Приложение В (обязательное). Тест-микроорганизмы для обычно используемых питательных сред (информация о питательных средах, условиях культивирования, тест-микроорганизмах, номерах коллекций культур тест-микроорганизмов и ожидаемых реакциях)

"Приложение В
(обязательное)

Тест-микроорганизмы для обычно используемых питательных сред (информация о питательных средах, условиях культивирования, тест-микроорганизмах, номерах коллекций культур тест-микроорганизмов и ожидаемых реакциях)

Таблицы В.1 - В.6 составлены с учетом контрольных штаммов, используемых в Европейской фармакопее (ЕФ), и рекомендаций ЕФ, касающихся пищевой микробиологии питательных сред [Рабочая группа международного комитета по пищевой микробиологии и гигиене (ICFMH)]. Данные критерии должны быть включены в конкретные стандарты, которые будут разработаны или будут пересматриваться в будущем. Валидированной партией считается партия питательных сред, которая демонстрирует удовлетворительную эффективность. Номера штаммов, приведенные в таблицах В.1 - В.7, взяты из каталога универсальных идентификаторов штаммов, содержащего информацию об эталонных штаммах, которые представлены номерами WDCM и контактной информацией о коллекциях культур, собранных Всемирным центром данных по микроорганизмам (WDCM) (см. [16]). Все перечисленные виды питательных сред описаны в рамках стандартов.

В случае наличия изменчивости штаммов исследуют воздействие питательной среды (например, приобретая тот же вид питательной среды у другого производителя) и получают следующую эталонную культуру из коллекции культур, в которой она была первоначально размещена. Пользователи могут получить необходимую информацию об изменчивости штаммов, обратившись в РГ 5 "Питательные среды" подкомитета 9 технического комитета 34 ИСО через секретариат.

Информация об испытаниях на эффективность, уже опубликованная в стандартах, в таблицах В.1-В.7 не приводится.

Таблица В.1 - Селективные среды для подсчета микроорганизмов

Среда	Тип	Микроорганизмы	Стандарт	Функция	Инкубация	Контрольные штаммы (см. [16]).	Эталонная среда	Метод контроля	Критерии	Типичные реакции
Baird-Parker		Коагулазоположительные стафилококки	ISO 6888-1	Производительность	24 - 48 ч при 37 °С	Staphylococcus aureus WDCM 00032 Staph. aureus WDCM	TSA	Количественный	Минимальное значение :0,5	Черные или серые колонии с прозрачным ореолом (реакция прозрачности с яичным желтком)
				Селективность	48 ч при 37 °С	E. coli WDSM 00013 или WDCM		Качественный	Полное ингибирование
				Специфичность	24 - 48 ч при	Staphylocoсcus epidermidis WDCM 00036 или S. saprophyticus WDCM		Качественный		Черные или серые колонии, реакции прозрачности с яичным желтком нет
RPFA	S	Коагулазоположительные стафилококки	ISO 6888-2	Производительность	24 - 48 ч при 37 °С	Staph, aureus WDCM 00032 Staph. aureus WDCM	TSA	Количественный	Минимальное значение :0,5	Черные или серые колонии с непрозрачным ореолом
				Селективность	48 ч при 37 °С	E. coli WDCM 00013 или WDCM		Качественный	Полное ингибирование
				Специфичность	24 - 48 ч при 37 °С	Staphylococcus epidermidis WDCM 00036 или S. saprophyticus WDCM		Качественный		Черные или серые колонии без непрозрачного ореола
MRS	S	Молочнокислые бактерии	ISO 15214	Производительность	72 ч при 30 °С	Lactobacillus sakei WDCM Pediococcus pentosaceus WDCM 00158 Lactococcus lactis WDCM	Партия среды MRS уже валидирована	Количественный	Минимальное значение :0,7	Типичные колонии, соответствующие каждому виду
				Селективность	72 ч при 30°С	E.coli WDCM 00013 или WDCM Bacillus cereus WDCM 00001		Качественный	Полное ингибирование
MYP	S	Bacillus cereus	ISO 7932	Производительность	24 - 48ч при 30 °С	В. cereus WDCM	TSA	Количественный	Минимальное значение :0,5	Розовые колонии с осадочным ореолом
				Селективность	48 ч при 30 °С	E. coli WDCM 00013 или WDCM		Качественный	Полное ингибирование
				Специфичность	48 ч при 30 °С	Bacillus subtilis WDCM				Желтые колонии без осадочного ореола
Arap Listeria согласно Ottaviani и Agosti	S	Listeria monocytogenes	ISO 11290 (все части)	Производительность	48 ч при 37°С	L. monocytogenes 1/2a WDCM 00020 L. monocytogenes 4b WDCM	TSA	Количественный	Минимальное значение :0,5	Сине-зеленые колонии с непрозрачным ореолом
				Селективность	48 ч при 37 °С	E. соli WDCM 00013 или WDCM Enterococcus faecalis WDCM 00087 или E. faecalis WDCM		Качественный	Полное ингибирование
				Специфичность	48 ч при 37 °С	Listeria innocua WDCM 00017		Качественный	-	Сине-зеленые колонии без непрозрачного ореола
TS(C)	S	Clostridium perfringens	ISO 7937	Производительность	20 ч при 37 °С в анаэробной атмосфере	C. perfringens WDCM C. perfringens WDCM 00080	Партия среды TS(C) уже валидирована	Количественный	Минимальное значение :0,7	Черные колонии
				Селективность TSC	20 ч при 37°С в анаэробной атмосфере	E. coli WDCM 00013 или WDCM		Качественный	Полное ингибирование
TS	S	Сульфитредуцирующие бактерии	ISO 15213	Производительность	24 - 48 ч при 37 °С в анаэробной атмосфере	С. perfringens WDCM С. perfringens WDCM 00080	Партия среды TS уже валидирована	Количественный	Минимальное значение :0,7	Черные колонии
				Специфичность TS		E coli WDCM 00013 или WDCM		Качественный	-	Белые колонии
VRBG	S	Enterobacteriaсеае	ISO 21528 (все части)	Производительность	24 ч при 37 °С	E. coli WDCM 00013 или WDCM Salmonella Typhimurium WDCM 00031	TSA	Количественный	Минимальное значение :0,5	Колонии, имеющие окраску от розовой до красной, с осадочным ореолом или без него
				Селективность	24 ч при 37 °С	E. faecalis WDCM 00087 или WDCM		Качественный	Полное ингибирование
VRBL	S	Колиформные бактерии	ISO 4832	Производительность	24 ч при 30 °С	E coli WDCM 00013 или WDCM	TSA	Количественный	Минимальное значение :0,5	Пурпурно-красные колонии с осадочным ореолом или без него
				Селективность	24 ч при 30 °С	E. faecalis WDCM 00087 или WDCM		Качественный	Полное ингибирование
				Специфичность	24 ч при 30 °С	Pseudomonas aeruginosa WDCM 00025		Качественный	-	Бесцветные или бежевые колонии
СТ-SMAC	S	Escherichia coli O157	ISO 16654	Производительность	24 ч при 37 °С	E coli О 157:H7 WDCM 00014 (нетоксикогенные)	TSA	Количественный	Минимальное значение :0,5	Прозрачные колонии с бледными желтовато-коричневыми тонами, диаметром около 1 мм
СТ- SMAC	S	Escherichia coli O157.	ISO 16654	Селективность	24 ч при 37 °С	Staph, aureus WDCM 00032 или WDCM		Качественный	Полное ингибирование
						E. coli WDCM 00090 или WDCM		Качественный	Частичное ингибирование	Рост определенных розовых колоний
BGBLB		Колиформные бактерии	ISO 4831	Производительность	24 - 48 ч при 30 °С	E coli WDCM 00013 или WDCM Citrobacter freundii WDCM 00006		Качественный	Помутнение 2 и газ в пробирке Дюрхэма	Газообразование и помутнение
				Селективность	24 - 48 ч при 30 °С	E. faecalis WDCM 00087 или WDCM		Качественный	Частичное ингибирование без газообразования
LST	L	Колиформные бактерии	ISO 4831	Производительность	24 - 48 ч при 30 °С	E coli WDCM 00013 или WDCM C. freundii WDCM 00006		Качественный	Помутнение 2 и газ в пробирке Дюрхэма	Газообразование и помутнение
				Селективность	24 - 48 ч при 30 °С	E faecalis WDCM 00087 или WDCM		Качественный	Отсутствие роста
ЕС	L	E coli	ISO 7251	Производительность	24 - 48 ч при 44 °С	E. coli WDCM 00013 или WDCM		Качественный	Помутнение 2 и газ в пробирке Дюрхэма	Газообразование и помутнение
				Селективность	24 - 48 ч при 44°С	Ps. aeruginosa WDCM		Качественный	Отсутствие роста
ТВХ	S	-D-глюкуронидазаположительные бактерии E. coii	ISO 16649 (все части)	Производительность	24 ч при 44 °С	Е. coli WDCM 00013 или WDCM	TSA	Количественный	Минимальное значение :0,5	Синие колонии
				Селективность	24 ч при 44 °С	E. faecalis WDCM 00087 или WDCM		Качественный	Полное ингибирование
				Специфичность	24 ч при 44 °С	Ps. aeruginosa WDCM 00025 или С. freundii WDCM		Качественный		Белые или зелено-бежевые колонии
a S - твердая среда. b Штаммы, используемые в лаборатории конечного пользователя (минимум). с PR - коэффициент производительности. d L - жидкая среда. е WDCM 00013 - сильный, WDCM 00012 - слабый продуценты -D-глюкуронидазы.
Примечание - В случае твердых питательных сред также возможно использование полуколичественного метода посева.

Таблица В.2 - Неселективные среды для подсчета микроорганизмов

Среда	Тип	Микроорганизмы	Стандарт	Функция	Инкубация	Контрольные штаммы (см. [16])	Эталонная среда	Метод контроля	Критерии	Типичные реакции
РСА		Подсчет колоний	ISO 4833	Производительность	72 ч при 30 °С	Е. coli WDCM 00013 или WDCM Staph, aureus WDCM 00032 или WDCM 00034 В. subtilis WDCM	TSA	Количественный	Минимальное значение :0,7
a S - твердая среда. b Штаммы, используемые в лаборатории конечного пользователя (минимум) c PR - коэффициент производительности.

Таблица В.3 - Селективные обогатительные среды

Среда	Тип	Микроорганизмы	Стандарт	Функция	Инкубация	Контрольные штаммы (см. [16])	Эталонная среда	Метод контроля	Критерии	Типичные реакции целевых микроорганизмов
ЕЕ		Entero- bacteria- ceae	ISO 21528-1	Производительность	24 ч при 37 °С	Е. coli WDCM 00013 или WDCM или S. Typhimurium WDCM 00031		Полуколичественный	> 10 колоний на VRBG	Колонии, имеющие окраску от розовой до красной с осадочным ореолом или без него
				Селективность	24 ч при 37 °С	+E. faecalis WDCM 00087 или WDCM		Полуколичественный	Полное ингибирование
Half-Fraser	L	L. monocytogenes	ISO 11290-1	Производительность	24 ч при 30 °С	L monocytogenes 1/2a WDCM 00020 или L monocytogenes 4b WDCM + E. coli WDCM 00013 или WDCM + E. faecalis WDCM 00087 или WDCM		Полуколичественный	> 10 колоний на агаре Listeria согласно Ottaviani и Agosti	Сине-зеленые колонии с непрозрачным ореолом
				Селективность	24 ч при 30 °С	E. coli WDCM 00013 или WDCM		Полуколичественный	Полное ингибирование на TSA
						E. faecalis WDCM 00087 или WDCM		Полуколичественный	< 100 колоний на TSA
Fraser	L	L. monocytogenes	ISO 11290-1	Производительность	48 ч при 37 °С	L. monocytogenes 1/2a WDCM 00020 или L. monocytogenes 4b WDCM + E. coli WDCM 00013 или WDCM + E. faecalis WDCM 00087 или WDCM		Полуколичественный	> 10 колоний на агаре Listeria согласно Ottaviani и Agosti	Сине-зеленые колонии с непрозрачным ореолом
Fraser	L	L monocytogenes	ISO 11290-1	Селективность	48 ч при 37 "С	Е. соli WDCM 00013 или WDCM		Полуколичественный	Полное ингибирование на TSA
						E. faecalis WDCM 00087или WDCM	-		< 100 колоний на TSA
ITC	L	Yersinia enterocolitis	ISO 10273	Производительность	48 ч при 25 °С	Y. enterocolitica WDCM 00160 или WDCM + E. coli WDCM 00013 или WDCM + Ps. aeruginosa WDCM		Полуколичественный	> 10 колоний на СIN или SSDC	Типичные колонии, соответствующие каждой среде (см. ISO 10273)
				Селективность	48 ч при 25 °С	Ps. aeruginosa WDCM Proteus mirabilis WDCM 00023		Полуколичественный	Полное ингибирование на TSA
Бульон-Болтона	L	Campylobacter	ISO 10272-1	Производительность	5 ч при 37°С, затем 44 ч при 41,5°С	Campylobacter coli WDCM или Campylobacter jejuni WDCM 00005 или WDCM + E. coli WDCM 00013 или WDCM + P. mirabilis WDCM		Полуколичественный	> 10 колоний на mCCDA	Сероватые, плоские и влажные, иногда с металлическим блеском
				Селективность	5 ч при 37°С, затем 44 ч при 41,5 °С	E. coli WDCM 00013 или WDCM P. mirabilis WDCM 00023		Полуколичественный	Полное ингибирование на TSA
PSB	L	Y. enterocolitica	ISO 10273	Производительность	3 - 5 сут при 25 °С	Y. enterocolitica WDCM 00160 или WDCM + Е. соli WDCM 00013 или WDCM + Ps. aeruginosa WDCM		Полуколичественный	> 10 коло- нии на CIN или SSDC	Типичные колонии, соответствующие каждой среде (см. ISO 10273)
				Селективность	3 - 5сут при 25 °С	Ps. aeruginosa WDCM P. mirabilis WDCM 00023		Полуколичественный	Полное ингибирование на TSA
МКТТn	L	Salmonella	ISO 6579	Производительность	24 ч при 37 °С	S. Typhimurium WDCM 00031 или S. Enteritidis WDCM + E. coli WDCM 00013 или WDCM + Ps. aeruginosa WDCM		Полуколичественный	> 10 колоний на XLD или другой среде на выбор	Типичные колонии, соответствующие каждой среде (см. ISO 6579)
				Селективность	24 ч при 37 °С	E. coli WDCM 00013 или WDCM		Полуколичественный	Частичное ингибирование 100 колоний на - TSA
						E. faecalis WDCM 00087 или WDCM		Полуколичественный	< 10 колоний на TSA
RVS	L	Salmonella	ISO 6579	Производительность	24 ч при 41,5 °С	S. Typhimurium WDCM 00031 или S. Enteritidis WDCM + E. coli WDCM 00013 или WDCM + Ps. aeruginosa WDCM		Полуколичественный	> 10 колоний на XLD или другой среде на выбор	Типичные колонии, соответствующие каждой среде (см. ISO 6579)
RVS	L	Salmonella	ISO 6579	Селективность	24 ч при 41,5 °С	E. соli WDCM 00013 или WDCM		Полуколичественный	Частичное ингибирование 100 колоний на TSA
						Е. faecalis WDCM 00087 или WDCM		Полуколичественный	< 10 колоний на TSA
а L - жидкая среда. b Штаммы, используемые в лаборатории конечного пользователя (минимум).

Таблица В.4 - Неселективные жидкие среды

Среда	Тип	Микроорганизмы	Стандарт	Функция	Инкубация	Контрольные штаммы (см. [16])	Эталонная среда	Метод контроля	Критерии	Типичные реакции целевых микроорганизмов
ВНI		Коагулазоположительные стафилококки	ISO 6888-1 ISO 6888-3	Производительность	24 ч при 37 °С	Sfapn. aureus WDCM		Качественный	Помутнение 1 - 2
Brusella	L	Campylobacter	ISO 10272 (все части)	Производительность	2 - 5 сут при 25°С	С. соli WDCM или С. jejuni WDCM 00005 или WDCM		Качественный	Помутнение 1 - 2
Peptortesalt	L	Жидкие разбавители	ISO 6887 (все части)	Разбавитель	45 мин при 20 °С 25°С	E. coli WDCM 00013 или WDCM Staph. aureus WDCM 00034	TSA	Количественный	50% колоний/ (50% первоначального подсчета)
Тиогликолят	L	С. perfringens	ISO 7937	Производительность	24 ч при 37 °С	С. perfringens WDCM		Качественный	Помутнение 1 - 2
TSYEB	L	L. monocytogenes	ISO 11290 (все части)	Производительность	24 ч при 25 °С	L. monocytogenes 1/2a WDCM 00020 L. monocytogenes 4b WDCM		Качественный	Помутнение 1 - 2
а L - жидкая среда b Штаммы, используемые в лаборатории конечного пользователя (минимум).

Таблица В.5 - Селективные изолирующие среды

Среда	Тип	Микроорганизмы	Стандарт	Функция	Инкубация	Контрольные штаммы (см. [16])	Эталонная среда	Метод контроля	Критерии	Типичные реакции
mCCDA	Sa	Campylobacter	ISO 10272 (все части)	Производительность	41 ч/41,5 °С	С. соli WDCM или С. jejuni WDCM 00005 или WDCM		Качественный	Активный рост (2)	Сероватые, плоские и влажные, иногда с металлическим блеском
				Селективность	41 ч/41,5 °С	Е. соli WDCM 00013 или WDCM		Качественный	Полное или частичное ингибирование (0 - 1)	Типичные колонии отсутствуют
						Staph. aureus WDCM 00034		Качественный	Полное ингибирование (0)
CIN SSDC	S	Y. ente-rocolitica	ISO 10273	Производительность	24 ч/30 °С	Y. enierocolitica WDCM 00160 или WDCM		Качественный	Активный рост (2)	Типичные колонии, соответствующие каждой среде (см. ISO 10273)
				Селективность	24 ч/30 °С	E. coli WDCM 00013 или WDCM		Качественный	Полное или частичное ингибирование (0 - 1)	Типичные колонии отсутствуют
						Staph. aureus WDCM 00034		Качественный	Полное ингибирование (0)
XLD	S	Salmonella	ISO 6579	Производительность	24 ч/37 °С	S. Typhirnurium WDCM S. Enteritidis WDCM 00030		Качественный	Активный рост (2)	Колонии с черным центром и слегка прозрачной зоной красноватого цвета из-за изменения цвета среды
				Селективность	24 ч/37 °С	E. coll WDCM 00013 или WDCM		Качественный	Рост или частичное ингибирование (0 - 1)	Желтые колонии
						E. faecalis WDCM 00087 или WDCM		Качественный	Полное ингибирование (0)
a S-твердая среда. b Штаммы, используемые в лаборатории конечного пользователя (минимум).

Таблица B.6 - Неселективные изолирующие среды

Среда	Тип	Микроорганизмы	Стандарт	Функция	Инкубация	Контрольные штаммы (см. [16])	Эталонная среда	Метод контроля	Критерии	Типичные реакция
Nutrient agar		Enterobacteriaсеае	ISO 21528 (все части)	Производительность	24 ч при 37 °С	Е соli WDCM 00013 или WDCM		Качественный	Активный рост (2)
		Salmonella	ISO 6579		24 ч при 37 °С	S. Typhimurium WDCM
		Y. enterocolitica	ISO 10273		24 ч при 30 °С	Y. enterocolitica WDCM 00160 или WDCM
агар TSYEA	S	L. monocytogenes	ISO 11290 (все части)	Производительность	24 ч при 37 °С	L. monocytogenes 1/2а WDCM 00020 или L. monocytogenes 4b WDCM		Качественный	Активный рост (2)
a S - твердая среда. b Штаммы, используемые в лаборатории конечного пользователя (минимум). с Штаммы в соответствии с используемым методом.

Таблица В.7 - Многоцелевые среды

Среда	Тип	Микроорганизмы	Стандарт	Функция	Инкубация	Контрольные штаммы (см	Эталонная среда	Метод контроля	Критерии	Типичные реакция
Буферная пептонная		Разбавитель для подсчета всех микроорганизмов	ISO 6887 (все части)	Разбавление	45 мин при 20°С - 25 °С	Е. coli WDCM 00013 или WDCM	TSA	Количественный	% колоний/
		Разбавитель для подсчета L monocytogenes	ISO 11290-2	Разбавление	45 - 60 мин при 20 °С	L. monocytogenes 1/2а WDCM 00020 или L. monocytogenes 4b WDCM	TSA	Количественный	% колоний/
		Предварительное обогащение для обнаружения Salmonella	ISO 6579	Производительность	18 ч при 37 °С	S. Typnimurium WDCM или S. Enteritidis WDCM		Качественный	Помутнение 1 - 2
а L - жидкая среда. b Штаммы, используемые в лаборатории конечного пользователя (минимум). с В случае, когда используется буферная пептонная вода для двух или трех различных целей, по меньшей мере в лабораториях пользователей, проводят испытание по обогащению salmonella.