Приложение Б. Предупреждающие и контрольные процедуры для обеспечения достоверности микробиологического анализа

Приложение Б

Предупреждающие и контрольные процедуры для обеспечения достоверности микробиологического анализа

Б.1. Контроль режимов суховоздушной стерилизации

Стерилизацию посуды проводят в шкафах для суховоздушной стерилизации типа ССШ-80. Контрольные термометры, предусмотренные конструкцией шкафа, регулярно поверяются.

Контроль режима стерилизации проводит сотрудник, подготавливающий посуду и материалы для анализа.

Контроль осуществляют по всему объему камеры с помощью индикаторов стерилизации типа ИС 180, предназначенных для одновременного контроля температуры и времени стерилизации мин. Количество контрольных точек для ССШ-80 - пять.

Контроль проводят при каждом рабочем цикле.

Для контроля в пяти точках суховоздушного стерилизатора укладывают индикаторную полоску длиной 2-3 см, которую закрепляют к стерилизуемому пакету или упаковке. За зонами контроля закрепляют N 1 - в центре камеры, NN 2 и 3 справа и слева в нижней части камеры у задней стенки, NN 4 и 5 справа и слева в нижней части камеры у двери. Контрольные тесты помещают на расстоянии не менее 5 см от стенок стерилизационной камеры.

По окончании цикла стерилизации индикаторы стерилизации извлекают из контрольных точек и сравнивают с эталоном. Цвет индикатора светлее эталона в какой-либо точке указывает на неэффективную стерилизацию. Результаты контроля заносят в рабочий журнал контроля работы суховоздушных стерилизаторов.

Обо всех нарушениях циклов стерилизации исполнитель информирует начальника лаборатории.

Б.2. Контроль режимов паровой стерилизации

Контроль режима стерилизации проводит оператор парового стерилизатора (автоклава), прошедший курс специальной подготовки. Осуществляется три вида контроля: термический, химический тестовый и биологический контроль.

Для химического тестового контроля используют запаянные ампулы с химическими веществами в соответствии с требованиями СП 1.2.731-99.

Для термического контроля используют максимальный термометр.

Химический тестовый контроль проводят при каждом рабочем цикле. Для этого в двух точках парового стерилизатора в верхней и в нижней части рабочей камеры укладывают ампулу, заполненную соответствующим веществом.

По окончании цикла стерилизации индикаторы стерилизации извлекают из контрольных точек. Оставшийся без изменения цвет индикаторного вещества указывает на неэффективную стерилизацию. При этом использование всей партии материалов запрещается. Материал требует повторной обработки. Автоклав, показавший неудовлетворительный результат стерилизации, подвергается проверке представителями ГП "Медтехники". Результаты контроля заносят в рабочий журнал по регистрации режимов стерилизации.

Температурный контроль проводят два раза в месяц. Для термического контроля используют максимальный термометр, с диапазоном температур не менее чем от 150 до 200°C с ценой деления не более 2°C.

Термометр укладывают в центре камеры. По окончании цикла стерилизации фиксируют температуру. Результаты заносят в рабочий журнал.

Биологический контроль проводят два раза в год. Методика проведения контроля в соответствии с паспортом набора индикаторов биологических. Обо всех нарушениях режимов стерилизации исполнитель информирует начальника лаборатории.

Б.3. Контроль режимов работы термостатов

Контроль температуры в термостатах проводят ежедневно 2 раза в день перед началом и после окончания рабочего дня по показаниям контрольных термометров.

Результаты измеренной температуры заносят в журнал.

В журнале для каждого термостата должно быть отмечено допустимое отклонение температуры с учетом требований методов, для исполнения которых использован конкретный термостат.

В случае превышения допустимых отклонений температуры сотрудник, проводящий регистрацию, должен немедленно сообщить об этом начальнику лаборатории.

Б.4. Контроль режима работы бактерицидных ламп

Контроль режима работы бактерицидных ламп проводят один раз в квартал.

Для проведения контроля приготавливают чашки Петри с газонным посевом музейной культуры E. coli.

Половину закрытой чашки Петри накрывают темной, непрозрачной бумагой или фольгой. Приготовленные чашки Петри с культурой устанавливают на поверхности рабочих столов в помещениях с бактерицидными лампами.

Лампу включают на время обычного режима кварцевания.

По окончании экспозиции контрольные чашки Петри инкубируют при температуре в термостате в течение часов.

По окончании инкубации результаты контроля заносят в журнал контроля работы бактерицидных ламп.

На защищенной от ультрафиолетового излучения половине чашки Петри должен быть газонный рост культуры E. coli. На облученной половине допускается рост единичных колоний.

Неудовлетворительный результат контроля означает выработку ресурса или нарушение в работе бактерицидной лампы. Лампа, не обеспечивающая надежного обеззараживания помещения, подлежит замене.

Б.5. Контроль воздуха на обсемененность

Контроль воздуха на обсемененность проводят в посевных комнатах и в ламинарном шкафу в день проведения посевов. Процедуру контроля проводит сотрудник, проводящий испытания в указанных помещениях.

Для испытаний используют питательный агар (ПА) проверенной серии.

Во время испытаний в двух точках посевной и в ламинарном шкафу ставят по чашке с ПА, открывая их на 15 мин. Инкубируют контрольные чашки при температуре в термостате в течение ч. Допускается рост не более 3-х колоний микроорганизмов.

Результаты заносят в журнал контроля воздуха на обсемененность.

В случаях пророста на испытуемых чашках более трех колоний немедленно ставят в известность начальника лаборатории. Работы в помещениях приостанавливают. Выясняют возможные причины загрязнения с целью предотвращения подобного в дальнейшем.

Проводят внеплановую генеральную уборку помещений и обработку всех поверхностей с использованием дезинфицирующих средств, дополнительное кварцевание.

Б.6. Контроль стерильности фильтровальных установок

Контроль стерильности фильтровальных установок проводят перед началом фильтрации проб.

Фильтрационную установку обтирают ватным тампоном, смоченным спиртом ректификатом, и фламбируют.

После сгорания спирта и остывания фильтрационной установки на один из фильтровальных столиков фламбированным пинцетом укладывают стерильный мембранный фильтр, прижимают верхней частью воронки и закрепляют прижимным устройством. Подготовленную фильтрационную воронку заполняют стерильной водой на 1/2 объема (50 мл для воронок объемом 100 мл или 250 мл для воронок объемом 500 мл) таким образом, чтобы стерильная вода обмыла внутренние стенки воронки. Воду фильтруют. Фильтр снимают стерильным пинцетом с соблюдением всех правил и предосторожностей, применяемых при фильтровании проб воды. Фильтр укладывают на чашку с простым питательным агаром. Инкубацию проводят в термостате в течение ч при температуре .

Не допускается рост микроорганизмов на контрольных фильтрах. Результаты контроля заносят в журнал. Обо всех случаях нестерильности фильтровальных установок ставят в известность начальника лаборатории.

Б.7. Контроль качества подготовки флаконов для отбора проб

Целью проведения данного вида контроля является проверка качества подготовки посуды в отношении микроорганизмов, учитываемых при проведении анализа питьевой воды (общих колиформ, мезофильных аэробных и факультативных анаэробных микроорганизмов - ОМЧ).

Для отбора проб используются стеклянные флаконы объемом 500 мл.

Отбор флаконов для испытаний проводят в количестве 1% от партии на основе случайной выборки, но не менее одного флакона от партии. До получения результатов контрольного посева партию флаконов не используют для отбора проб.

В отобранные для контрольного посева флаконы вносят 250 мл стерильной водопроводной воды на 1/2 объема флакона. После взбалтывания производят высев по 1 мл смыва на 2 чашки Петри, которые заливают расплавленным питательным агаром. 100 мл смыва заливают в подготовленную фильтровальную воронку с мембранным фильтром так, чтобы вода обмыла внутренние стенки воронки. Воду профильтровывают, фильтр снимают фламбированным пинцетом и укладывают в чашку Петри со средой Эндо. Посевы инкубируют при температуре в течение ч. Результаты считаются удовлетворительными при полном отсутствии бактериального роста на чашках и мембранных фильтрах. Результаты контроля заносятся в журнал.

В случае получения результата, свидетельствующего о нестерильности хотя бы одного флакона в партии, бракуется вся партия флаконов.

При соблюдении в лаборатории всех необходимых условий обеспечения качества проведения анализов и при стабильных результатах контрольных посевов на качество подготовки флаконов для отбора проб, фильтровальной установки и приготовленной для контроля воды допускается совмещение названных контрольных посевов и проведение контроля по сокращенной схеме.

Б.8. Контроль дезинфекционного режима в помещениях лаборатории

Бактериологический контроль комплекса санитарно-гигиенических мероприятий проводят не реже чем раз в две недели.

Материалом для исследований служат смывы с объектов (поверхности столов, стен, ручки дверей).

Смывы проводят не позже 30-40 мин после окончания дезинфекции без предварительного предупреждения персонала, проводящего обработку.

Смыв производят с площади 100 , тщательно протирая поверхность стерильным ватным тампоном на палочках, вмонтированных в пробки пробирок с 5 мл стерильной 1% пептонной водой. Тампоны, увлажненные питательной средой, после взятия смыва помещают в ту же пробирку с пептонной водой. После инкубации их при температуре 37°C в течение 18-20 ч из пробирок производят высев на чашки Петри со средой Эндо. После инкубации чашек при температуре 37°C в течение 18-20 ч производят исследование выросших колоний согласно МУК 4.2.1018-01.

Дезинфекцию считают удовлетворительной при отсутствии роста колиформных бактерий во всех пробах. В случае обнаружения общих или термотолерантных колиформных бактерий проводят дополнительные мероприятия по санитарной обработке помещения лаборатории с записью в журнале.

Б.9. Контроль температуры в холодильниках

Контроль температуры в холодильниках бактериологической группы проводят один раз в неделю, остальных - не реже чем один раз в месяц. Для контроля используют термометр, подготовленный соответствующим образом, нижнюю часть термометра опускают в пробирку с расплавленным парафином. После застывания парафина термометр можно разместить в горизонтальном положении. Термометр размещают в центре камеры холодильника на 15 мин.

Результаты измеренной температуры заносят в журнал. Температура должна соответствовать требованиям, описанным в методиках проведения анализа.

В случаях отклонений температуры от указанных значений, переводят регулятор температур холодильника с целью компенсации отклонений. Об отклонениях сообщают начальнику лаборатории. После приведения температуры в холодильнике до уровней допустимых значений, двукратно, через 4 часа и на следующий день проводят регистрацию температуры. После приведения к норме режима работы холодильника переходят к обычной схеме контроля температуры.

Б.10. Контроль качества питательных сред

Контроль качества ПС должен включать проверку документации и визуальный контроль ПС при их получении, контроль условий и сроков хранения ПС, их приготовления и контроль ПС по биологическим показателям. Количественный контроль включает определение и оценку ряда показателей в зависимости от типа ПС, в т.ч. процент всхожести, скорость роста, показатель дифференцирующих свойств среды.

1. Все обезвоженные коммерческие питательные среды и препараты отечественного производства должны иметь сертификат соответствия, паспорт и инструкцию по применению. Питательные среды и биологические препараты зарубежного производства должны иметь международный сертификат качества ISO 9000 или EN 29000 и гигиенический сертификат (заключение) Госсанэпиднадзора России.

При получении сред и реагентов необходимо проверить наличие сопроводительной документации (сертификата соответствия, паспорта, инструкции по применению, этикеток на упаковке), маркировку номера серии, маркировку номера протокола контроля качества, срок годности и дату изготовления, состав среды, условия хранения, наличие указаний по приготовлению и условиям стерилизации.

2. Если не указаны особые условия хранения питательных сред и реактивов, их помещают в сухое, защищенное от света место, с температурой воздуха 10-30°C. Материалы, требующие пониженной температуры хранения, необходимо поместить в холодильник с соответствующей степенью охлаждения.

3. Перед началом приготовления питательной среды необходимо проверить соответствие цвета и консистенции сухого препарата и реагентов описанию изготовителя.

4. Для приготовления питательных сред необходимо использовать посуду, приборы, расходные материалы и разбавители, соответствующие требованиям методик.

Б.11. Процедура ведения референс-культур микроорганизмов

Стандартная культура Escherichia coli используется при выполнении анализа по показателю коли-фаги.

Контрольные испытания с тест-культурами проводятся при проведении оксидазного теста при анализе по показателю общие колиформы. Испытания проводятся с каждой новой партией реактивов, а также периодически в процессе хранения реактивов или готовой бумажной системы. Для контрольных тестов рекомендованы Pseudomonas aeruginosa или Pseudomonas fluorescens как модель положительной реакции и Escherichia coli как модель отрицательной реакции.

Референс-культуры должны быть получены из аттестованного (аккредитованного) государственного специализированного учреждения и иметь паспорт, содержащий сведения об основных культуральных и генетических свойствах культуры, а также рекомендации по ведению культуры. Рекомендуется обновлять музейные культуры не реже одного раза в год. После получения культура регистрируется в инвентарной книге и в дальнейшем учитывается по установленной форме. Все журналы должны быть пронумерованы, прошнурованы, скреплены печатью. Журналы хранятся у лица, ответственного за культуры. Ответственным за правильное ведение набора типовых культур назначается приказом по предприятию квалифицированный специалист.

Б.12. Контроль эффективности мембранных фильтров

Контроль эффективности каждого типа мембранных фильтров осуществляют путем сравнения числа колоний микроорганизмов, выросших на полноценной питательной среде в результате прямого поверхностного посева суспензии культуры контрольного микроорганизма, и числа колоний, выросших на этой же среде в результате посева способом мембранной фильтрации.