Приложение 2. Методика приготовления питательных сред для культивирования тест-микроорганизмов, предназначенных для изучения и оценки спороцидной активности ДС, СС и их субстанций

Приложение 2

Методика
приготовления питательных сред для культивирования тест-микроорганизмов, предназначенных для изучения и оценки спороцидной активности ДС, СС и их субстанций

1. Агар Хоттингера

     Мясной перевар по Хоттингеру (аминный азот

     от 140 до 160 мг %) ............................... 1 000 мл

     Натрий хлористый .................................. 5,0 г

     Агар .............................................. 20,0 г

     рН ................................................ 7,3 +- 0,1

Мясной перевар по Хоттингеру разводят дистиллированной водой до содержания аминного азота от 140 до 160 мг %, добавляют хлористый натрий и агар, кипятят на слабом огне при постоянном помешивании до полного расплавления агара. Фильтруют и стерилизуют при температуре 120°С в течение 30 мин.

2. Пшеничный агар

     Пшеничная крупа "Артек" (или "Полтавская") ........ 500,0 г

     Агар .............................................. 25,0 г

     Дистиллированная вода ............................. 1 000 мл

     рН ................................................ 7,3 +- 0,1

Пшеничную крупу "Артек" (или "Полтавская") заливают дистиллированной водой. Через 18-24 ч настой аккуратно сливают, не выжимая, доводят до первоначального объема, добавляют агар и растапливают на водяной бане или в автоклаве (текучим паром 1 ч). Оставляют в теплом месте до осаждения осадка на 12 ч. Остывший агар выкладывают на противень и срезают осадок. Агар растапливают на водяной бане, постоянно помешивая. Устанавливают рН 7,3 0,1, Разливают в бутылки, пробирки, матрацы (в зависимости от решаемых задач и целей). Стерилизуют текучим паром в аппарате Коха по 1 ч в течение 3 сут.

3. Картофельно-пептонный агар

     Пептон ............................................ 5,0 г

     Мел ............................................... 1,0 г

     Агар .............................................. 25,0 г

     Картофельная вода ................................. 1 000 мл

     рН ................................................ 7,1 +- 0,1

Сырой картофель (из расчета 200 г очищенного картофеля на 1 л водопроводной воды) тщательно моют, очищают от кожуры и глазков, нарезают мелкими ломтиками, заливают водопроводной водой и кипятят 30 мин после закипания (молодой картофель употреблять нельзя). Отвар отстаивают и фильтруют в холодном состоянии через ватно-марлевый фильтр. Доводят объем фильтрата до первоначального. Устанавливают рН 7,1 0,1. Добавляют пептон и агар. Нагревают, помешивая, до полного расплавления агара, фильтруют через ватно-марлевый фильтр, после чего добавляют мел. Разливают по флаконам, стерилизуют при 120°С в течение 30 мин. После стерилизации среду во флаконах скашивают.

4. Мясопептонный агар

Методика приготовления изложена в "Справочнике по микробиологическим и вирусологическим методам исследования" (под ред. М.О. Биргера. М.: Медицина, 1982).

5. Питательный агар для культивирования микроорганизмов сухой, НПО "Питательные среды", г. Махачкала (СПБ)

Питательный агар для культивирования микроорганизмов готовят согласно прописи на этикетке.

6. Бульон Хоттингера

     Мясной перевар по Хоттингеру (аминный азот

     от 140 до 160) мг % ............................... 1 000 мл

     Натрий хлористый .................................. 5,0 г

     Глюкоза ........................................... 5,0 г

     рН ................................................ 7,3 +- 0,1

Мясной перевар по Хоттингеру разводят дистиллированной водой до содержания аминного азота от 140 до 160 мг %, добавляют хлористый натрий. Кипятят на слабом огне с закрытой крышкой 10 мин до полного растворения соли. Если есть выкипание, доводят объем до первоначального дистиллированной водой. Устанавливают рН 7,3 0,1, кипятят повторно. Фильтруют, прибавляют глюкозу. Разливают в стерильную посуду. Стерилизуют при 110°С в течение 30 мин.

7. Мясопептонный бульон

Методика приготовления изложена в "Справочнике по микробиологическим и вирусологическим методам исследования" (под ред. М.О. Биргера. М,: Медицина, 1982). Для приготовления бульона с глюкозой добавить 0,5% глюкозы.

8. Питательный бульон для культивирования микроорганизмов сухой, НПО "Питательные среды", г. Махачкала (СПА)

Питательный бульон для культивирования микроорганизмов готовят согласно прописи на этикетке. Для приготовления бульона добавить глюкозу (0,5%).

9. Цветная питательная среда с индикатором бромкрезоловым пурпуровым

     Питательный бульон                                  Готовят согласно

     для культивирования                                 прописи

     микроорганизмов, сухой ............................ на этикетке

     Глюкоза ........................................... 5 г

     Бромкрезоловый пурпуровый спиртовой 1% ............ 2 мл

     Дистиллированная вода ............................. До 1 000 мл

     рН ................................................ 7,3 +- 0,1

В питательный бульон для культивирования микроорганизмов сухой, приготовленный согласно прописи на этикетке, добавляют 5 г глюкозы, перемешивают до полного растворения последней, фильтруют через ватно-марлевый фильтр и добавляют 2 мл 1%-го спиртового раствора индикатора бромкрезолового пурпурового.

Устанавливают рН (7,3 0,1) и разливают в стерильную посуду. Стерилизуют при температуре 110°С в течение 30 мин.

10. Цветная питательная среда с индикатором бромтимоловым синим

     Питательный бульон                                  Готовят согласно

     для культивирования                                 прописи

     микроорганизмов, сухой ............................ на этикетке

     Глюкоза ........................................... 5 г

     Бромтимоловый синий спиртовой 1% .................. 2 мл

     Дистиллированная вода ............................. До 1 000 мл

     рН ................................................ 7,3 +- 0,1

В питательный бульон для культивирования микроорганизмов (сухой), приготовленный согласно прописи на этикетке, добавляют 5 г глюкозы, перемешивают до полного растворения последней, фильтруют через ватно-марлевый фильтр и добавляют 2 мл 1%-го спиртового раствора индикатора бромтимолового синего. Устанавливают рН (7,3 0,1) и разливают в стерильную посуду. Стерилизуют при температуре 110°С в течение 30 мин.