Межгосударственный стандарт ГОСТ ISO/TS 15495/IDF/RM 230-2012 "Молоко, молочные продукты и питание для детей раннего возраста. Руководящие указания для количественного определения меламина и циануровой кислоты методом жидкостной хроматографии - тандемной масс-спектрометрии (LC-MS/MS)" (введен в действие приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 29 ноября 2012 г. N 1670-ст)

Milk, milk products and infant formulae. Guidelines for the quantitative determination of melamine and cyanuric acid by LC-MS/MS

Дата введения - 1 января 2014 г.

Введен впервые

Предисловие

Цели, основные принципы и основной порядок проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0-92 "Межгосударственная система стандартизации. Основные положения" и ГОСТ 1.2-2009 "Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, применения, обновления и отмены"

Сведения о стандарте

1 Подготовлен Секретариатом ТК 470/МТК 532 "Молоко и продукты переработки молока" и ООО НТК "Молочная Индустрия"

2 Внесен Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии

3 Принят Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 15 ноября 2012 г. N 42-2012)

За принятие проголосовали:

Краткое наименование страны по МК (ИСО 3166) 004-97	Код страны по МК (ИСО 3166) 004-97	Сокращенное наименование национального органа по стандартизации
Казахстан	KZ	Госстандарт Республики Казахстан
Киргизия	KG	Кыргызстандарт
Россия	RU	Росстандарт
Таджикистан	TJ	Таджикстандарт
Узбекистан	UZ	Узстандарт

4 Настоящий стандарт идентичен международному документу (ISO/TC 15495/IDF/RM 230 Milk, milk products and infant formulae - Guidelines for the quantitative determination of melamine and cyanuric acid by LC-MS/MS [Молоко, молочные продукты и питание для детей раннего возраста. Руководящие указания для количественного определения меламина и циануровой кислоты методом жидкостной хроматографии - тандемной масс-спектрометрии (LC-MS|MS)].

Международный документ разработан подкомитетом SC 5 "Молоко и молочные продукты" технического комитета по стандартизации ISO/TC 34 "Пищевые продукты" Международной организации по стандартизации (ISO) и Международной федерацией по молочному животноводству (IDF).

Перевод с английского языка (en).

Официальные экземпляры международного документа, на основе которого подготовлен настоящий межгосударственный стандарт, и международных стандартов, на которые даны ссылки, имеются в национальных (государственных) органах по стандартизации указанных выше государств.

Сведения о соответствии ссылочных межгосударственных стандартов международным стандартам приведены в приложении ДА.

Степень соответствия - идентичная (IDT)

5 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 29 ноября 2012 г. N 1670-ст межгосударственный стандарт ГОСТ ISO/TS 15495/IDF/RM 230-2012 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 января 2014 года

6 Введен впервые

Введение

Международная организация по стандартизации ИСО (ISO) является всемирной федерацией национальных организаций по стандартизации (комитетов-членов ISO). Разработка международных стандартов обычно осуществляется техническими комитетами ISO. Каждый комитет-член, заинтересованный в деятельности, для которой был создан технический комитет, имеет право быть представленным в этом комитете. Международные правительственные и неправительственные организации, имеющие связи с ISO, также принимают участие в работах. ISO тесно сотрудничает с Международной электротехнической комиссией (IEC) по всем вопросам стандартизации в области электротехники.

Международные стандарты разрабатываются в соответствии с правилами, приведенными в Директивах ISO/IEC, часть 2.

Основная задача технических комитетов состоит в разработке международных стандартов. Проекты международных стандартов, принятые техническими комитетами, рассылаются комитетам-членам на голосование. Для опубликования их в качестве международного стандарта требуется одобрение не менее 75% комитетов-членов, принимающих участие в голосовании.

При других обстоятельствах, особенно при наличии настоятельных требований рынка, технический комитет может решить опубликовать другие типы нормативных документов:

- общедоступные технические условия ISO (ISO/PAS), представляющие собой соглашение между техническими экспертами рабочей группы ISO и публикуемые при условии получения одобрения более чем 50% голосов членов головного технического комитета, принимавших участие в голосовании;

- технические условия ISO (ISO/TS), представляющие собой соглашение между членами технического комитета и публикуемые при условии утверждения 2/3 голосов членов комитета, принимавших участие в голосовании.

Документы ISO/PAS или ISO/TS пересматриваются через три года с целью принятия решения либо о продлении их действия на следующие три года, либо о пересмотре и публикации в качестве международного стандарта, либо прекращении действия. Если принимается решение о продлении действия ISO/PAS и ISO/TS, они должны быть пересмотрены через следующие три года, когда они должны быть либо преобразованы в международный стандарт, либо отменены.

Следует учитывать возможность того, что некоторые элементы международного стандарта могут быть предметом патентного права. ISO не несет ответственности за идентификацию любого из таких патентных прав.

Международный документ ISO/TS 15495 l lDF/RM 230 был подготовлен Техническим комитетом ISO/TC 34 "Пищевые продукты" подкомитетом SC 5 "Молоко и молочные продукты" и Международной федерацией по молочному животноводству (IDF). Международный документ публикуется совместно с ISO и IDF.

IDF (Международной федерацией по молочному животноводству ММФ (IDF) является некоммерческой организацией, представляющей всемирное молочное производство. Членами IDF являются Национальные комитеты каждой страны-члена, а также региональные ассоциации по молочному животноводству, которые имеют подписанное официальное соглашение о совместной деятельности с IDF. Каждый член IDF имеет право быть представленным в постоянных комитетах IDF, осуществляющих техническую работу. IDF сотрудничает с ISO по вопросам разработки стандартных методов анализа и отбора проб молока и молочных продуктов.

Основная задача постоянных комитетов состоит в подготовке международных стандартов. Проекты международных стандартов, принятые Постоянными комитетами, рассылаются Национальным комитетам для утверждения до опубликования в качестве международных стандартов. Их опубликование в качестве международных стандартов требует одобрения не менее 50% национальных комитетов IDF, принимающих участие в голосовании.

Следует иметь в виду, что некоторые элементы международных стандартов могут быть объектом патентных прав. IDF не должен нести ответственность за идентификацию какого-либо одного или всех патентных прав.

ISO/TS 15495/IDF/RM 230 был подготовлен Международной молочной федерации IDF (ММФ) и Техническим комитетом ISO/TC 34 "Пищевые продукты" подкомитетом SC 5 "Молоко и молочные продукты". Опубликован совместно IDF и ISO.

Вся работа по разработке международного документа была выполнена совместной рабочей группой по Определению меламина постоянного комитета по Методам анализа добавок и примесей под руководством лидеров проекта, д-ра С.Е. Холройда (S.E. Holroyd) (Новая Зеландия) и д-ра Т. Делатуа (Т. Delatour) (Швейцария).

1 Область применения

Настоящий стандарт устанавливает руководящие указания для количественного определения меламина и циануровой кислоты в молоке, сухих молочных продуктах и питании для детей раннего возраста методом жидкостной хроматографии с ионизацией электрораспылением - тандемной масс-спектрометрии (LC-MS/MS).

Примечание - Примеры методов LC-MS/MS приведены в приложениях А и В.

2 Нормативные ссылки

Следующие ссылочные документы обязательны для применения данного документа. Для датированных ссылок применяется только указанное издание. Для недатированных ссылок применяется самое последнее издание указанного документа (включая все изменения).

ISO 3534 (all parts) Statistics - Vocabulary and symbols (Статистика. Словарь и обозначения)

ISO 5725-1 Accuracy (trueness and precision) of measurement methods and results - Part 1: General principles and definitions (Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерения. Часть 1. Общие принципы и определения)

3 Термины и определения

В настоящем стандарте применены термины по ISO 3534, ISO 5725-1, а также следующие термины с соответствующими определениями.

3.1 содержание меламина (melamine content): Массовая доля вещества, определенная с помощью методов, установленных в настоящем стандарте.

Примечание - Содержание меламина выражают в миллиграммах на килограмм продукта.

3.2 содержание циануровой кислоты (cyanuric acid content): Массовая доля вещества, определенная с помощью методов, установленных в настоящем стандарте

Примечание - Содержание циануровой кислоты выражают в миллиграммах на килограмм продукта.

3.3 максимальный предел (maximum limit, ML): Максимальное содержание меламина или циануровой кислоты, допускаемое или приемлемое в молоке, продукции из сухого молока или молочных смесей для детей раннего возраста.

Примечание - ML может быть пределом, установленным на национальном, международном уровнях или на определенном уровне решения таких проблем.

4 Сущность метода

Пробу приводят в гомогенное состояние или разбавляют в случае порошкообразных проб. К пробе для анализа добавляют подходящий растворитель, чтобы осадить белки из матрицы и экстрагировать меламин и циануровую кислоту. После центрифугирования аликвотное количество надосадочной жидкости анализируют методом LC-MS/MS.

Применительно к настоящему стандарту LC-MS/MS обозначает любой метод, соединяющий высокоэффективную жидкостную хроматографию (HPLC) или сверхпроизводительную жидкостную хроматографию (UPLC), либо с обнаружением на спектрометре с тремя квадрупольными линзами, либо с обнаружением на масс-спектрометре с ионной ловушкой. Хроматографическое разделение основано на жидкостной хроматографии с гидрофильном взаимодействием (HILIC), чтобы обеспечить хорошее разделение меламина и циануровой кислоты. Ионизация вещества сопровождается ионизацией электрораспылением (ESI), а детекторы функционируют в выбранном режиме мониторинга реакции (SRM).

Примечание - Можно использовать другие достаточно эффективные методы ионизации. Также можно использовать другие анализаторы массы, постольку поскольку они согласуются с критериями эффективности (идентификационные точки) по [1].

Количественное определение меламина и циануровой кислоты основано на разбавлении с использованием внутренних стандартов стабильного изотопа для обоих определяемых веществ (аналитов).

5 Отбор проб

Отбор проб не является частью метода, установленного в настоящем стандарте. Рекомендуемый метод отбора проб приведен в ISO 707/IDF 50 [2]. Важно, чтобы лаборатория получила действительно репрезентативную пробу, без повреждений и изменений в результате транспортирования или хранения.

6 Подготовка пробы для анализа

Масса пробы для анализа или дополнительного разбавления должна быть представительной для исследуемого продукта и позволять эффективную экстракцию определяемых веществ (аналитов).

Стандарты с мечеными изотопами следует вводить непосредственно в сухую или влажную пробу на первом этапе анализа.

Концентрация добавленных внутренних стандартов должна быть величиной такого же порядка, как концентрация меламина и циануровой кислоты. Экстракцию можно выполнить в объеме растворителя не менее 5  на грамм материала пробы, чтобы получить конечную массовую долю органического растворителя в экстракционной смеси не менее 70%. Экстракцию следует вести в течение не менее 5 мин либо при энергичном встряхивании, либо с помощью ультразвука в сочетании с перемешиванием. Затем пробу центрифугируют в определенных условиях и фильтруют через шприцевой фильтр.

Можно применять другие способы при условии соответствия критериям эффективности и соответствия валидации требованиям, установленным в настоящем стандарте.

7 Проведение анализа

7.1 Анализ LC-MS/MS. Хроматография

Выполняют разделение с помощью жидкостной хроматографии, используя колонку, предназначенную для этой цели.

Минимальное приемлемое время удерживания для меламина и циануровой кислоты должно вдвое превосходить время удерживания, соответствующее свободному объему колонки. Время удерживания в экстракте пробы должно соответствовать времени удерживания калибровочного стандарта в пределах установленного интервала времени удерживания.

Отношение времени удерживания определяемого вещества (аналита) к времени удерживания внутреннего стандарта должно соответствовать отношению времени удерживания калибровочных стандартов к времени удерживания внутреннего стандарта в пределах 2,5%.

7.2 Анализ LC-MS/MS. Масс-спектрометрия

Масс-спектрометрическое определение меламина и циануровой кислоты должно осуществляться предпочтительно посредством применения прибора LC-MS/MS с тремя квадрупольными линзами.

Количественное определение и идентификация должны достигаться в режиме SRM. При использовании прибора с тремя квадрупольными линзами для каждого соединения, должно использоваться не менее двух MRM-переходов массы для определения аналита, тогда как не менее одного перехода должно использоваться для внутреннего стандарта. Также рекомендуется, чтобы для внутреннего стандарта наблюдалось два MRM-перехода.

Наиболее подходящий переход (наиболее интенсивный) должен использоваться для количественного определения (квантификатор), а второй для подтверждения (квалификатор). Необходимо проверить отношение интенсивности квалификатора к интенсивности квантификатора (Rq/Q) и применить критерии допусков в зависимости от значения Rq/Q (таблица 1).

Таблица 1 - Коэффициент допустимого отклонения для отношения интенсивности квалификатора к интенсивности квантификатора (Rq/Q)

Rq/Q (% квантификатора)	Допуск (отн. в %)
>50	20
>20 до 50	25
>10 до 20	30
10	50

8 Критерии рабочих характеристик

8.1 Общие положения

Каждой лаборатории следует подтвердить вводимый метод, чтобы продемонстрировать соответствие поставленным целям. Для валидации рекомендуется процедура, установленная по [1]. Максимальные и минимальный пределы рабочих характеристик, взятых из этой процедуры, определены в 8.2 и 8.5.

8.2 Требуемая минимальная чувствительность

Требуемый предел квантификации (LoQ) должен быть не менее чем в 10 раз ниже максимального предела (ML), чтобы обеспечить надежный диапазон при ML.

8.3 Достоверность и воспроизведение

Следуя данному руководству, достоверность и воспроизведение обычно попадают в интервал между 95% и 105%. Для приемки аналитических методов правильность и выход должны быть в интервале между 80% и 110%.

8.4 Повторяемость

Коэффициент вариаций повторяемости обычно составляет от 3% до 6%, с пределом <15%.

8.5 Внутрилабораторная воспроизводимость

Коэффициент вариаций внутрилабораторной воспроизводимости обычно составляет от 5% до 10%, с пределом <15%.

9 Протокол испытаний

Протокол испытаний должен содержать, как минимум, следующую информацию:

a) все сведения, необходимые для полной идентификации пробы;

b) использованный метод отбора проб, если он известен;

c) использованный метод испытания со ссылкой на настоящий стандарт;

d) все детали процедур, не установленных в настоящем стандарте или считающихся необязательными, наряду с описанием всех событий, которые могли повлиять на результат(ы) испытания;

e) полученный(е) результат(ы) испытания;

f) если проверялась повторяемость (сходимость), то полученный конечный результат.

Библиография

[1] Решение Комиссии ЕС 2002/657/ЕС, 2002 Official Journal of the European Communities, L2218-36, 12 August 2002, изменяющее Директиву Совета 96/23/ЕС в отношении выполнения аналитических методов и интерпретации результатов, измененной последний раз Решением Комиссии 2005/34 от 11 января 2005 г.

[2] ISO 707/IDF 50 Milk and products - Guidance on sampling (Молоко и молочные продукты. Руководство по отбору проб)

[3] Desmarchelier A., Guillamon Cuadra М., Delatour T., Mottier P. Simultaneous quantitative determination of melamine and cyanuric acid in cow's milk and milk-based infant formula by liquid chromatography - electrospray ionization tandem mass spectrometry. J. Agric. Food Chem. 2009, 57, pp. 7186 - 7193

(Одновременное количественное определение меламина и циануровой кислоты в коровьем молоке и молочных смесях для детей раннего возраста методом жидкостной хроматографии с ионизацией распылением и тандемной масс-спектрометрии)

[4] ISO 835 Laboratory glassware - Graduated pipettes (Посуда лабораторная стеклянная. Мерные градуированные пипетки)

[5] ISO 8655-2 Piston-operated volumetric apparatus - Part 2: Piston pipettes (Устройства мерные, приводимые в действие поршнем. Часть 2. Пипетки, приводимые в действие поршней)

[6] ISO 1042 Laboratory glassware - One-mark volumetric flasks (Посуда лабораторная стеклянная. Мерные колбы с одной меткой)

[7] ISO 5725-2 Accuracy (trueness and precision) of measurement methods and results. Part 2. Basic method for the determination of repeatability and reproducibility of a standard measurement (Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 2. Основной метод определения повторяемости и воспроизводимости стандартного метода измерения)