Приложение F (обязательное). Контроль эффективности защиты от перекрестных загрязнений в боксах класса II

Приложение F
(обязательное)

Контроль эффективности защиты от перекрестных загрязнений в боксах класса II

F.1 Принцип

Способность боксов микробиологической безопасности по предотвращению перекрестных загрязнений оценивается уровнем загрязнения чашек с агаром, расположенных на рабочей поверхности бокса, при распылении аэрозоля суспензии микробиологических спор внутри бокса.

Примечание - Линия, по которой ламинарный нисходящий поток раздваивается и где он частично направляется в переднюю приемную решетку, а частично в заднюю решетку, не всегда проходит по центру внутренней боковой стенки. Поэтому эта линия разделения должна быть установлена экспериментально в целях правильного расположения распылителя. Место расположения распылителя может быть легко установлено путем визуализации потока дымом (см. [18]).

Введением цилиндра через рабочий проем имитируется присутствие руки оператора, приводящее к возмущению потока воздуха, входящего в бокс.

Испытание проводится в заданной контрольной точке.

F.2 Реагенты

Споровая суспензия, состоящая из спор непатогенных бактерий, например Bacillus subtilis var. globigii (ссылка NTCN 10073) в стерильной дистиллированной воде.

Чашки Петри диаметром 90 мм, содержащие питательный агар или триптический соевый агар.

F.3 Оборудование

Распылитель, способный генерировать, как минимум,  спор/мин со скоростью распыления, соразмерной скорости поступающего в бокс через рабочий проем воздуха, и использующий метод Хино и Сэто (см. [18]). Скорость распыления не должна превышать скорость поступающего в бокс через рабочий проем воздуха.

Примечание - Рекомендуются распылители Коллисон (см. [20]).

F.4 Процесс

F.4.1 Откалибровать распылитель, как указано в С.4.2.

F.4.2 Взвесить распылитель, содержащий 55 мл суспензии спор [ Bacillus subtilis спор/мл], и установить его так, чтобы горизонтальная ось распылителя располагалась на расстоянии 75 - 125 мм над рабочей поверхностью, задняя сторона распылителя была прижата к левой внутренней стенке в точке, где нисходящий поток воздуха раздваивается (тест с дымом). Ось струи располагается параллельно рабочей поверхности и направлена к противоположной боковой стенке.

F.4.3 Включить бокс и оставить его работать до тех пор, пока не будут достигнуты нормальные рабочие условия, т.е. минимум в течение 30 мин до начала испытания.

F.4.4 Установить открытые чашки Петри с агаром на рабочую поверхность. Установить два ряда контрольных чашек вдоль центральной линии под выпускным отверстием распылителя. Установить один ряд чашек так, чтобы их центры находились на линии, идущей от передней стенки к задней на расстоянии 355 мм от боковой стенки, которая подвергается испытанию. Установить минимум еще один ряд чашек за рядом, расположенным на расстоянии 355 мм; если возможно, установить два ряда чашек.

F.4.5 Включить в работу распылитель. Через 5 мин выключить распылитель, но работу бокса продолжать в течение 15 мин. Взвесить распылитель.

F.4.6 Бокс должен работать во время установки крышек на открытые чашки с агаром. Инкубировать чашки при 37°С и проверить их через 24 - 28 ч. Если результат будет отрицательным, то продолжить инкубирование и проверить через 44 - 48 ч.

F.4.7 Повторить процедуру, описанную в F.4.3 - F.4.6, установив распылитель у правой внутренней стенки.

F.4.8 Испытания выполнить трижды с левой и правой стороны бокса.

F.4.9 Чашки с агаром, расположенные на расстоянии 355 мм от боковой стенки, будут содержать КОЕ B.subtilis и могут быть использованы в качестве контрольных.

F.5 Подсчет и оформление результатов

Подсчитать и выразить результат в количестве распыленных спор N, как описано в С.2.4.

Подсчитать общее количество КОЕ, обнаруженных на чашках с агаром, расположенных на расстоянии, большем чем 355 мм.

F.6 Отчет об испытании

Включить результат испытания и ссылку на используемый метод (например, приложение F ГОСТ Р ЕН 12469-2010) в документацию, указанную в разделе 9.