Приложение Г (обязательное). Определение эффективности хроматографической колонки

Приложение Г
(обязательное)

Определение
эффективности хроматографической колонки

Проверку оптимальности выбранных хроматографических условий (характеристик колонки) проводят по основным характеристикам, приведенным в таблицах Г.1 - Г.3 с применением рабочего градуировочного раствора N 4.

Таблица Г.1 - Основные характеристики разделения витаминов , , PP

Витамин	Время удерживания , мин	Число теоретических тарелок N	Коэффициент емкости	Разрешение
Тиамин ()	3,60,2	5184	0,24	0,36*
Пиридоксин ()	5,70,3	472	0,97	1,95
Никотинамид (РР)	7,00,4	544	1,41	1,16
Примечание - Разрешение хроматографического пика для витамина дано по отношению к витамину С (см. рисунок В.5), который определяют по ГОСТ 31643. Для остальных витаминов - разрешение дано по ближайшему пику.

Таблица Г.2 - Основные характеристики разделения витамина

Компонент	Время удерживания , мин	Число теоретических тарелок N	Коэффициент асимметрии,
Тиамин ()	5,050,25	7226	1,1

Таблица Г.3 - Основные характеристики разделения витаминов и

Компонент	Время удерживания , мин	Число теоретических тарелок N	Коэффициент асимметрии
Пиридоксин ()	5,000,25	6471	0,99
Рибофлавин ()	24,01,2	113771	0,72

Время удерживания соответствующего компонента определяют непосредственно из хроматограмм двух параллельных измерений.

В случае обнаружения отклонения времени удерживания более чем на 5% для любого из витаминов строят новую градуировочную зависимость во всем диапазоне измерений.

Число теоретических тарелок вычисляют по формуле

,

(Г.1)

где - время удерживания пика витамина , мин;

- ширина пика витамина у основания, мин.

Колонка считается удовлетворительной при значении числа теоретических тарелок не ниже 10% от указанного в таблице.

Разрешение между двумя хроматографическими пиками вычисляют по формуле

,

(Г.2)

где - время удерживания витамина С, мин;

- время удерживания витамина , мин;

, - ширина пика витамина С и витамина у основания, мм.

Колонка считается удовлетворительной при значениях .

Коэффициент емкости вычисляют по формуле

,

(Г.3)

где - приведенное время удерживания витамина , мин;

- мертвое время удерживания витамина , мин.

Колонка считается удовлетворительной при значении коэффициента емкости, не превышающем 10% от указанного в таблице.

При невозможности достижения требуемых условий эффективности хроматографического разделения проводят определения других хроматографических колонок аналогичным образом.

Контроль эффективности хроматографического разделения проводят не реже одного раза в месяц.