Приложение 2. Обязательное. Техника постановки биологической пробы

Приложение 2
Обязательное

Техника
постановки биологической пробы

Количество белых мышей, необходимых для постановки биологической пробы, при постановке защитного теста, проведении реакции нейтрализации и при типировании ботулинических токсинов с разведенными типоспецифическими сыворотками, равняется числу разведений исходной жидкости (с учетом использования при низком титре ботулинического токсина исходной жидкости без разведения), умноженному на количество типов моновалентных двух-, трех- или поливалентных сывороток, применяемых для постановки защитного теста или реакции нейтрализации и типирования ботулинических токсинов в исследуемом продукте, и умноженному на количество мышей в каждом варианте опыта - обычно на две особи.

По клеткам или банкам рассаживают белых мышей, помещая не более двадцати мышей одного пола в каждую клетку или банку. Во время постановки опытов перераспределения мышей по клеткам не допускается.

При проведении биологической пробы надевают резиновые перчатки, указательным и большим пальцами левой руки захватывают кожу мыши на затылке, а хвост и левую заднюю лапу удерживают между ладонью, четвертым и пятым пальцами. При этом мышь держат головой вниз так, чтобы кишечник сместился книзу от места укола. Место укола обрабатывают спиртом. Правой рукой вводят иглу шприца в горизонтальном направлении между кожей и мышцами с левой стороны в задней трети живота, затем иглу слегка поворачивают в вертикальном направлении и осторожным движением продвигают вперед. Момент проникновения иглы в брюшную полость ощущают по исчезающему под рукой сопротивлению. После проникновения иглы в брюшную полость большим пальцем правой руки медленно нажимают поршень шприца и, следя за градуировкой на цилиндре, вводят определенное количество жидкости в брюшную полость. Затем иглу вынимают, животное метят и помещают в клетку для наблюдения.

Допускается ставить биологическую пробу на белых мышах с помощником, который фиксирует животных.

Мышей метят путем окрашивания их шерсти по определенной схеме раствором карболового фуксина, бриллиантового зеленого, раствором пикриновой кислоты либо фломастерами.

Одним цветом, основным (желательно красным) метят мышей с 1 по 9 номер.

Двумя цветами - красным и дополнительным - желтым или зеленым - метят мышей с двузначными номерами: с 10 до 99 включительно, причем десятки обозначают дополнительным цветом, а единицы - основным.

В зависимости от места окраски, пятна краски (желательно фуксина) соответствуют следующим условным номерам:

на левой передней лапе - 1, на левом боку - 2, на левой задней лапе - 3, на голове - 4, на спине - 5, у основания хвоста - 6, на правой передней лапе - 7, на правом боку - 8, на правой задней лапе - 9.

При комбинированной окраске двумя цветами разных мест получают любое двузначное число.