Приложение 1. Применение сальмонеллезного О-бактериофага

Приложение 1

Применение сальмонеллезного О-бактериофага

Сальмонеллезный О-бактериофаг обладает широким диапазоном специфического действия в отношении бактерий рода сальмонелла и практически неактивен в отношении других представителей энтеробактерий.

Определение чувствительности культур к О-бактериофагу (О-фаготест) является простым, удобным и достаточно надежным вспомогательным методом при исследовании на кишечную группу бактерий. 97,5% заведомо сальмонеллезных культур высокочувствительны к О-бактериофагу и только 2,5% могут быть резистентными. Прочие кишечные бактерии (не считая дизентерийных, которые в небольшом проценте случаев могут быть чувствительны к этому бактериофагу) лизируются указанным бактериофагом не более чем в 0,6-0,7% случаев. Среди известных и наиболее распространенных серологических типов сальмонелл резистентные встречаются внутри нескольких типов: в небольшом количестве - у S. derby, S. tennesse и S. gallinarum-pullorum; в большом количестве (иногда до 50%) - у S. anatum, S. london и некоторых других серологических типов группы Е.

Методика испытания культур на чувствительность к О-бактериофагу

Две капли 4- или 18-часовой бульонной культуры испытуемого штамма (можно использовать взвесь суточной агаровой культуры на физиологическом растворе) наносят тонко оттянутой пастеровской пипеткой или петлей диаметром 0,4-0,5 мм на хорошо подсушенный слабощелочной питательный агар (рН = 7,2-7,4) в чашке Петри. После подсыхания на одну из капель петлей или пастеровской пипеткой меньшего диаметра наносят О-бактериофаг, а на другую в качестве контроля - каплю бульона.

Фаг наносят неразведенный или в разведении 1:5 (в зависимости от указания на этикетке). На одной чашке, таким образом, можно испытать одновременно 8-10 культур. Чашки с нанесенными культурами и О-бактериофагом помещают на 18-20 часов в термостат при температуре 37°, после чего учитывают результаты. Положительный результат реакции при появлении на месте нанесения фага четко очерченной зоны сливного лизиса оценивают на +++, ++, +.

При отсутствии лизиса в местах нанесения фага будет сплошной рост культуры, как и в контроле.

О-фаг может быть также использован для предварительного испытания культуры. Для этого подозрительные колонии, выросшие на чашке с дифференциальной средой (Плоскирева, Эндо, висмут-сульфитным агаром и др.), снимают и пересевают на один из секторов чашки Петри со слабощелочным агаром. В центр каждого засеянного сектора тонкой пастеровской пипеткой или петлей наносят каплю О-фага, чашки помещают в термостат и на следующий день производят учет результатов. На одной чашке одновременно может быть испытано 5-6 колоний.

Культура, лизировавшаяся фагом, является подозрительной на сальмонеллезную и может быть прямо с чашки испытана в реакции агглютинации со смесью сальмонеллезных сывороток. В случае положительного результата реакции агглютинации культуру засевают на скошенный агар и на пестрый ряд для изучения биохимических свойств и антигенной структуры (с помощью сальмонеллезных монорецепторных сывороток), без чего не представляется возможным дать окончательный ответ о принадлежности культуры к определенному серологическому типу рода салмонелла. Культуры, нечувствительные к О-бактериофагу, подлежат также дальнейшему изучению (биохимическому и серологическому). Большую помощь О-фаг может оказать при изучении атипичных, трудно диагностируемых культур. Атипичные сальмонеллезные культуры в большинстве случаев чувствительны к О-фагу, в то время как культуры, лишь сходные с сальмонеллезными по биохимическим свойствам (например, лактозонегативные Е. coli), как правило, не лизируются этим фагом.

Сальмонеллезный О-бактериофаг в качестве экспериментального препарата готовится в отделе эпидемиологии кишечных инфекций Центрального научно-исследовательского института эпидемиологии Министерства здравоохранения СССР.