Приложение С (обязательное). Проверка эффективности удержания в рабочем проеме бокса

Приложение С
(обязательное)

Проверка эффективности удержания в рабочем проеме бокса

С.1 Общие положения

С.1.1 Основные принципы

БМБ испытывается на эффективность удержания в рабочем проеме путем создания внутри бокса спорового аэрозоля либо аэрозоля раствора йодида калия (KI) с последующим подсчетом количества спор или частиц, собранных в определенных точках перед рабочим проемом снаружи бокса.

Введением цилиндра через передний проем имитируется присутствие руки оператора, приводящего к возмущению потока воздуха, входящего в бокс.

Испытание проводят в заданной контрольной точке.

С.1.2 Выбор точек отбора проб

Для боксов шириной до 1,5 м должно быть отобрано пять проб одним методом в центре рабочего проема снаружи бокса. Для боксов шириной от 1,5 до 2 м должно быть отобрано пять проб одним методом в центре рабочего проема снаружи бокса, а также отобрано по пять проб одним методом в центре правой и левой половины рабочего проема снаружи бокса. Для боксов большей ширины должно быть отобрано по пять проб одним методом в точках, расположенных в центре каждого метра ширины рабочего проема снаружи бокса.

С.2 Микробиологический метод испытания

С.2.1 Реактивы

Споры Bacillussubtilis var. niger (B.subtilis), АТСС 1) 9372, NCTC 2), 10073 или В. subtilis var. Marburg АТСС 6051.

Стерильный разбавитель готовится следующим образом.

Либо:

a) Раствор конечного разжижающего фосфатного буфера (PBS) (шаг 1).

Растворить 34 г в 500 мл дистиллированной .

Довести рН до уровня с помощью NaOH при температуре 25°С.

Довести до 1 л дистиллированной .

Конечный разбавитель PBS (шаг 2).

Дистиллированная :1 л.

Исходный PBS, шаг 1:125 мл.

Конечный рН: 7,2 0,5.

Автоклавирование при температуре 120°С в течение 15 мин.

Дополнительно: сульфат магния (50 г 7 на 1 л дистиллированной ): 5 мл,

либо:

b) Дистиллированная :1 л.

Довести рН до уровня при температуре 25.

Автоклавирование при температуре 120 в течение 15 мин.

Примечание - Формула b) подходит для приготовления разбавителя, когда споровая суспензия готовится для немедленного использования. Если требуется хранение суспензии при температуре 4, то используется формула а).

Суспензия спор В. subtilis var. niger готовится по методу А или В следующим образом.

Метод А (используя заранее приготовленные споры B.subtilis)

С соблюдением асептических условий произвести посев спор в несколько чашек Петри размером 100х15 мм с триптическим соевым агаром. Инкубировать в течение () ч при температуре () . Извлечь характерно окрашенные колонии и поместить их в десять стерильных флаконов объемом 220 мл с завинчивающимися крышками, содержащих примерно по 50 мл триптического соевого агара. Инкубировать в течение () ч при температуре (). Добавить по 10 мл PBS в каждый флакон и осторожно смыть бактерии с поверхности агара.

Перенести бактериальную суспензию в количестве приблизительно по 100 мл в стерильные флаконы объемом 150 мл с завинчивающимися крышками. Для освобождения суспензии от остатков клеток провести трехкратную отмывку в фосфатном буфере PBS центрифугированием при 1500 об./мин в течение 10 мин. Снова довести объем суспензии в фосфатном буфере PBS до начального. Нагревать культуру при (650,5)°С в течение 15 мин. Определить концентрацию спор с помощью методов стандартных разведений, используя фосфатный буфер PBS и триптический соевый агар. Споры, приготовленные вышеописанным способом, должны дать концентрацию .

Инкубировать чашки в течение () ч при ()°С. Разбавить суспензию спор с помощью фосфатного буфера PBS до достижения конечной концентрации спор , если споры используют немедленно. Хранить запас суспензии спор при 4°С или, разделив на определенное количество для хранения во флаконах с завинчивающимися крышками, при минус 70°С, делая частые проверки на жизнеспособность преимущественно методом окрашивания спор.

Метод В

Инокулировать порции стерильного триптозного бульона по 250 мл определенным количеством полученных ранее спор B. subtilis или ресуспендированных лиофильно высушенных культур, следуя указаниям инструкций АТСС или NCTC. Инкубировать суспензию в соответствующем шейкере в течение () ч при ()°С. Полученную культуру нагревать при (650,5)°С в течение 15 мин.

Перенести суспензию во флаконы с завинчивающимися крышками и промыть минимум три раза в стерильной дистиллированной воде с помощью центрифуги при 1500 об./мин в течение 10 мин. Если планируется хранение, при последней промывке использовать фосфатный буфер PBS. Определить концентрацию спор методом стандартных разведений, используя фосфатный буфер PBS и триптический соевый агар. Споры, приготовленные вышеописанным способом, должны дать урожай в среднем в количестве .

Инкубировать чашки в течение () ч при ()°С. Если суспензия спор должна быть использована немедленно, разбавить суспензию фосфатным буфером PBS до достижения конечной концентрации спор в количестве . Суспензию разделить на определенное количество и хранить при 4°С в стерильных флаконах с завинчивающимися пробками или хранить в морозильной камере при минус 70°С. Перед использованием проверить жизнеспособность спор.

С.2.2 Оборудование

Чашки Петри размером 100 х 15 мм или 150 х 22 мм, содержащие питательный агар, триптический соевый агар или другую подходящую питательную среду без ингибиторов или других добавок.

Шесть стеклянных импинджеров (см. [9]), диаметр капилляров 1,3 мм, объемный расход откалиброван на 12,5 л/мин, содержащий 20 мл стерильного разбавителя.

Два пробоотборника воздуха с расходом () л/мин3).

Жидкостный 6-струйный модифицированный распылитель Коллисон типа MRE (например, модель CN-38 компании BGI Inc., Уолтхэм МА, США 4) или другой распылитель, который может быть использован для создания бактериального аэрозоля с подобными характеристиками.

Цилиндр из нержавеющей стали или алюминиевого сплава внешним диаметром 63 мм и с закрытыми торцами. Цилиндр предназначен для имитации нарушения воздушного потока. Длина цилиндра зависит от размера внутреннего пространства бокса. Цилиндр должен упираться одним концом в заднюю стенку бокса, а другой конец должен выступать на расстояние минимум 150 мм в комнату через рабочий проем бокса.

С.2.3 Процесс

Выбрать и откалибровать распылитель, как указано в С.4.

Встряхнуть распылитель, содержащий до 55 мл суспензии спор [ Bacillus subtilis], и установить его по центру между боковыми стенками рабочего пространства бокса. Для боксов класса I убедиться, что ось струи расположена ниже цилиндра и приблизительно в центре между его нижней поверхностью и рабочей поверхностью бокса. Для боксов класса II убедиться, что ось струи находится наравне с верхней кромкой рабочего проема.

Убедиться, что отверстие распылителя расположено на расстоянии 100 мм за плоскостью рабочего проема и что ось струи параллельна рабочей поверхности и направлена прямо на рабочий проем.

Установить цилиндр в центре бокса. Убедиться, что ось цилиндра расположена на высоте 69 мм выше рабочей поверхности. Расположить вокруг цилиндра четыре импинджера с пробоотборными отверстиями на расстоянии 63 мм от рабочего проема с внешней стороны бокса. Расположить два импинджера таким образом, чтобы оси их пробоотборных отверстий находились на расстоянии 150 мм друг от друга в горизонтальной плоскости, касательной к верхней части цилиндра. Установить оставшиеся два импинджера так, чтобы оси их пробоотборных отверстий были на расстоянии 50 мм друг от друга и лежали в горизонтальной плоскости на 20 мм ниже цилиндра. В качестве контрольной проверки установить чашку с агаром под центром цилиндра и убедиться в том, что она стоит на расстоянии 10 мм выше или ниже передней приточной решетки для уменьшения препятствия воздушному потоку.

Установить два пробоотборника щелевого типа так, чтобы горизонтальная поверхность воздушного всасывающего отверстия находилась на высоте рабочей поверхности, а вертикальные оси всасывающих отверстий - на расстоянии 150 мм спереди бокса и на расстоянии 200 мм от каждой внутренней стороны боковой стенки. Установить два импинджера так, чтобы плоскость всасывающих отверстий располагалась горизонтально на расстоянии 350 мм над рабочей поверхностью бокса, вертикальные оси - на расстоянии 50 мм с внешней стороны спереди бокса и 150 мм с каждой стороны центральной линии.

Включить бокс и дать ему работать до тех пор, пока не установятся рабочие условия, минимум 30 мин до начала любого испытания.

Продолжительность испытания должна составлять 30 мин. Испытание проводится следующим образом:

- время 0: включить щелевые пробоотборники;

- время 5 мин: включить распылитель;

- время 6 мин: включить импинджеры;

- время 11 мин: выключить импинджеры;

- время 11,5 мин: выключить распылитель;

- время 30 мин: выключить щелевые пробоотборники.

Профильтровать собранную жидкость со всех импинджеров через мембранный фильтр диаметром 47 мм с размером пор 0,22 мкм, вынуть фильтр асептическим способом и поместить в соответствующую среду. Чашки с фильтрами и чашки из пробоотборников должны быть инкубированы при 37°С. Проверить их через 24 - 48 ч и, если реакция отрицательная, проинкубировать еще раз и проверить через 44 - 48 ч.

Примечание - Для исследовательских целей собранная жидкость должна быть профильтрована отдельно из каждого импинджера для получения информации по выбранным областям внутреннего пространства бокса.

Контрольная проба должна быть положительной. Проба считается положительной, если она содержит более 300 КОЕ B.subtilis.

С.2.4 Подсчет

Количество распыленной жидкости определяют взвешиванием распылителя перед включением и по окончании испытания. При известной концентрации спор подсчитать количество распыленных спор N, КОЕ, следующим способом:

,

где с - концентрация суспензии спор, КОЕ/г;

- масса распылителя с суспензией спор, г, перед началом испытания;

- масса распылителя с суспензией спор, г, после испытания.

Подсчитать количество КОЕ B.subtilis, полученных из шести импинджеров, и количество КОЕ В. subtilis, полученных из двух пробоотборников воздуха.

С.2.5 Оформление результатов

Оформить результаты в виде количества распыленных спор N и количества полученных КОЕ.

С.2.6 Отчет об испытании

Включить результат испытания и ссылку на используемый метод (например, приложение С ГОСТ Р ЕН 12469-2010) в документацию, указанную в разделе 9.

С.3 Метод испытания с применением йодида калия (KI)

С.3.1 Введение

Индекс переноса (см. [11]), определенный по окончании испытания в заданной точке, рассчитывается по выражению , где N - количество распыленных частиц аэрозоля, n - количество частиц в пробе по завершении процесса отбора при скорости пробоотбора s. В помещении с турбулентным режимом вентиляции, приводящим к полному перемешиванию во всем пространстве, индекс переноса равен 1/V (см. [12]), где 1/V - объемная скорость вентиляции с учетом потерь за счет седиментации. Размерность индекса переноса - время/объем.

Соотношение индексов переноса в двух ситуациях (снаружи бокса и внутри бокса) называется фактором защиты и является безразмерной величиной. Для условий снаружи бокса объемная скорость вентиляции комнаты V принимается 10 . При этом фактор защиты равен при значении скорости пробоотбора s, выраженной в , или , если значение s выражено в . В идеале не должно быть утечки опасных аэрозолей из бокса. Поэтому значение n должно быть равно 0, а фактор защиты должен быть бесконечным. Однако ни один бокс с открытым проемом не дает полную защиту, а минимальная величина , которая может быть определена, зависит от чувствительности метода, например, от объема пробы, от количества частиц в единице объема распыляемого аэрозоля N, от скорости пробоотбора s и наименьшего количества частиц в пробе, которое можно отличить от фонового загрязнения.

Для практического применения при испытаниях значения величин должны быть: N - не менее , s - не менее 20 и n - не более 4, что ведет к минимально допустимому значению - не менее .

С.3.2 Реагенты

Йодид калия концентрацией 15 г/л, растворенный в абсолютном этаноле либо в промышленном метиловом спирте с содержанием воды не более чем 5% по объему.

Хлорид палладия концентрацией 1,0 г/л, растворенный в соляной кислоте концентрацией 0,1 моль/л.

С.3.3 Оборудование

С.3.3.1 Блок аэрозольного генератора, состоящий из диска диаметром 38 мм, вращающегося со скоростью (28000 500) об/мин, и сопла для подачи раствора йодида калия (С.3.2) на вращающийся диск. Расстояние между концом сопла и вращающимся диском устанавливают равным 0,1 мм. Блок также включает лабораторную подставку для удержания аэрозольного генератора над рабочей поверхностью, если это необходимо.

С.3.3.2 Пробоотборники воздуха, работающие на центростремительном принципе со скоростью пробоотбора через всасывающее отверстие 100 , и конус, через который проходит 3% этого воздуха (см. [13]).

Примечания

1 Поток воздуха через пробоотборники может создаваться центробежным вентилятором, подсоединенным к пробоотборникам фиксированной трубкой.

2 Частицы, будучи тяжелее воздуха, следуют по прямому пути через конус и осаждаются на мембранном фильтре, размещенном в основании конуса, в то время как воздух движется по внешней стороне конуса.

С.3.3.3 Металлический цилиндр диаметром 60 - 65 мм с гладкой поверхностью и закрытый с одной стороны, установленный на опоре.

С.3.3.4 Чашки Петри диаметром 55 мм.

С.3.3.5 Мембранный фильтр диаметром 25 мм и размером пор 3 мкм.

С.3.4 Подготовка испытаний

Подготовить две чашки Петри до начала испытаний. Одну из них наполовину заполнить раствором хлорида палладия, другую наполовину заполнить водой и закрыть каждую чашку крышкой. Подготовить два листа бумаги для просушки фильтрующих мембран.

Установить цилиндр в центре между боковыми стенками рабочего пространства бокса таким образом, чтобы один конец цилиндра располагался внутри бокса, а нижний край цилиндра был на высоте 65 - 75 мм от поверхности рабочего стола. Используя уровень, установить цилиндр горизонтально. Цилиндр должен выдаваться в лабораторию минимум на 250 мм от плоскости рабочего проема.

Установить четыре воздушных пробоотборника в рабочем проеме бокса таким образом, чтобы воздухозаборные отверстия находились на расстоянии 150 - 160 мм от плоскости рабочего проема. Добиться, чтобы уровень воздухозаборных отверстий двух пробоотборников находился на высоте верхнего края цилиндра и на расстоянии 150 мм с каждой стороны осевой линии рабочего проема, а также чтобы уровень воздухозаборных отверстий двух других пробоотборников совпадал с нижним краем окна (поднимающегося стекла) и был на расстоянии 155 мм с каждой стороны осевой линии рабочего проема.

Для боксов класса I установить аэрозольный генератор в центре бокса под цилиндром так, чтобы край диска располагался на расстоянии 100 мм от плоскости рабочего проема внутри бокса.

Для боксов класса II установить аэрозольный генератор на лабораторную подставку в центре бокса так, чтобы центр диска был прямо над центром цилиндра, а край диска располагался на расстоянии 100 мм от плоскости рабочего проема внутри бокса. Установить высоту генератора таким образом, чтобы диск был на уровне верхнего края переднего проема.

Примечание - Расположения аэрозольного генератора различны для боксов классов I и II для того, чтобы появилась возможность проведения испытания в самых уязвимых частях воздушной завесы рабочего проема.

В каждый пробоотборник уложить мембранный фильтр. В соответствии с инструкциями производителя установить перепады давления для каждого пробоотборника в целях установления скорости пробоотбора, равной 100 .

С.3.5 Процесс испытания

Включить бокс и дать ему поработать до тех пор, пока не установятся рабочие условия.

Включить пробоотборник и вращающийся диск. Подождать 15 с, затем подать раствор йодида калия в количестве 20 мл в центр вращающегося диска. При этом начнется процесс образования аэрозоля. Выключить пробоотборники воздуха через 15 с после прекращения процесса аэрозолизации. Подождать, пока всасывающий насос полностью не остановится, а затем извлечь мембранные фильтры.

Поочередно поместить мембранные фильтры из каждого пробоотборника в чашку Петри, содержащую раствор хлорида палладия, вверх той поверхностью, которая подвергалась воздействию потока воздуха. Отметить, из какого пробоотборника был удален мембранный фильтр.

В течение 30 - 45 с мембранный фильтр пропитается хлоридом палладия, и частицы йодида калия станут заметными в виде коричневых пятен. Вынуть мембранный фильтр и погрузить его в чашку Петри с дистиллированной водой на 3 - 4 с, затем поместить его на чистую бумагу для просушки. Повторить эту процедуру с мембранными фильтрами из других пробоотборников. Чашки Петри накрыть крышками.

Примечания

1 Во избежание загрязнения необходимо убедиться, что пинцеты, используемые для помещения мембраны в раствор хлорида палладия, не используются для загрузки пробоотборников воздуха.

2 Раствор йодида калия, используемый для испытаний, является легковоспламеняющимся веществом и вызывает коррозию необработанной стали. Бокс после испытаний должен быть тщательно очищен мокрым тампоном. Вращающийся диск должен быть очищен с особой осторожностью.

Проверить каждый фильтр с помощью 10-кратной лупы и подсчитать количество коричневых пятен на мембранном фильтре.

Примечание 3 - Если количество пятен превышает 50 - 100, необходимо использовать масштабную сетку с лупой и подсчитать количество пятен внутри одной клетки и затем умножить его на количество клеток.

С.3.6 Вычисление фактора защиты и оформление результатов испытаний

Подсчитать количество диспергированных частиц йодида калия N, используя следующее уравнение:

,

где М - объем раствора йодида калия, распыленного аэрозольным генератором, мл;

- коэффициент, учитывающий размер аэрозольной частицы, скорость пробоотбора и скорость вращения диска.

Затем вычислить значение фактора защиты проема отдельно для каждого мембранного фильтра, используя следующее уравнение:

,

где V - скорость пробоотбора, ;

n - количество пятен на мембранном фильтре.

Примечания

1 В данном случаем M = 20 мл и V = 100 (см. С.3.3.2).

2 Используя вышеприведенное уравнение, значения M и V, данные в примечании 1, и принимая фактор защиты , получаем количество пятен на мембранном фильтре, равно 62.

3 В случае если на мембранном фильтре было одно пятно, то фактор защиты будет равен . Если на мембранном фильтре не было пятен, то это будет означать, что фактор защиты был выше, чем вышеуказанный, и должен быть записан как .

С.3.7 Определение фона

Установить два пробоотборника воздуха с вложенными мембранными фильтрами перед боксами на расстоянии 150 мм с каждой стороны центральной линии рабочего проема и на расстоянии 100 мм от поверхности рабочего проема. Включить всасывающий вентилятор пробоотборника на 10 мин, не включая при этом аэрозольный генератор.

Удалить мембранные фильтры, провести процедуру обработки и подсчет пятен в соответствии с С.3.5.

Примечания

1 При определении фона в лаборатории, где в течение 24 ч не проводилось никаких испытаний, на обработанных мембранах не должны быть обнаружены никакие коричневые пятна.

2 Если испытания по определению был и проведены недавно (или где они показали значительную утечку аэрозоля), рекомендуется проводить определение фона перед дальнейшими испытаниями в боксе. Наличие более пяти пятен на одном из мембранных фильтров после 10-минутного испытания следует рассматривать как основание для отсрочки дальнейших испытаний боксов до тех пор, пока фон не будет отсутствовать.

С.3.8 Отчет об испытании

Результат испытания и ссылку на используемый метод (например, приложение С ГОСТ Р ЕН 12469-2010) включить в документацию, указанную в разделе 9.

С.4 Выбор распылителя и его калибровка для микробиологического метода

С.4.1 Критерии выбора

Распылитель считается пригодным, если он:

a) распыляет в воздухе спор Bacillus subtilis, например, var. niger за 5 мин.;

b) распыляет (94 6)% одиночных споровых клеток;

c) скорость распыления споровых аэрозолей (0,51 0,05) м/с.

Примечания

1 Испытание, проведенное First et. аl. (см. [10]), показало, что 6-струйный распылитель Коллисон из нержавеющей стали распыляет бактериальный споровый аэрозоль в соответствии с требованиями С.2.3, если выполняются следующие условия:

- распылитель оснащен стеклянной колбой диаметром 50 мм, высотой 90 мм и горизонтальным выпускным отводом внутренним диаметром 23 мм в верхней части распылителя;

- распылитель работает при давлении 140 кПа (1,4 бар);

- в колбе находится 55 мл суспензии спор с концентрацией ;

- дно 6-струйной головки распылителя на 18 мм выше дна колбы;

- на внутренней стороне стеклянной колбы образуются шесть дорожек, созданных воздушными струями (должны быть исследованы размер и очертания контуров, чтобы убедиться, что выпускные отверстия не засорены и не деформированы).

2 6-струйный распылитель Коллисон не нужно подвергать повторному испытанию перед использованием.

С.4.2 Калибровка

С.4.2.1 Общие положения

Калибровку распылителя в лаборатории, где его будут использовать, проводят перед первым использованием и периодически в дальнейшем.

С.4.2.2 Реагенты

Суспензия Bacillus subtilis, например, var. niger спор в миллилитре.

С.4.2.3 Оборудование для калибровки распылителя

Распылитель, подлежащий калибровке.

Один импинджер.

Таймер.

Воронкообразный держатель мембранного фильтра размером 47 мм с силиконовыми резиновыми крышками с двух сторон держателя, вулканизированными при комнатной температуре (RTV). В крышках имеются отверстия для вставки выпускного конца распылителя в утолщенный торец держателя и импинджера в другой торец держателя. Крышка, в отверстие которой вставляется импинджер, должна плотно прилегать к импинджеру. Крышка, в отверстие которой вставляется распылитель, не должна плотно прилегать к распылителю для того, чтобы импинджер работал при атмосферном давлении, а не в замкнутой системе.

Расходомер.

Датчик давления.

Мембранный фильтр аэрозольного типа диаметром 37 мм в кассете с открытой поверхностью.

С.4.2.4 Процедура калибровки

Измерить размеры выходного отверстия распылителя и подсчитать площадь поперечного сечения, выраженную .

Вычислить величину воздушного потока, проходящего через распылитель, в л/мин, при которой достигается необходимая скорость воздушного потока, проходящего через распылитель, в м/с.

Добавить рекомендованный производителем объем суспензии спор в распылитель.

Установить выпускное отверстие распылителя в резиновую крышку с широкой стороны держателя фильтра. Вставить воздухозаборную трубку пробоотборника в держатель фильтра через вторую резиновую крышку. Убедиться, что прилегание со стороны импинджера плотное.

Примечание - Существуют два вида импинджеров (по типу химического корпуса): импинджер с наконечником, погруженным в жидкость на 4 мм от дна колбы, пропускающий 6 л/мин при давлении 56 кПа (0,56 бар) или выше (стеклянный импинджер АСЕ N 7541), и импинджер с наконечником выше уровня поверхности воды, пропускающий 12,5 л/мин при давлении 56 кПа (0,56 бар) и выше, известный под названием AGI-30 (стеклянный импинджер АСЕ N 7540). Может быть использован любой из этих импинджеров. Если расход воздуха распылителя составляет не 6 л/мин или 12,5 л/мин, выбрать импинджер, который работает при более высоких расходах воздуха и пропускает через щель между крышкой и вставленным в держатель распылителем количество воздуха, равное разнице двух воздушных потоков, проходящих через распылитель и импинджер. Если распылитель и импинджер работают при одинаковых расходах воздуха, то рекомендуется плотная подгонка с обоих концов держателя.

Подсоединить шланг к манометру, состыкованному с расходомером, а затем к распылителю.

Включить одновременно распылитель и импинджер, работающий в соответствии с инструкциями производителя. Установить скорость потока воздуха, проходящего через распылитель, равную 0,51 м/с, рассчитав ее по диаметру струи при расходе воздуха 12,5 л/мин для 6-струйного распылителя. Оставить работать распылитель в течение 5 мин (используя таймер) и импинджер на 5 мин 15 с.

Перенести собранную импинджером жидкость, соблюдая правила асептики, в стерильный градуированный цилиндр объемом 500 мл. Ополоснуть колбу, импинджер и бутыль стерильной водой для обеспечения сбора всех спор, слить всю воду после полоскания в градуированный цилиндр.

Измерить и записать объем жидкости в градуированном цилиндре. Перелить всю жидкость в стерильную колбу, в которой находится магнитная мешалка, и осторожно перемешать.

Отобрать из жидкости пять одинаковых проб и определить в них концентрацию спор.

Выполнить отбор проб из содержащего споры аэрозоля с помощью мембранного фильтра, установленного в предусмотренном месте. После завершения отбора пробы окрасить мембранный фильтр соответствующим красителем. Подсчитать количество отложений, содержащих одну спору или более в соответствующих областях, под микроскопом.

С.4.2.5 Подсчет и оформление результатов

Количество спор, уловленных в течение .

Скорость воздуха, выходящего из распылителя, равна объему воздуха, измеренному в л/мин = , поделенному на площадь выпускного отверстия распылителя в (см. также С.4.2.6).

Подсчитать процент одиночных спор во всей пробе аэрозоля.

С.4.2.6 Альтернативный способ определения скорости воздуха распылителя

Скорость воздуха, выходящего из распылителя, может быть измерена в центре отверстия с помощью термоанемометра. Распылитель должен быть включен без жидкости. Максимальная скорость воздуха - в центре отверстия, минимальная - по бокам из-за трения молекул воздуха о стенки. Этот факт может быть принят во внимание в уравнениях для расчета объемного расхода воздуха

и может быть подсчитана средняя скорость потока

,

где V - объем расхода воздуха, ;

R - внутренний радиус выпускного отверстия, м;

r - поправочный коэффициент (), м, для компенсации потери из-за трения;

v - скорость, измеренная в центре выпускного отверстия, м/с;

- расчетная средняя скорость в выпускном отверстии распылителя, м/с.

1) Американская коллекция стандартных культур, Роквилл, МД, США.

2) Национальная коллекция стандартных культур, Лондон, Англия.

3) Щелевые пробоотборники воздуха со скоростью воздуха в щели (6010) м/с. Расстояние между нижним краем отверстия и поверхностью агаровой среды не должно более чем в 3-6 раз превышать расстояние между верхним и нижним краями щели. Для каждого вида испытания требуются два пробоотборника щелевого вида.

4) Модель распылителя CN-38 является примером подходящего оборудования, имеющегося в продаже. Эта информация дается для удобства пользователей настоящего стандарта и не является подтверждением соответствия этой продукции требованиям CEN (Европейского комитета по стандартизации).