Инструкция по определению рибофлавина (витамина В2) в пищевых продуктах (утв. Главным санитарно-эпидемиологическим управлением Минздрава СССР 10 июля 1987 г. N 4398-87)

Для определения общего содержания рибофлавина в пищевых продуктах используют флюорометрический метод, разработанный в двух вариантах (прямой флюорометрии и люмифлавиновый). Он прошел широкую апробацию в различных лабораториях научных и практических учреждений, принимавших участие в подготовке справочных "Таблиц химического состава продуктов", рекомендован Междуведомственной комиссией по составлению этих таблиц и одобрен Минздравом СССР.

Принцип метода

Метод основан на свойстве свободного рибофлавина и продукта его фотолиза - люмифлавина - флюоресцировать при облучении их растворов светом с длиной волны 440-450 нм. В варианте прямой флюорометрии интенсивность флюоресценции измеряется до, и после восстановления рибофлавина гидросернистокислым натрием. В люмифлавиновом варианте используется свойство рибофлавина при облучении в щелочной среде переходить в люмифлавин, интенсивность флюоресценции которого измеряют после извлечения его хлороформом.

Оборудование

Флюориметр ЭФ-ЗМ или ФМ-Ц-2; потенциометр; термостат водяной на 37°С; весы лабораторные общего назначения с наибольшим пределом взвешивания 200 г, поверочной ценой деления не более 0,5 мг; весы лабораторные общего назначения с наибольшим пределом взвешивания 500 г, поверочной ценой деления не более 50 мг; водяная баня.

Для люмифлавинового варианта дополнительно нужны две настольные лампы по 100 ватт (желательно с отражателями, направляющими свет на облучаемые колбы), настольный вентилятор.

Посуда

толуола и сохраняют в темноте и на холоду не более 2-х месяцев. В день проведения анализа 5 этого раствора, нагретого в темноте до комнатной температуры, помещают в мерную колбу вместимостью 100 и доводят объем до метки водой, перемешивают (рабочий раствор с массовой концентрацией рибофлавина 1 ).

ГАРАНТ:

Текст документа приводится в соответствии с источником

Нумерация пунктов приводится в соответствии с источником

2. Раствор соляной кислоты 0,1 н.

3. Насыщенный раствор натрия уксуснокислого.

4. Раствор калия марганцевокислого 3%.

5. Раствор перекиси водорода 3%, готовят свежий еженедельно.

6. Раствор гидроокиси натрия 7н.

Ход определения

Интервал определения концентраций рибофлавина составляет при прямой флюорометрии 0,5 - 2 при использовании люмифлавинового варианта - 0,03 - 0,20 . Величину навески продукта и последующие разведения рассчитывают исходя из интервала указанных концентраций.

Навеску мелкоизмельченной средней пробы продукта помещают в коническую колбу вместимостью 250 , приливают около 150 0,1 н раствора соляной кислоты и кипятят на водяной бане 40 минут. Затем охлаждают до комнатной температуры, доводят рН гидролизата до 4,5 (потенциометрически) с помощью насыщенного раствора уксуснокислого натрия, добавляют 100 мг амилоризина, 0,5 толуола и помещают в термостат на 14 - 16 часов при 37°С. На следующий день гидролизат охлаждают, доводят объем в мерном цилиндре до 250 дистиллированной водой и фильтруют. Если исследуемый объект содержит много жира, то навеску перед гидролизом обрабатывают серным эфиром; возможно, также обработать эфиром уже готовый гидролизат.

При анализе объектов, содержащих много пектиновых веществ (яблоки, крыжовник, смородина, тыква, кабачки и продукты их переработки) вместо амилоризина используют пектавамарин. При необходимости прервать анализ на 1-2 дня перед доведением объема до 250 гидролизат кипятят

еще раз, не допуская помутнения растворов за счет выделения свободной серы.

ГАРАНТ:

Текст документа приводится в соответствии с источником

Для расчетов используют средние показания двух параллельных пробирок до и после добавления гидросернистокислого натрия. В последнем случае берут наименьшее значение флюоресценции, полученные при повтором восстановлении рибофлавина гидросернистокислым натрием. Содержание рибофлавина в исследуемом образце в мг на 100 г (X) вычисляют по следующей формуле:

, где

А - интенсивность флюоресценции исследуемого образца без добавления стандартного раствора рибофлавина; - то же после восстановления рибофлавина гидросернистокислым натрием; В - интенсивность флюоресценции исследуемого образца с добавлением стандартного раствора рибофлавина; - то же после восстановления рибофлавина гидросернистокислым натрием; С - интенсивность флюоресценции контрольного опыта; - то же после добавления гидросернистокислого натрия; V - объем гидролизата (); - количество гидролизата, взятого для окисления пермангонатом калия (); n - количество добавленного рибофлавина (мкг); а - навеска образца (г); 10 - коэффициент пересчета из мкг/г в мг/100 г продукта.

Люмифлавиновый вариант

К 100 мл фильтрата добавляют 2 30% раствора серной кислоты из пипетки 3% по каплям, постоянно перемешивая, до получения малинового окрашивания. Через одну минуту избыток перманганата калия удаляют добавлением по каплям 3% раствора перекиси водорода. Количество израсходованных перманганата калия и перекиси водорода приплюсовывают к первоначально

светофильтры, которые указаны в варианте прямой флюорометрии.

ГАРАНТ:

Текст документа приводится в соответствии с источником

Содержание рибофлавина (мг на 100 г продукта) вычисляют по формуле:

, где

А - среднее из показаний флюориметра для испытуемого образца без добавления стандартного раствора рибофлавина; - то же для контрольного опыта на реактивы; - среднее из показаний флюориметра для исследуемого образца с добавлением стандартного раствора рибофлавина; К - количество добавленного рибофлавина (мкг); V - общий объем гидролизата (); - объем гидролизата после окисления (); - объем гидролизата, взятый на окисление (); - объем гидролизата, взятый на облучение (); а - навеска продукта (г); 10 - коэффициент пересчета из мкг/г в мг/100 г продукта.

Вычисления проводят до второго знака после запятой. Расхождение между двумя параллельными определениями не должно превышать 10% от среднего арифметического значения.

Зам. начальника Главного Санитарно-эпидемиологического Управления Минздрава СССР

А.И. Заиченко