Приложение Б (обязательное). Подготовка хроматографической колонки к работе

Приложение Б
(обязательное)

Подготовка хроматографической колонки к работе

Б.1 Заполнение колонки

В хроматографическую колонку (рисунок 1) помещают небольшой комочек чистой стекловаты или распушенной стеклоткани. Колонку дважды промывают хлороформом (по 3-4 ) и затем заполняют хлороформом на высоту 8-10 . Силикагель, подготовленный в соответствии с приложением А, размешивают в небольшом количестве хлороформа и заливают в колонку. Избыток хлороформа сливают через кран, затем вновь добавляют взмученный в хлороформе силикагель, пока слой силикагеля в колонке не достигнет высоты 17-18 . Необходимо следить, чтобы не образовывались воздушные пузырьки в слое силикагеля и он постоянно был покрыт хлороформом. После окончания заполнения колонки сливают избыток хлороформа до уровня примерно на 1-2 мм выше уровня силикагеля. В таком виде колонка готова к работе.

Колонка заполняется каждый раз свежей порцией силикагеля. Для ее заполнения требуется около 1 г сухого силикагеля.

Б.2 Проверка качества работы колонки и определение объёма элюата, отбираемого для анализа

Параметры полученной колонки могут несколько колебаться для каждой колонки и каждой партии силикагеля. Для их определения следует построить кривую элюирования. В подготовленную согласно Б.1 колонку помещают 3-4 хлороформного градуировочного раствора с массовой концентрацией неионогенных СПАВ 10 и пропускают раствор через колонку со скоростью 0,5-1 . Промывают колонку ещё 0,5-1 хлороформа, после чего в колонку заливают элюент. Добавление всех растворов следует проводить осторожно, так, чтобы не взмучивать силикагель. Элюент пропускают через колонку со скоростью 0,5-1 и отбирают фракции по 1 в центрифужные пробирки. Всего отбирают 10 фракций.

Объём раствора в каждой пробирке доводят до 5 хлороформом и далее выполняют определение неионогенных СПАВ, как описано в разделе "Выполнение измерений". Вид кривой элюирования представлен на рисунке Б.1. В колонке хорошего качества неионогенные СПАВ элюируются в виде достаточно узкого пика (максимум в 4-х фракциях). На рисунке показан объём элюата ( ), который должен быть отброшен (применительно к данной колонке и силикагелю) и объём, который отбирается для анализа ( ). Проверка качества работы колонки проводится один раз для данной колонки и данной партии силикагеля.