Приложение Р (обязательное). Предел обнаружения и предел количественного определения числа микроорганизмов

Приложение Р
(обязательное)

Предел обнаружения и предел количественного определения числа микроорганизмов

P.1 Предел обнаружения

Обычно при наличии неопределенности метода, связанной, например, с используемым образцом, наблюдение только одной колониеобразующей единицы (КОЕ) на среде не достаточно для предположения о присутствии аналита. На таком низком уровне для качественных методов необходим дихотомический подход к событию, т.е. выявление присутствия (1 и более КОЕ) и отсутствия (нет КОЕ). Таким образом, процесс подчиняется закону Пуассона (низкие или высокие значения) или биномиальному закону (промежуточные значения) с частотой присутствия np.

Учитывая, что теоретический отрицательный контрольный образец не дает результата о присутствии аналита, предел обнаружения для низкой контаминации (пуассоновский) достигается минимум по np присутствиям, соответствующим порогам принятия решения LC = 3 (при 1 - = 95%) или 5 (при 99%). Пределы обнаружения также получают, включая статистическую ошибку 2-го типа , например LOD = 7 при односторонней = 5% и 1 - > 90%.

Пуассоновский закон дает минимальное число np положительных результатов из n (пропорционально p) для достижения значимо положительного утверждения на уровне доверительной вероятности 1 - (см. таблицу P.1).

Таблица Р. 1 - Минимальное число np положительных результатов из n

n	np, если	np, если
1	1	1
2	2	2
3	2	3
4	3	3
От 5 до 15	3	4
16 и больше	3	5

Однако не исчезает другой тип ошибки: недостаточная статистическая мощность, если размер выборки n слишком мал. Например, отсутствие положительных при n = 2 образцах означает, что вероятность контаминации меньше 78% (с 95% доверительной вероятности). Один положительный из двух соответствует вероятности контаминации 2,5% или более с той же доверительной вероятностью. Можно видеть, что для достижения значимо положительного утверждения при уровнях доверительной вероятности 95% или 99% минимальная вероятность р контаминации уменьшается с увеличением n: р 3/n и соответственно 5/n (точнее 2,996/n и 4,605/n). Из этого в основном следует, что если нужно получить вероятность контаминации р =10% (при 95%), то необходимо взять более 30 образцов. (n 3/р). Минимальный уровень р, таким образом, является показательным.

Р.2 Предел определения

Применение правила Ассоциации АОАС к общему числу микроорганизмов позволяет получить значение LOG 100. В данном стандарте априори используется Пуассоновское распределение со значениями и , что дает .

Р.3 Объем образца

До сих пор объем образца не учитывался. При разделении образца на множество подобразцов и использовании всех их для определения наличия контаминации необходимо обнаружение по меньшей мере трех (или пяти) КОЕ во всем образце. Следовательно, вышеуказанные пределы можно представить в виде числа КОЕ для данного подобразца. Повторять выбор образца, пока не получатся по меньшей мере три колонии для определения окончательной оценки объема.

В общем, полученный минимальный объем нужен для микробиологического определения; его также можно получить путем разбавления. Таким образом, теоретический предел L КОЕ на среде при разбавлении, в конце концов, корректируется умножением на коэффициент разбавления k, т.е. получается kL. Например, L = 7 КОЕ/мг во взвеси с разбавлением 1 к 10 твердого образца соответствовал бы пределу L = 70 КОЕ/мг в твердом образце.