Приложение А (обязательное). Порядок градуировки спектрофотометра для определения патулина методом тонкослойной хроматографии

Приложение А
(обязательное)

Порядок
градуировки спектрофотометра для определения патулина методом тонкослойной хроматографии

Для определения массовой концентрации патулина в градуировочном (основном) растворе готовят растворы двухромовокислого калия с () = , с () = , с () = в растворе серной кислоты с (1/2 ) = 0,018 .

Раствор серной кислоты готовят следующим образом. В мерную колбу вместимостью 2000 пипеткой вносят 1 серной кислоты и доводят объем водой до метки. (Допускается использовать мерную колбу вместимостью 1000 , соответственно уменьшив вдвое объем серной кислоты). Градуировочный раствор с () = готовят следующим образом: 78 мг двухромовокислого калия вносят в мерную колбу вместимостью 1000 , растворяют в 100 - 200 раствора серной кислоты и доводят до метки раствором серной кислоты той же концентрации. Содержимое колбы тщательно перемешивают. Остальные калибровочные растворы готовят точным разведением первого раствора в два и в четыре раза раствором серной кислоты.

Определяют оптическую плотность каждого раствора в кювете с рабочей длиной 1 см на спектрофотометре при длине волны 350 нм. В качестве контрольного раствора используют раствор серной кислоты. По полученным значениям оптической плотности для каждого раствора вычисляют значение молярного показателя поглощения (Е), , по формуле

,

(А.1)

где D - оптическая плотность калибровочного раствора;

с - молярная концентрация двухромовокислого калия в растворе, ;

l - рабочая длина кюветы, см.

По полученным значениям рассчитывают среднеарифметическое значение молярного показателя поглощения (Е) и вычисляют поправочный коэффициент () для спектрофотометра по формуле

,

(А.2)

где - стандартизированное значение молярного показателя поглощения;

.