Сывороточный агар Хоттингера.

К бульону Хоттингера добавляют 2,0-2,5% мелконарезанного агар-агара, после его набухания ставят на огонь и кипятят до полного растворения агара, постоянно помешивая во избежания пригорания.

По окончании кипячения следует восстановить объем среды добавлением горячей дистиллированной воды. После установления нужного рН агар кипятят дают отстоятся в теплом месте, чего фильтруют в горячем состоянии через ватно-марлевый фильтр. Осадок на фильтр не выливают. Разливают во флаконы и стерилизуют 30 мин при 1 атм.

Перед употреблением к расплавленному и охлажденному до 40-45 гр.С агару добавляют 10% стерильной сыворотки крови лошади и разливают в чашки Петри.

5. Кровяные сывороточные МПА и агар Хоттингера.

Разливают определенное количество МПА и агара Хоттингера, охлаждают до 45 гр.С и прибавляют 5% стерильной сыворотки крови лошади. После тщательного перемешивания добавляют 5-7% дефибринированной стерильно взятой крови барана. Готовую среду разливают в чашки Петри и дают ей застыть. Слой питательной среды должен быть равномерно окрашен в красный цвет.

6. Среда с мочевиной.

В 100 куб. см дистиллированной воды растворяют: 1 г пептона, 5 гр хлорида натрия, 1 гр глюкозы, 2 гр однозамещенного фосфорнокислого калия (КНРО), 20 гр мочевины, добавляют 6 см3 0,2%-ного водного раствора фенолового красного и устанавливают рН 6,8-6,9. Стерилизуют текучим паром 3 дня подряд по 20 мин.

К 900 куб. см дистиллированной воды добавляют 15 гр агар-агара и стерилизуют при 120 гр.С 30 мин. Охлаждают до 40-45°С и смешивают со 100 см3 раствора упомянутого выше. Разливают в стерильные пробирки и скашивают. Цвет готовой среды желтовато-зеленый.

7. Среда для определения редукции нитратов.

В 1000 мл свежеприготовленного МПБ растворяют 2 гр нитрата калия (К N О3), разливают в пробирки по 5 мл и стерилизуют при 1 атм. (120 гр.С) 15 мин. Готовая среда имеет желтоватый цвет.