Приложение N 2. Методические указания по определению химических веществ в почве газожидкостной и тонкослойной хроматографией

Приложение N 2

Методические указания
по определению остаточных количеств диазинона (базудина) в почве газожидкостной хроматографией

Настоящие методические указания распространяются на определение содержания остаточных количеств диазинона в почве при санитарном контроле.

1. Краткая характеристика препарата

Диазинон (базудин).

0,0-диэтил-0-(2-изопропил-4-метилпиримидил-6-)-тиофосфат.

В чистом виде - бесцветное масло с температурой кипения 89°С при 0,2 мм рт. ст. Хорошо растворим в большинстве органических растворителей. Молекулярная масса - 303,97. Применяется как почвенный инсектицид.

для теплокровных - 76-320 мг/кг.

2. Методика определения диазинона в почве

2.1. Основные положения.

2.1.1. Принцип метода. Метод основан на извлечении диазинона из почвы смесью изопропиловый спирт:бензол (1:1), очистке экстракта на колонке с окисью алюминия (нейтральной) и последующем определении газожидкостной хроматографии с термоионным детектором.

2.1.2. Метрологическая характеристика метода.

Нижний предел определения 0,02 мг/кг. Обнаружение 70-95%.

2.1.3. Избирательность метода.

Метафос, метилнитрофос, карбофос, сайфос, трихлорметафос-3, тролен, хлорофос, гардона, фталофос и фозалон определению не мешают.

2.2. Реактивы и растворы.

Растворители: бензол, гексан, изопропиловый спирт, х.ч., свежеперегнанные.

NaCl, х.ч.

, х.ч., безводный и 1%-ный водный раствор.

, нейтральная, II степени активности по Брокману.

Хроматон-N-AW-DMCS (0,16-0,2 мм) с 5% SE-30.

2.3. Приборы и посуда.

Хроматограф Цвет-106 или аналогичный прибор с ТИД.

Стеклянная колонка для хроматографа длиной 1 м, внутренним диаметром 3,5 мм, заполненная хроматоном с 5% SE-30 или аналогичным носителем.

Хроматографическая колонка с краном, длиной 10 см, внутренним диаметром 7 мм.

Механический встряхиватель.

Ротационный вакуумный испаритель.

Водоструйный насос.

Делительные воронки емкостью 500 мл.

Мерные колбы емкостью 100 мл.

Колбы конические со шлифами на 100 мл.

Колбы круглодонные со шлифами на 50 мл.

Пипетки емкостью 2, 5 и 10 мл.

Микрошприцы на 10 мл.

2.4. Проведение определения. Экстракция.

Навеску почвы 10 г тщательно растирают в фарфоровой ступке, помещают в плоскодонную колбу и заливают 50 мл смеси бензола с изопропиловым спиртом (1:1). Проводят экстракцию на механическом встряхивателе в течение 30 мин. Экстракт переносят в делительную воронку через бумажный фильтр, а почву заливают таким же количеством растворителя и повторяют экстракцию. К объединенному экстракту в делительную воронку приливают 200 мл 1%-ного водного раствора и осторожно переворачивают воронку, предварительно закрыв ее пробкой.

Дают слоям разделиться, нижний слой отбрасывают. Верхний органический слой сушат над безводным сульфатом натрия, фильтруют в круглодонную колбу и растворитель удаляют досуха с помощью ротационного вакуумного испарителя. Сухой остаток растворяют в 2-3 мл гексана и экстракт очищают на колонке с окисью алюминия.

Предварительно в колонку помещают ватный тампон и при открытом кране переносят в колонку смесь 3 г окиси алюминия в 6 мл гексана. Избыток растворителя сливают. Когда уровень растворителя достигнет 1 мм над слоем сорбента, закрывают кран колонки. Количественно переносят в колонку подготовленный для очистки экстракт, подсоединяют вакуум и открывают кран колонки. Дают возможность экстракту полностью впитаться в сорбент. Элюируют диазинон с колонки 20 мл бензола при слабом разряжении со скоростью 1 кап./сек. Элюат сушат над безводным . Затем фильтруют в грушевидную колбу и отгоняют растворитель досуха.

К сухому остатку пипеткой приливают 2 мл гексана. В хроматограф вводят 2-3 мкл полученного раствора.

2.5. Условия.

2.5.1. Хроматографирование.

Хроматограф Цвет-106 с ТИД.

Скорость протяжки ленты самописца 1 см/мин.

Стеклянная колонка длиной 1 м и внутренним диаметром 3,5 мм, заполненная хроматоном N-AW-DMCS (0,16-0,2 мм) с 5% SE-30.

Температура:

колонки - 190°С,

испарителя - 210°С.

Скорости:

азота - 85 мл/мин,

водорода - 15-17 мл/мин,

воздуха - 150-180 мл/мин.

Время удерживания диазинона в этих условиях 2 мин.

В хроматограф вводят 2-3 мкл рабочего раствора. Линейность детектирования сохраняется в пределах 0,2-2,0 нг.

Количественное определение проводят методом соотношения со стандартами, по высоте пиков.

Содержание диазинона в анализируемой пробе вычисляют по формуле:

мг/кг, где

- высота пика анализируемой пробы, в мм;

- высота пика стандарта, в мм;

- содержание диазинона в стандарте, в нг;

У - объем конечного раствора, из которого отбирают аликвоту для хроматографирования, в мл (2 мл);

- объем аликвоты, которую вводят в хроматограф в мкл (2-3 мкл);

А - навеска анализируемого образца почвы, в г (10 г).

Если при введении в хроматограф получаются слишком большие пики или происходит "зашкаливание", готовят менее концентрированные растворы, добавляя в конечный объем замеренное количество дополнительного гексана.

Методические указания по определению метафоса в почве тонкослойной хроматографией

Настоящие методические указания распространяются на определение содержания остаточных количеств метафоса в почве при санитарном контроле.

1. Краткая характеристика препарата

Метафос (вофатокс, вофатокс-ОМ, дальф, диметилпаратион, метацид, метилпаратион, метил-фолидол, нитрокс, нитрокс-80, фолидол-М).

0,0-диметил-0-(4-нитрофенил)-тиофосфат.

В чистом виде - белое кристаллическое вещество с температурой плавления 35-36°С. Растворимость в воде при 25°С около 55 мг/л. Плохо растворяется в парафиновых углеводородах, хорошо - в ароматических углеводородах и большинстве органических растворителей. Препарат гидролизуется водой, кислотами и щелочами, разрушается солнечным светом.

Молекулярная масса 263,22.

2. Методика определения метафоса в почве

2.1. Основные положения.

2.1.1. Принцип метода. Метод основам на извлечении метафоса из почвы органическим растворителем, отгонке растворителя, последующем хроматографировании в тонком слое силикателя: КСК или силикагеля КСК с цинковой пылью при использовании в качестве подвижной фазы смеси гексана с ацетоном (4:1). Зоны локализации препарата определяют после обработки пластинок раствором щелочи или раствором диметиламинобензальдегида (на пластинке силикагель + цинк).

2.1.2. Метрологическая характеристика метода.

Чувствительность метода при обработке первым реактивом 5 мкг в анализируемой пробе; вторым - 1-3 мкг.

Величина Rf метафоса равна 0,380,02.

Полнота определения - 85%.

2.2. Реактивы и растворы.

Ацетон, х.ч. или ч.д.а.

Н-Гексан, х.ч.

0,25%-ный раствор - диметиламинобензальдегида в этаноле.

Хранят в темной склянке. Раствор перед обработкой пластинок смешивают в соотношении 10:1 с ледяной уксусной кислотой.

Кальций сернокислый, высушенный при 160°С в течение 6 ч и просеянный через сито (100 меш). Хранят без доступа влаги.

4н. водный раствор натра едкого.

Натрий сернокислый безводный.

Силикагель КСК. Продажный силикагель измельчают и просеивают через сито 100 меш. Хранят без доступа влаги.

Стандартный раствор метафоса в н-гексане (100 мкг/мл)

Уксусная кислота ледяная.

Цинковая пыль.

Хлороформ, х.ч. или ч.д.а.

Спирт этиловый ректификат.

Эфир диэтиловый перегнанный.

2.3. Приборы и посуда.

Аппарат для встряхивания.

Делительные воронки, емкостью 250 мл.

Капиллярные пипетки.

Колбы конические вместимостью 200 мл.

Колбы мерные.

Микропипетки.

Прибор для отгонки растворителей с набором колб.

Цилиндры мерные.

Пульверизатор.

Хроматографическая камера.

2.4. Подготовка к определению.

2.4.1. Приготовление хроматографических пластинок.

14 г силикагеля тщательно смешивают с 1,5 г сернокислого кальция. Смесь суспендируют в 40 мл дистиллированной воды и равномерно наносят на 7-8 пластинок 9 x 12 см (примерно 6 мл суспензии на пластинку). Для приготовления пластинок с цинковой пылью к указанному количеству силикагеля и сернокислого кальция прибавляют 1 г просеянной цинковой пыли.

Пластинки сушат на воздухе при комнатной температуре 17-18 часов, хранят в эксикаторе над слоем осушителя.

2.5. Проведение определения.

2.5.1. Определение методом тонкослойной хроматографии.

Экстракция. 30 г воздушно-сухой измельченной в ступке почвы заливают хлороформом и оставляют при комнатной температуре на 4-6 час. Экстракт фильтруют через слой безводного сульфата натрия в колбу для отгонки растворителей. Почву вновь заливают хлороформом и экстрагируют на аппарате для встряхивания 15 мин. Экстракты объединяют и отгоняют растворитель на водяной бане до небольшого объема.

2.5.2. Хроматографирование. Содержимое колбы после отгонки растворителя при анализах капиллярной пипеткой наносят на пластинку. Стенки колбы еще 3-4 раза споласкивают небольшими порциями диэтилового эфира (по 0,2 мл); каждый раз наносят раствор в центр первого пятна.

Пластинку с пробами и стандартными растворами помещают в камеру для хроматографирования со смесью гексана с ацетоном (4:1). После подъема фронта растворителя на высоту 10 см хроматографирование прекращают, пластинку помещают в вытяжной шкаф на 5-10 мин для удаления паров растворителей. Затем пластинку опрыскивают 4 н раствором едкого натра и выдерживают в сушильном шкафу 20 мин при температуре 120-130°С.

Метафос на пластинке проявляется в виде желтых пятен. При использовании пластинок с цинком слой обрабатывают до влажного состояния смесью диметиламинобензальдегида с ледяной уксусной кислотой и выдерживают в сушильном шкафу 5-7 мин при температуре 100-120°С. В этом случае зоны локализации метафоса окрашиваются в ярко-желтый цвет.

2.6. Обработка результатов анализа. Количественное определение метафоса проводят путем сравнения интенсивности окраски и размеров пятен препарата пробы и стандартов раствора.

Расчет. Содержание метафоса в пробе вычисляют по формуле:

, где:

Х - содержание метафоса в пробе, мг/кг;

А - количество метафоса, найденное путем сравнения со стандартами, мкг;

Р - масса или объем анализируемой пробы, г.

Методические указания по определению рогора в почве методами газожидкостной и тонкослойной хроматографии

Настоящие методические указания распространяются на определение содержания рогора в почве при санитарном контроле.

1. Краткая характеристика препарата

Фосфамид, БИ-58, дитрам, диметоат.

0,0-диметил-S-(N-метилкарбамоилметил)-дитиофосфат.

В чистом виде - белое низкоплавное кристаллическое вещество, умеренно растворимое в воде (2,5%), с камфарным запахом. Давление паров - мм рт. ст. при 25°. Легко гидролизуется водными щелочами, относительно устойчив в слабокислой среде, хорошо растворим во многих органических растворителях.

Молекулярная масса 229,2.

Выпускается в формах 40%-ного к.э., гранулированного препарата (1,6% рогора на суперфосфате).

Применяется как системный акарицид и инсектицид.

Высокотоксичное вещество. для различных лабораторных животных - 100-230 мг/кг. ДОК для цитрусовых и во фруктах - 1,5 мг/кг.

2. Методика определения рогора в почве методами газожидкостной хроматографии и хроматографии в тонком слое

2.1. Основные положения.

2.1.1. Принцип метода. Метод основан на извлечении препарата из исследуемой пробы почвы хлороформом или водой (в зависимости от вида почвы) и последующем определении методами ТСХ и ГХ.

2.2. Метрологическая характеристика метода.

Предел определения для ТСХ - 0,1 мг/кг, для ГХ - 0,05 мг/кг.

Процент определения - 75-80%.

2.2.1. Реактивы и растворы.

Хлороформ мед.

Ацетон, х.ч.

Н-Гексан, х.ч.

Силикагель марки КСК, предварительно очищенный от примесей.

Для этого силикагель промывают разбавленной 1:1 соляной кислотой, кислоту сливают, силикагель промывают водой, кипятят в течение 2-3 часов с разбавленной 1:1 азотной кислотой на песочной бане в круглодонной колбе с обратным холодильником. Обработанный таким образом силикагель промывают дистиллированной водой до нейтральной реакции промывных вод, сушат в сушильном шкафу при температуре 130°С в течение 4-6 часов, периодически помешивая. Силикагель дробят и просеивают через сито 100 меш. (0,147 мм). Хранят в склянке с притертой пробкой.

Натрий сульфат, х.ч., прокаленный.

Крахмал растворимый, ч.д.а.

Бромфеноловый синий (индикатор (ТУ МГ УХЛ 271-59)).

Азотнокислое серебро, х.ч.

Уксусная кислота 10%-ная.

Проявляющий реактив: 0,05 г бромфенолового синего растворяют в 10 мл ацетона и доводят до 100 мл 0,5% - 1%-ным раствором азотнокислого серебра в водном ацетоне (3 ч. ацетона, 1 ч. воды).

Носитель для колонки - хромотон - 80-100 меш., с нанесенной жидкой фазой SE-30 в количестве 5%.

Стандартный раствор рогора в эфире и ацетоне с содержанием препарата 1, 5 и 10 мкг в 1 мл.

2.2.2. Приборы и посуда.

Пластинки для хроматографирования (стеклянные пластинки размером 9x12 см тщательно промывают содой, хромовой смесью, дистиллированной водой и сушат в вертикальном положении. Перед нанесением сорбционной массы их протирают спиртом).

Станок для сушки пластинок.

Колбы конические емкостью 250-300 мл.

Делительные воронки на 250 мл.

Прибор для отгонки растворителя.

Насос водоструйный.

Баня водяная.

Камера для хроматографирования.

Пульверизатор стеклянный.

Прибор для встряхивания.

Эксикатор.

Пипетки для нанесения проб.

Шприц медицинский или микропипетки для нанесения стандартного раствора.

Хроматограф с термоионным детектором.

Баллон с азотом, содержащий не более 0,03%.

Баллон с водородом.

Баллон с воздухом.

Колонка стеклянная диаметром 3 мм, длиной 1-1,5 м.

2.3. Подготовка к определению.

2.3.1. Приготовление хроматографических пластинок.

Для приготовления сорбционной массы берут 40 г силикагеля КСК, 1 г растворимого крахмала и 125 мл дистиллированной воды. Крахмал заваривают в воде и в эту массу при постоянном размешивании добавляют силикагель. Хорошо размешанную сорбционную массу наносят чайной ложкой (две ложки на пластинку), равномерно распределяя по ее поверхности. Пластинки сушат в течение 10-12 часов при комнатной температуре, хранят в эксикаторах.

2.4. Проведение определения.

2.4.1. Определение методом тонкослойной хроматографии.

Экстракция. Для анализа берут 50 г воздушно-сухой почвы, растертой в ступке. Препарат из почвы экстрагируют хлороформом трижды по 50 мл, каждый раз встряхивая колбу по 10 минут на аппарате для встряхивания и давая пробе немного отстояться. Экстракт сливают через безводный сульфат натрия в колбочку для отгонки растворителя. В случае анализа почв черноземных районов (почвы с высоким содержанием гумуса) препарат экстрагируют дистиллированной водой трижды по 50-70 мл, каждый раз встряхивая колбу по 10 мин на аппарате для встряхивания и давая пробе отстояться. Водные экстракты осторожно сливают в делительную воронку и добавляют 30-50 мл хлороформа. Экстракцию препарата из воды хлороформом повторяют трижды по 30-50 мл, встряхивая в делительной воронке по 5-7 мин. Хлороформные экстракты сливают через сульфат натрия в колбу для отгонки растворителя. Отгонку ведут под вакуумом 10-15 мм рт. ст. при температуре бани не более +40°С. Растворитель отгоняют до небольшого объема (0,1-0,2 мл).

2.4.2. Хроматографирование. Подготовленные экстракты количественно наносят при помощи капиллярной пипетки на хроматографическую пластинку так, чтобы диаметр пятна не превышал 1 см. Центр пятна должен быть на расстоянии 1,5 см от нижнего края пластинки. Колбочку с экстрактом 2-3 раза смывают небольшими порциями эфира, который также наносят в центр первого пятна. Справа и слева от пробы на расстоянии 2 см от нее наносят стандартные растворы (шприцом или микропипеткой), содержащие 5, 10 и 20 мкг препарата.

Пластинку с нанесенными растворами помещают в хроматографическую камеру, в которую предварительно залита смесь растворителей гексан - ацетон в соотношении 1,5:1. Край пластинки не должен быть погружен в раствор более чем на 0,5 см. После того, как фронт подвижного растворителя поднимется на 10 см, пластинку вынимают и оставляют на несколько минут на воздухе для испарения подвижного растворителя. Пластинку обрабатывают проявляющим реактивом. После высушивания пластинки на воздухе, ее обрабатывают 5-10%-ной уксусной кислотой. Зоны локализации препарата обнаруживаются в виде синих пятен на желтом фоне. Величина Rf рогора 0,6-0,65, Р = 0 аналога - 0,20-0,25.

2.5. Обработка результатов анализа. Количественное определение производят путем сравнения площади пятна пробы и того стандарта, площадь которого наиболее близка по величине к площади пятна пробы. Площадь пятен измеряют планиметром или с помощью промасленной миллиметровой бумаги.

Расчет. Содержание рогора в анализируемой пробе в мг/кг рассчитывают по формуле:

, где

Х - содержание пестицида в анализируемой пробе, мг/кг;

А - содержание препарата в стандартном растворе;

- площадь пятна стандартного раствора, в ;

- площадь пятна пробы, в ;

В - масса анализируемой пробы, в г.

2.6. Определение методом газожидкостной хроматографии.

Экстракт хлороформа упаривается до объема 0,2-0,3 мл, на роторном испарителе, а затем досуха на воздухе. Перед хроматографированием остаток растворяется в 1-2 мл ацетона и аликвотная часть (3-5 мкл) хроматографируется.

2.6.1. Условия хроматографирования. Хроматограф с термоионным детектором (вет-106#, Цвет-5), Шкала А.

Скорость протяжки бумаги - 360 мм/час.

Колонка стеклянная, длиной 1 м, диаметр 3 мм.

Носитель - хромотон с 5% SE-30.

Температура колонки 180°С;

испарителя 210°С.

Скорость азота - 20-22 мл/мин.

водорода - 14-17 мл/мин.

воздуха - 400 мл/мин.

Вводимый объем - 3,5 мкл.

Линейный диапазон детектирования - 1-10 нг.

При указанных выше условиях время элюирования рогора - 1,8 мин, Р = 0 аналога - 1,1 мин.

Содержание рогора в анализируемой пробе рассчитывают по общепринятым формулам.

Методические указания по определению остаточных количеств фозалона в почве методами газожидкостной и тонкослойной хроматографии

Настоящие методические указания распространяются на определение содержания остаточных количеств фозалона в почве при санитарном контроле.

1. Краткая характеристика препарата

Фозалон, бензофосфат, золон, РР 11074.

0,0-диэтил-s-(6-хлорбензоксазолинил-3-метил)-дитиофосфат.

В чистом виде - кристаллическое вещество с температурой плавления 47-48°С. Нелетучий. Упругость паров при 20°С около нуля. Растворимость в воде 10 мг/л при 20°С. Хорошо растворим в ацетоне, хлороформе, спиртах. Устойчив в кислой среде, в щелочной - быстро гидролизуется. Молекулярная масса 367,82. Применяется как акарицид контактного действия и инсектицид. для теплокровных - 135-390 мг/кг (сравнительно малотоксичный для теплокровных).

2. Методика определения фозалона в почве

2.1. Основные положения.

2.1.1. Принцип метода. Метод основан на извлечении фозалона из почвы смесью ацетон - вода (1:1), очистке экстракта перераспределением из ацетоноводной среды в хлороформ и последующем определении ТСХ.

2.2. Метрологическая характеристика метода.

Нижний предел определения - 0,01 мг/кг (1 мкг в пробе).

Обнаружение - 90,010,6%.

2.3. Избирательность метода.

Метод селективен. Фосфамид, фенкаптон, цидиал, хлорофос, карбофос, фталофос, бромофос и др. фосфорорганические пестициды определению не мешают.

2.3.1. Реактивы и растворы.

Растворители: ацетон, гексан, диэтиловый эфир, хлороформ, четыреххлористый углерод, х.ч., свежеперегнанные.

Гипс.

Натрий азотистокислый безводный, х.ч.

Натрий едкий, х.ч.

Натрий сульфат безводный, х.ч., прокаленный.

Соляная кислота, х.ч., 20%-ный раствор.

Окись алюминия безводная, х.ч.

Сульфаниловая кислота.

Проявляющий реактив N 1 - диазотированная сульфаниловая кислота. Сульфаниловую кислоту (0,5 г) растворяют при нагревании в 90 мл дистиллированной воды и доливают 10 мл 20%-ного раствора соляной кислоты. Сульфаниловую кислоту смешивают со свежеперегнанным 0,5%-ным раствором азотистокислого натрия и 25%-ным раствором едкого натрия в равных количествах.

Проявляющий реактив N 2 - бромфеноловый синий. Смесь 10 мл 0,4%-ного раствора бромфенолового синего и 90 мл 1%-ного раствора азотнокислого серебра в 75%-ном водном ацетоне. 5%-ный раствор уксусной кислоты.

Проявляющий реактив N 3 - 0,5%-ный раствор 2,6-дибром-хлор-р-хинонимина в гексане.

2.3.2. Приборы и посуда.

Баня водяная.

Делительные воронки на 250 мл.

Камера для хроматографирования.

Микропипетки для нанесения стандартного раствора и проб.

Конические колбы на 250 мл.

Прибор для встряхивания. Станок для сушки пластинок.

Эксикатор.

Пластинки "Силуфол".

Насос водоструйный.

Хроматографические пластинки стеклянные размером 9х12 см, тщательно промытые содой, хромовой смесью, а затем дистиллированной водой. Пластинки сушат в вертикальном положении. Перед нанесением сорбента пластинки протирают спиртом.

2.4. Подготовка к определению.

2.4.1. Приготовление хроматографических пластинок.

Пластинки с закрепленным слоем окиси алюминия.

Для приготовления сорбционной массы 50 г окиси алюминия и 5 г гипса помещают в коническую колбу емкостью 250 мл, добавляют 75 мл дистиллированной воды, раствор тщательно перемешивают и равномерно наносят на пластинки. Данного количества достаточно для 6-8 пластинок при толщине слоя 0,3-0,5 мм. Пластинки сушат в течение 10-12 часов при комнатной температуре, хранят в эксикаторе над силикагелем.

Пластинки с закрепленным слоем двуокиси кремния.

Для приготовления сорбционной массы 12 г двуокиси кремния для люминофоров (фракция 0,08-0,09 мм) хорошо перемешивают с 1 г гипса, добавляют постепенно 50 мл дистиллированной воды, смесь тщательно перемешивают и сразу же наносят на 3 хроматографические пластинки. Пластинки сушат при комнатной температуре в течение 10-12 часов и хранят в эксикаторе.

2.5. Проведение определения.

2.5.1. Определение методом ТСХ. Экстракция.

Для анализа берут 50-100 г воздушно-сухой почвы, размельченной в фарфоровой ступке и пропущенной через сито (диаметр отверстий 0,5 мм). Фозалон из почвы экстрагируют 150 мл смеси ацетона с водой (1:1) при помощи механического встряхивания в течение часа. Экстракт сливают через двойной складчатый фильтр в делительную воронку. Фозалон из ацетоноводной среды экстрагируют хлороформом трижды, порциями по 50 мл. Объединенные хлороформные экстракты сушат над безводным сульфатом натрия, фильтруют и с помощью ротационного вакуумного испарителя отгоняют растворитель до объема 0,1-0,2 мл.

2.5.2. Хроматографирование. Остаток количественно наносят на хроматографическую пластинку с закрепленным слоем алюминия или двуокиси кремния для люминофоров.

Диаметр пятна не должен превышать 0,5-1,0 см.

На пластинку наносят 3 пятна (2 пробы и 1 стандарт или 1 проба и 2 стандарта) на расстоянии 15-20 мм друг от друга и от краев пластинки.

Пластинки с нанесенным раствором помещают в хроматографическую камеру; подвижный растворитель для пластинок с окисью алюминия - смесь гексана с ацетоном (1:1). После развития хроматограммы пластинку сушат в течение 5-10 мин на воздухе, а затем обрабатывают проявляющим реактивом N 1. Через 1-2 мин фозалон проявляется в виде красных пятен на белом фоне.

Rf - 0,6-0,65.

Подвижный растворитель для пластинок "Силуфол" или с двуокисью кремния для люминофоров - смесь хлороформа с четыреххлористым углеродом (6:7). После развития хроматограммы и высушивания пластинку обрабатывают проявляющим реактивом N 2 с последующим снятием фона 0,5%-ным раствором уксусной кислоты. Фозалон проявляется в виде голубых пятен на лимонно-желтом фоне с Rf 0,64-0,68.

Минимально детектируемое количество 1 мкг в анализируемой пробе.

Хроматограмму можно также обрабатывать проявляющим реактивом N 3.

В этом случае фозалон проявляется после нагревания пластинки в течение 5-7 мин при 105-110°С в виде устойчивых оранжевых пятен на белом фоне.

Минимально детектируемое количество 0,5 мкг в анализируемой пробе.

2.6. Обработка результатов анализа. Количественное определение проводят путем сравнения площади и интенсивности окраски пятен рабочей пробы и пятен серии стандартов. Содержание фозалона в исследуемой пробе вычисляют по формуле:

мк/кг, где

- содержание пестицида, найденное путем сравнения со стандартами в анализируемой пробе, в мкг;

А - навеска исследуемой пробы почвы, в г.

3. Газохроматографический метод. Определение ГЖХ с ТИД

3.1. Основные положения.

3.1.1. Принцип метода. Метод основан на извлечении фозалона из почвы смесью изопропилового спирта с бензолом (1:1), очистке экстракта сублимацией в вакууме и последующем определении газожидкостной хроматографией с ТИД.

3.2. Метрологическая характеристика метода.

Нижний предел определения 0,05 мг/кг. Обнаружение 71-105%.

3.2.1. Избирательность метода.

Прочие фосфорорганические пестициды, в том числе фосфамид, метафос, метилнитрофос, трихлорметафос-3, сайфос, диазинон, гардона, фталофос и др. определению не мешают.

3.2.2. Реактивы и растворы.

Растворители: бензол, ацетон, изопропиловый спирт, гексан, х.ч., свежеперегнанные.

, х.ч.

, х.ч., безводный и 1%-ный водный раствор.

Хромотон-N-AW-DWCS (0,16-0,20 мм) с 5% SE-30 или аналогичный носитель.

Хромосорб-W - промытый кислотой и силанизированный ДМХС (100-120 меш) с 5% SE-30 или аналогичный носитель.

3.2.3. Приборы и посуда.

Хроматограф Цвет-106 или аналогичный прибор, снабженный ТИД.

Стеклянная колонка длиной 1 м и внутренним диаметром 3,5 мм.

Высоковакуумный насос.

Прибор для измерения разряжения типа Мак-Леод.

Механический встряхиватель.

Ротационный вакуумный испаритель.

Прибор для сублимации в вакууме.

Делительные воронки на 500 мл.

Мерные колбы на 100 мл.

Колбы плоскодонные на 500 мл.

Колбы круглодонные на 50 мл со шлифом.

Пробирки с притертыми пробками на 10 мл.

Пипетки на 2, 5 и 10 мл.

Микрошприц на 10 мкл.

3.3. Подготовка к определению.

Навеску почвы 20 г тщательно растирают в фарфоровой ступке, помещают в плоскодонную колбу, добавляют 10 мл воды и после увлажнения пробы заливают почву 50 мл смеси бензола с изопропиловым спиртом (1:1). Проводят экстракцию на механическом встряхивателе в течение 30 мин. Экстракт переносят в делительную воронку через бумажный фильтр, а почву заливают таким же количеством растворителя и повторяют экстракцию. К объединенному экстракту в делительную воронку приливают 200 мл 1%-ного раствора и осторожно, не взбалтывая, переворачивают воронку несколько раз, предварительно закрыв ее пробкой. Дают слоям разделиться, нижний и водный слой отбрасывают. Верхний органический слой сушат над безводным , фильтруют в круглодонную колбу и растворитель удаляют досуха на ротационном испарителе.

Сухой остаток количественно переносят гексаном в патрон сублиматора. Отгоняют растворитель на водяной бане досуха и проводят сублимацию фозалона из сухого остатка в течение 40 мин при температуре бани 95-97°С и разряжении 0,3-0,2 мм рт. ст. По окончании сублимации смывают фозалон с пальца сублиматора 10 мл ацетона в пробирку, отгоняют ацетон на горячей водяной бане, следы растворителя отдувают слабым током воздуха.

К сухому остатку пипеткой добавляют 2 мл гексана. Дальнейшее определение проводят ГЖХ или ТСХ на "Силуфоле".

В хроматограф вводят 2 мкл полученного раствора.

3.3.1. Условия хроматографирования.

Хроматограф Цвет-106 с ТИД.

Скорость протяжки ленты самописца 1 см/мин.

Рабочая шкала электрометра А.

Стеклянная колонка длиной 1 м и внутренним диаметром 3,5 мм заполнена хромотоном-N-AW-DMCS (0,16-0,20 мм) с 5% SE-30.

Температура колонки и испарителя 240°С.

Скорость азота 85 мл/мин, водорода - 15-17 мл/мин, воздуха - 160 мл/мин.

Время удерживания фозалона в этих условиях 3 мин 50 сек. В хроматограф вводят 2 мкл рабочего раствора.

Линейность детектирования сохраняется в пределах 1-20 нг. Прочие фосфорорганические пестициды определению не мешают.

Количественное определение проводят методом соотношения со стандартами по высоте пиков.

Содержание фозалона в анализируемой пробе вычисляют по формуле:

мг/кг, где

- высота пика анализируемой пробы в мм,

- высота пика стандарта в мм,

- содержание фозалона в стандарте в нг,

У - объем конечного раствора, из которого отбирают аликвоту для хроматографирования в мл (2 мл);

- объем аликвоты, вводимой в хроматограф в мкл (2 мкл),

А - навеска анализируемого образца почвы в г (20 г).

Если при введении в хроматограф получаются слишком большие пики или происходит "зашкаливание", готовят менее концентрированный раствор, добавляя в конечный объем замеренное количество дополнительного гексана.

3.3.2. Альтернативная колонка:

Колонка стеклянная длиной 1 м, внутренним диаметром 3,5 мм заполнена хромосорбом-W, промытым кислотой и силанизированным ДМХС (100-120 меш) с 5% Е-31.

Температура колонки и испарителя 240°С.

Скорость азота 85 мл/мин,

водорода 15-17 мл/мин,

воздуха 160 мл/мин.

Время удерживания фозалона в этих условиях 5 мин 45 сек.

3.3.3. Газохроматографический метод. Определение ГЖХ с ДЭЗ.

3.4. Основные положения.

3.4.1. Принцип метода. Метод основан на извлечении фозалона из почвы смесью гексана с ацетоном, очистке экстракта на колонке с окисью алюминия с последующим газохроматографическим определением с ДЭЗ.

3.4.2. Метрологическая характеристика метода.

Нижний предел определения 0,04-0,1 мг/кг. Обнаружение - 76-101%.

3.4.3. Избирательность метода.

Хлорорганические пестициды, в том числе ДДТ и его метаболиты, изомеры ГХЦГ, гептахлор и др., а также фосфорорганические пестициды определению не мешают.

3.4.4. Реактивы и растворы.

Растворители: гексан, ацетон, бензол, х.ч., свежеперегнанные, , х.ч., безводный и 1%-ный водный раствор.

нейтральная, II степени активности по Брокману.

Хромосорб-W, промытый кислотой, силанизированный ДМХС (100-120 меш) с 5% SE-30 или аналогичный носитель.

Стандартные растворы фозалона в гексане с содержанием 0,2; 0,4; 0,5; 0,8; 1,0; 2,0; 5,0; 7,0 мкг/мл.

3.4.5. Приборы и посуда.

Газожидкостные хроматографы Цвет-106, Газохром 1106э, Газохром 1109 мрд или аналогичные приборы с ДЭЗ.

Хроматографическая колонка стеклянная длиной 1 м, внутренним диаметром 3,5 мм.

Хроматографическая колонка стеклянная длиной 150 см, внутренним диаметром 15 мм с краном.

Аппарат для встряхивания.

Делительные воронки на 500 мл.

Сито с размером отверстий 0,5 мм.

3.5. Подготовка к определению.

Навеску воздушно-сухой почвы (10 г), просеянной через сито 0,5 мм, помещают в коническую колбу емкостью 250 мл, добавляют 10 мл дистиллированной воды и оставляют на 30 мин. Затем в эту колбу добавляют 20 мл ацетона и 40 мл гексана и фозалон экстрагируют, встряхивая на аппарате в течение часа. Экстракцию повторяют с тем же количеством растворителей. Жидкую часть переносят в делительную воронку емкостью 500 мл, в эту же воронку приливают 120 мл 1%-ного раствора и встряхивают в течение 5-10 мин. Гексановый слой отделяют, а водно-ацетоновый слой экстрагируют дважды гексаном, порциями по 20 мл. Объединенные гексановые экстракты сушат, фильтруя через слой безводного сульфата натрия, а затем пропускают через колонку с окисью алюминия.

Экстракцию фозалона из почв следует проводить не позднее, чем через сутки после отбора пробы почвы.

Для очистки экстракта в нижнюю часть хроматографической колонки помещают тампон из обезжиренной ваты и 3 г окиси алюминия в 6 мл гексана. После того как растворитель элюирован, через колонку пропускают гексановый экстракт почвы со скоростью 55-65 капель/мин, используя зажим или двухходовой кран на отводе приемника. Остатки гексанового экстракта "отжимают" с помощью груши или поддавливают азотом. После этого элюируют фозалон 80 мл бензола со скоростью 105-115 кап./мин, остатки бензольного экстракта отжимают с помощью груши. Колонку промывают 40 мл гексана и этот элюат отбрасывают, после чего колонка готова для следующего определения.

При предлагаемом способе промывки хроматографической колонки одно и то же наполнение колонки можно использовать для 10-15 определений.*

Из гексанового или бензольного элюата удаляют с помощью ротационного вакуумного испарителя растворитель. К сухому остатку пипеткой добавляют 2 мл гексана и вводят в хроматограф 2-3 мкл полученного раствора.

При соответствующих условиях хроматографирования в гексановом элюате определяют хлорорганические пестициды, в бензольном - фозалон.

3.5.1. Условия хроматографирования.

Условия			Цвет 106	Галохром 1109	Галохром 1106
Расход газа-носителя через колонку
мл/мин			70	80	80
Расход газа-носителя для поддува детектора
мл/мин			120	140	105
Температура °С
детектора			250	250	250
испарителя			220	275	275
колонки			230	240	240
Охлаждение ввода в испаритель
кап./сек.			-	1	1
Скорость протяжки ленты самописца
мм/мин			10	10	10
Колонка стеклянная	мхмм		1х3,5	1х3,5	1х3,5
Абсолютное время удерживания		мин
фозалон			2,5	2,6	2,8
хлорорганические пестициды			0,6-1,5	0,7-1,6	0,7-1,8
Линейный диапазон детектирования
нг			0,4-10,0	1,0-25,0	0,6-15,0

3.5.2. Обработка результатов анализа.

Количество фозалона в инъектируемой пробе находят по градуировочному графику и содержание фозалона в анализируемом образце почвы в мг/кг вычисляют по формуле:

мг/кг, где

С - количество фозалона, найденное по градуировочному графику, в нг,

У - конечный объем раствора, из которого отбирают аликвоту для хроматографирования в мл,

- объем аликвоты, вводимой в хроматограф в мкл (2-3 мкл),

А - навеска анализируемого образца почвы в г (10 г).

Если при введении в хроматограф получаются слишком большие пики или происходит "зашкаливание", готовят менее концентрированные растворы путем добавления к конечному раствору замеренного пипеткой дополнительного количества гексана.

Методические указания по определению фталофоса в почве методом тонкослойной хроматографии

Настоящие методические указания распространяются на определение содержания фталофоса в почве при санитарном контроле.

1. Краткая характеристика препарата

Фталофос (имидан, пролат, ПМП, R-1504, сафадон, фосмет) 0,0-диметил-S-фталимидометилдитиофосфат.

В чистом виде - белое кристаллическое вещество с температурой плавления 72-72,7°. Плохо растворим в воде (25 мг/л), хорошо - в органических растворителях. В кислой среде устойчив к гидролизу (при pH 5 - период полураспада 15 дней, при pH 7,0 - 12 часов, при pH 8,3 - 4 часа). Разрушается окислителями. Молекулярная масса 317,32.

2. Методика определения фталофоса в почве

2.1. Основные положения.

2.1.1. Принцип метода. Метод основан на извлечении препарата из исследуемой пробы ацетоном и последующем определении методом тонкослойной хроматографии.

2.2. Метрологическая характеристика метода.

Предел определения - 1 мкг фталофоса в пробе (0,02 мг/кг).

2.3. Избирательность метода.

Хлорофос, фозалон и другие фосфорорганические пестициды определению не мешают.

2.4. Реактивы и растворы.

Силикагель ЛС 5/40 для тонкослойной хроматографии с 13% гипса (Хемапол, ЧССР).

Натрий сернокислый безводный. Просушивают в сушильном шкафу при температуре 150°С в течение 6 часов, хранят в банке с притертой пробкой.

Н-гексан.

Ацетон, ч.д.а.

Хлороформ, х.ч.

Фталофос, х.ч.

Стандартный раствор фталофоса в этиловом эфире, содержащий 100 мкг/мл.

Проявляющий реагент 0,05 г бромфенолового синего растворяют в 10 мл ацетона и доводят объем раствора до 100 мл 0,5-процентным раствором азотнокислого серебра в водном ацетоне (3 ч. ацетона, 1 ч. воды).

Проявляющий реактив хранят в посуде из темного стекла. Уксусная кислота 10% раствор.

2.5. Приборы и посуда.

Стаканы стеклянные на 100 мл.

Палочки стеклянные.

Воронки стеклянные конические.

Воронки делительные на 250 и 500 мл.

Камера для хроматографирования.

Камера для опрыскивания.

Пульверизаторы стеклянные.

Пластинки стеклянные, 9х12 см.

Прибор для отгонки растворителей.

Пипетки капиллярные для нанесения стандартов.

2.6. Подготовка к определению.

2.6.1. Приготовление хроматографических пластинок.

Для приготовления 10 пластинок берут 15 г силикагеля указанной марки и тщательно растирают в фарфоровой ступке, добавляя постепенно 35 мл воды. Переносят в колбу и встряхивают до образования однородной массы. На пластинку, предварительно обезжиренную спиртом, наносят 5 г сорбционной массы и, покачивая, равномерно распределяют по поверхности. Сушат в течение 18 часов при комнатной температуре, хранят в эксикаторе над слоем осушителя.

2.7. Проведение определения.

2.7.1. Определение методом тонкослойной хроматографии.

Экстракция. 50 г воздушно-сухой почвы помещают в стеклянный стакан, предварительно слегка измельчив крупные комки в фарфоровой ступке. Слегка увлажняют водой и перемешивают стеклянной палочкой. Экстракцию проводят 4-кратно ацетоном (общий объем экстракта 100 мл) при перемешивании пробы, отстаивая каждый раз по 15 минут, экстракты объединяют в делительной воронке, сливая через слой безводного сернокислого натрия. Затем в воронку добавляют 100 мл воды и 20 мл хлороформа, насыщенного водой. Делительную воронку осторожно покачивают 10 мин, отстаивают и сливают слой хлороформа через безводный сернокислый натрий в колбу для упаривания. Повторяют экстракцию хлороформом еще дважды. Экстракт упаривают под вакуумом при температуре не выше 40°С досуха. Остаток растворяют в диэтиловом эфире, ополаскивая колбу трижды эфиром, и наносят раствор на хроматографическую пластинку. На эту же пластинку наносят стандартные растворы фталофоса, содержащие 1, 5 и 10 мкг фталофоса.

2.7.2. Хроматографирование. Пластинку с нанесенным раствором помещают в камеру для хроматографирования, в которую налит подвижный растворитель: смесь ацетона и гексана (1:2). Насыщение камеры не менее 30 минут. Погружение пластинки в растворитель должно быть не более чем на 0,5 см. После того, как фронт растворителя поднимется на 10 см, пластинку вынимают, хорошо просушивают на воздухе и снова помещают в ту же камеру и дают подняться фронту растворителя на 10 см. Затем пластинку подсушивают на воздухе и опрыскивают проявляющим реагентом, а через 5 мин - раствором уксусной кислоты. Зоны локализации препарата обнаруживаются в виде ярко-синих пятен. Величина Rf фталофоса равна 0,580,5.

2.8. Обработка результатов анализа. Количественное определение производят путем сравнения интенсивности окраски и размера пятен пробы и стандартных растворов.

Расчет. Содержание фталофоса в анализируемой пробе в мг/кг рассчитывают по формуле:

мг/кг, где

Х - содержание исследуемого препарата в пробе, мг/кг;

А - количество препарата, найденного путем визуального сравнения со стандартом, мг;

В - навеска исследуемой пробы, кг.

______________________________

* Очистку экстракта на колонке с можно использовать вместо очистки вакуумной сублимацией при определении фозалона ГЖХ с ТИД.