Приложение Б (обязательное). Газохроматографический метод определения содержания бета-оксимасляной кислоты

Приложение Б
(обязательное)

Газохроматографический метод определения содержания бета-оксимасляной кислоты

Б.1 Сущность метода

Сущность метода заключается в экстрагировании бета-оксимасляной кислоты из подкисленного водного экстракта пробы диэтиловым эфиром, получении производных этой кислоты виде ее изопропилового эфира, разделении и количественном определении изопропиловых эфиров бета-оксимасляной кислоты с помощью газожидкостной хроматографии с использованием капиллярной колонки и внутреннего стандарта.

Примечание - Содержание бета-оксимасляной кислоты определяют для идентификации яичного сырья, использованного для производства яичных продуктов, в части использования инкубационных оплодотворенных яиц.

Б.2 Отбор проб и подготовка их к испытаниям

Отбор проб - по ГОСТ 31720.

Представительная проба жидкого или концентрированного яичного продукта должна быть массой не менее 500 г, сухого яичного продукта - не менее 150 г. Пробы до проведения испытаний хранят в плотно закрытой стеклянной посуде в холодильнике не более двух суток. Замораживание и хранение в замороженном состоянии охлажденных жидких и концентрированных яичных продуктов не допускается.

Перед проведением испытаний замороженные яичные продукты размораживают при комнатной температуре или на водяной бане при температуре не более 50°С. Охлажденные и размороженные жидкие яичные продукты перемешивают до образования однородной массы.

Сухие яичные продукты хранят в плотно закрытых пакетах или стеклянной емкости и перед проведением испытаний растирают слегка пестиком для разбивания комков и тщательно перемешивают.

Б.3 Метрологические характеристики метода

Диапазон измерения содержания бета-оксимасляной кислоты и метрологические характеристики метода при доверительной вероятности Р = 0,95 приведены в таблице Б.3.1.

Таблица Б.3.1

Диапазон измерений содержания бета-оксимасляной кислоты в пересчете на сухое вещество, (мг/кг)	Границы относительной погрешности , %	Предел повторяемости , %	Критическая разность () , %
От 6,0 до 30,0 включ. Св. 30,0	12 10	10 7	17 14

Б.4 Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы и материалы

Хроматограф газовый по ГОСТ 26703 с пламенно-ионизационным детектором с пределом детектирования не более  г/с по гептану и инжектором с делением потока;

Капиллярная хроматографическая колонка длиной 30 м, внутренним диаметром 0,32 мм и толщиной фазы 0,25 мкм или аналогичная колонка с неподвижной фазой из сшитого полиэтиленгликоля.

Микрошприц для газовой хроматографии вместимостью 1 .

Весы лабораторные с пределом допускаемой абсолютной погрешности однократного взвешивания не более 0,0002 г и 0,02 г.

Шкаф сушильный лабораторный вакуумный с насосом, обеспечивающий поддержание температуры 50°С - 60°С и остаточное давление не более 40 мм рт. ст.

"Рисунок 1 - Аппарат для непрерывной экстракции органических кислот диэтиловым эфиром"

Основные размеры деталей аппарата для непрерывной экстракции [пробирки с отводом (1) и трубки аппарата для непрерывной экстракции (2)] приведены на рисунках 2 и 3.

"Рисунок 2 - Пробирка с отводом"

"Рисунок 3 - Трубка, вставляемая в пробирку"

Термостат жидкостной, обеспечивающий поддержание температуры (601)°С.

Колбонагреватель или электроплитка по ГОСТ 14919.

Баня водяная.

Секундомер.

Воронки делительные ВД-3-50 ХС и ВД-3-250 ХС по ГОСТ 25336.

Воронки В-36-50 ХС по ГОСТ 25336.

Воронка Бюхнера 3 или 4 по ГОСТ 9147.

Бюретка I-1-1-50-0,1 по ГОСТ 29251.

Насос водоструйный по ГОСТ 25336.

Колбы мерные 2-50-1, 2-100-1, 2-200-1, 2-250-1, 1-1000-2 по ГОСТ 1770.

Пипетки градуированные 1-го класса точности вместимостью 1, 2, 5, 10  по ГОСТ 29228

Пипетки с одной отметкой 1-1-1, 1-1-2, 2-1-5, 2-1-10 и 2-1-25 по ГОСТ 29169.

Цилиндры мерные 1-25-1 и 1-100-1 по ГОСТ 1770.

Колбы конические Кн-1-500-29/32 ТХС и Кн-1-1000-29/32 ТХС по ГОСТ 25336.

Колбы круглодонные К-1-250-29/32 по ГОСТ 25336.

Колбы грушевидные ГР-25-14/23 по ГОСТ 25336.

Колба с тубусом 1-1000 по ГОСТ 25336.

Холодильники ХШ-1-400-29/32 и ХШ-1-200-14/23 по ГОСТ 25336.

Стаканы химические В-1-50 ХС, В-1-250 ТХС, В-1-500 ТСХ и В-1-1000 ТХС по ГОСТ 25336.

Палочки стеклянные.

Виалы с завинчивающейся крышкой вместимостью 5 .

Эксикатор стеклянный по ГОСТ 25336.

Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.

Спирт этиловый по ГОСТ 18300.

Спирт изопропиловый (2-пропанол) абсолютированный по ГОСТ 9805.

Спирт метиловый по ГОСТ 6995, х.ч.

Толуол по ГОСТ 5789, х.ч.

Кальций молочно-кислый (лактат кальция) 5-водный массовой долей основного вещества не менее 99%.

Натрия бета-оксибутират (натриевая соль DL-3-оксимасляной кислоты) массовой долей основного вещества не менее 98%.

Ацетофенон (метилфенилкетон) массовой долей основного вещества не менее 99%.

Ацетил хлористый по ГОСТ 5829, ч.д.а.

Ацетон по ГОСТ 2603, х.ч.

Эфир диэтиловый (этиловый) безводный, содержащий менее 0,05% этилового спирта, о.с.ч.

Кислота серная по ГОСТ 4204, ч.

Натрия гидроокись по ГОСТ 4328, ч. или х.ч. или стандарт-титр водного раствора гидроокиси натрия молярной концентрацией 0,1 .

Натрий сернокислый по ГОСТ 4166, х.ч.

Аммоний сернокислый по ГОСТ 3769, х.ч.

Кислота фосфорно-вольфрамовая водная, х.ч.

Индикатор фенолфталеин, спиртовый раствор по ГОСТ 4919.1.

Бумага лакмусовая индикаторная.

Воздух сжатый марки А или воздушный компрессор, обеспечивающий необходимое давление и чистоту воздуха согласно инструкции по эксплуатации хроматографа.

Газ азот сжатый, о.с.ч., по ГОСТ 9293 или генератор азота, обеспечивающий необходимое давление и чистоту азота согласно инструкции по эксплуатации хроматографа.

Газ водород сжатый марки А по ГОСТ 3022 или генератор водорода, обеспечивающий необходимое давление и чистоту водорода согласно инструкции по эксплуатации хроматографа.

Бумага фильтровальная диаметром 24 см быстрофильтрующая по ГОСТ 12026.

Фольга алюминиевая гладкая без покрытий по ГОСТ 745.

Допускается применение других средств измерений с метрологическими характеристиками и оборудования с техническими характеристиками не хуже, а также реактивов по качеству не ниже указанных в Б.4.

Б.5 Подготовка к проведению измерений

Б.5.1 Приготовление насыщенного раствора сернокислого аммония

В стакане вместимостью 250  растворяют 75 г сернокислого аммония в 100  подогретой до 40°С - 50°С дистиллированной воды и доводят температуру раствора до комнатной температуры.

Срок хранения раствора - не более 8 мес.

Б.5.2 Приготовление разбавленной (1:1) серной кислоты

Равные объемы концентрированной серной кислоты и дистиллированной воды смешивают в термостойкой посуде, осторожно вливая кислоту в воду и перемешивая, и охлаждают до комнатной температуры.

Срок хранения раствора - не более 12 мес.

Б.5.3 Приготовление раствора серной кислоты молярной концентрацией 0,5

В термостойкой посуде, содержащей 200  дистиллированной воды, осторожно растворяют 27  концентрированной серной кислоты, отмеренной с помощью мерного цилиндра, перемешивают, охлаждают до комнатной температуры, переносят в мерную колбу вместимостью 1 и доводят объем дистиллированной водой до 1000 .

Срок хранения раствора - не более 9 мес.

Б.5.4 Приготовление раствора серной кислоты молярной концентрацией 9

В термостойкой посуде, содержащей 100  дистиллированной воды, осторожно растворяют 80  концентрированной серной кислоты, отмеренной с помощью мерного цилиндра, перемешивают и охлаждают до комнатной температуры.

Срок хранения раствора - не более 9 мес.

Б.5.5 Приготовление раствора гидроокиси натрия молярной концентрацией 0,05

В стаканчике взвешивают (0,2000,001) г гидроокиси натрия, растворяют в дистиллированной воде, количественно переносят в мерную колбу вместимостью 100  и доводят объем дистиллированной водой до метки.

Срок хранения раствора в плотно укупоренной полиэтиленовой емкости - не более 3 мес.

Б.5.6 Приготовление раствора фосфорно-вольфрамовой кислоты массовой концентрацией 200

К 200 г фосфорно-вольфрамовой кислоты, помещенной в стакан вместимостью 1000 , добавляют 600  дистиллированной воды, перемешивают стеклянной палочкой до полного растворения (при необходимости подогревают смесь), переносят в мерную колбу вместимостью 1000  и доводят объем до метки дистиллированной водой.

Срок хранения раствора - не более 6 мес.

Б.5.7 Приготовление раствора гидроокиси натрия молярной концентрацией 0,1

Раствор готовят по ГОСТ 25794.1 или из стандарт-титра согласно прилагаемой инструкции. Срок хранения раствора в плотно укупоренной полиэтиленовой емкости - не более 3 мес.

Б.5.8 Приготовление раствора гидрохлорида (HCI) в изопропиловом спирте (реагент для этерификации кислот) массовой долей 11,2%

В высокую пробирку вносят 5  абсолютированного изопропилового спирта, осторожно по каплям, стараясь не попасть на стенки пробирки, добавляют 0,5  хлористого ацетила, закрывают пробкой и перемешивают.

Реагент готовят непосредственно перед проведением этерификации кислот.

Б.5.9 Приготовление стандартного раствора бета-оксимасляной кислоты массовой концентрацией 0,25

В мерной колбе вместимостью 100  взвешивают 121,0 мг натриевой соли бета-оксимасляной кислоты с записью результата взвешивания в миллиграммах до одного десятичного знака, растворяют в дистиллированной воде, доводят объем до метки дистиллированной водой и перемешивают. С помощью пипетки 25  полученного раствора бета-оксибутирата натрия помещают в другую мерную колбу вместимостью 100  и доводят объем дистиллированной водой до метки. Полученный раствор бета-оксибутирата натрия эквивалентен раствору бета-оксимасляной кислоты массовой концентрацией 0,25 .

Срок хранения раствора в холодильнике - не более 14 дней.

Б.5.10 Приготовление стандартного раствора ацетофенона массовой концентрацией 4

В мерной колбе вместимостью 100  взвешивают 400 мг ацетофенона с записью результата взвешивания в миллиграммах до одного десятичного знака, растворяют в изопропиловом спирте и доводят объем до метки изопропиловым спиртом.

Срок хранения раствора при комнатной температуре - не более 30 дней.

Перед использованием (не реже одного раза в день) 10  стандартного раствора ацетофенона помещают в делительную воронку вместимостью 250 , добавляют 20  толуола, 40  насыщенного раствора сернокислого аммония, закрывают, встряхивают в течение примерно 1 мин и оставляют для разделения слоев. Нижний водный слой сливают и отбрасывают. Верхний слой переносят в колбу со стеклянной пробкой и добавляют 5 г сернокислого натрия.

Б.5.11 Получение изопропилового эфира бета-оксимасляной кислоты

В четыре грушевидные колбы вместимостью 50  вносят 1, 5, 10 и 15  стандартного раствора бета-оксибутирата натрия (Б.5.9) (эквивалентное содержание бета-оксимасляной кислоты в указанных объемах составляет соответственно 0,25; 1; 2,5; и 3,75 мг). Содержимое колб высушивают досуха при температуре 50°С с помощью ротационного испарителя.

В каждую колбу с высушенным остатком добавляют 2  реагента по Б.5.8, подсоединяют холодильники, устанавливают колбы в предварительно нагретый до температуры (601)°С жидкостной термостат и выдерживают при этой температуре в течение (705) мин. Вынимают из термостата и охлаждают до комнатной температуры. В каждую колбу добавляют 4  насыщенного раствора сернокислого аммония, 1  стандартного раствора ацетофенона, приготовленного по Б.5.10 (внутренний стандарт), 2  толуола и перемешивают содержимое вращательным движением колбы.

Содержимое колб переносят в делительные воронки вместимостью 50 , закрывают, встряхивают в течение 1 мин и выдерживают до разделения слоев. Нижний водный слой сливают и отбрасывают. Верхний слой переносят в виалы вместимостью 5  и добавляют примерно 3 г сернокислого натрия. Виалы покрывают алюминиевой фольгой, закрывают крышкой с отверстием и встряхивают один - два раза. Содержимое виал используют для хроматографирования.

Срок хранения раствора в холодильнике - не более 48 ч.

Б.5.12 Подготовка хроматографа

Подготовку хроматографа проводят в соответствии с инструкцией по эксплуатации. Рекомендуются следующие режимы хроматографа:

температура испарителя - 230°С;

деление потока - 1:30;

расход газа-носителя (азот) - 1 ;

объем вводимой пробы в хроматограф - 1 ;

программирование температуры колонки: нагрев от 50°С до 130°С со скоростью 8°С/мин; нагрев от 130°С до 200°С со скоростью 3°С/мин.

Температуру детектора, расход воздуха и водорода устанавливают в соответствии с инструкцией по эксплуатации хроматографа. Хроматографирование градуировочных смесей и пробы проводят при одинаковой настройке хроматографа.

Б.5.13 Градуировка хроматографа

Шприцом отбирают из виалы раствор изопропилового эфира бета-оксимасляной кислоты (см. 7.11), протыкая иглой алюминиевую фольгу, и вводят в испаритель хроматографа (1,00,1) отобранного раствора. Регистрацию хроматограммы проводят два раза для каждой из указанных в Б.5.11 градуировочных смесей. Измеряют площади пиков изопропилового эфира бета-оксимасляной кислот и ацетофенона (внутренний стандарт). Вычисляют отношение К площади пика эфира кислоты к площади пика внутреннего стандарта и строят график зависимости величины К от массы М бета-оксимасляной кислоты, мг, использованной для получения изопропилового эфира (Б.5.11).

Б.5.14 Приготовление пробы

Отбор и подготовку проб к анализу проводят по ГОСТ 31720.

Б.5.14.1 Приготовление водной вытяжки из жидкого или размороженного яичного продукта

В предварительно взвешенной сухой конической колбе вместимостью 1 взвешивают 200 г пробы с записью результата взвешивания в граммах до второго десятичного знака, добавляют 500  дистиллированной воды и хорошо перемешивают, избегая сильного встряхивания. Затем добавляют 75  раствора серной кислоты молярной концентрацией 0,5 , хорошо перемешивают и добавляют 125  фосфорно-вольфрамовой кислоты массовой концентрацией 200 . Массу содержимого колбы доводят до 1000 г добавлением дистиллированной воды, встряхивают в течение 1 мин и фильтруют в предварительно взвешенный сухой стакан вместимостью 1 через складчатый фильтр диаметром 24 см из быстрофильтрующей фильтровальной бумаги до получения примерно 500  фильтрата, заменяя фильтр на новый после получения половины необходимого объема фильтрата. Стакан с фильтратом взвешивают и вычисляют массу фильтрата с записью результата в граммах до второго десятичного знака. В процессе фильтрования воронку и стакан покрывают алюминиевой фольгой для уменьшения испарения воды.

Фильтрат в стакане выпаривают сначала на электроплитке до объема примерно 100 , затем на водяной бане до объема примерно 25 .

Если в наличии имеется менее 200 г пробы, то допускается взять навеску массой 100 г, к которой добавляют половины из указанных выше объемов растворов и реактивов, и доводят массу содержимого колбы водой до 500 г. В этом случае полученный раствор пробы вместе с осадком фильтруют на воронке Бюхнера с разряжением, собирая как можно больше фильтрата. Весь полученный фильтрат взвешивают () и используют для выпаривания.

Б.5.14.2 Приготовление водной вытяжки из сухих яичных продуктов

В стакане вместимостью 500  взвешивают 50 г пробы с записью результата взвешивания в граммах до второго десятичного знака, добавляют дистиллированную воду и, перемешивая толстой стеклянной палочкой, превращают в однородную пасту. Затем содержимое стакана переносят в предварительно взвешенную сухую коническую колбу вместимостью 1 , смывая остатки пробы со стенок стакана и палочки дистиллированной водой. Массу содержимого конической колбы доводят до 700 г добавлением дистиллированной воды, добавляют 50  раствора серной кислоты молярной концентрацией 0,05 , перемешивают, добавляют 25  раствора фосфорно-вольфрамовой кислоты массовой концентрацией 200 и далее поступают, как указано в Б.5.14.1.

Б.5.15 Подготовка аппарата для непрерывной экстракции диэтиловым эфиром

Б.5.15.1 Аппарат собирают в соответствии с рисунком 1 (размеры пробирки и трубки приведены в приложении А). Принцип действия аппарата (см. рисунок 1): 40  водной вытяжки из пробы (по Б.5.14.1 или Б.5.14.2) помещают в пробирку 1 с боковым отводом (экстрактор), в пробирку вставляют трубку 2, верхняя часть которой имеет расширение, а нижняя - выемки для прохождения жидкости. По боковому отводу 3 пары диэтилового эфира из подогреваемой экстракционной колбы 5 поступают в холодильник 4. Сконденсированный жидкий эфир из холодильника через трубку 2, водную вытяжку из пробы 9 и боковой отвод 3 возвращается в экстракционную колбу 5. Этот процесс прохождения эфира через водный раствор пробы повторяется непрерывно, а экстрагированные органические кислоты накапливаются в экстракционной колбе 5. В процессе экстракции весь эфир должен возвращаться в экстракционную колбу, поэтому необходимо использовать как можно более эффективный холодильник 4 и низкую температуру охлаждающей воды, а между пробиркой и колбонагревателем желательно установить теплоизолирующий экран 7. Продолжительность экстракции может быть рассчитана исходя из того, что для полной экстракции бета-оксимасляной кислоты через 40  их водного раствора необходимо пропустить не менее 7500  диэтилового эфира (пример расчета приведен ниже).

Пример расчета продолжительности полной экстракции бета-оксимасляной кислоты диэтиловым эфиром с помощью аппарата для экстракции

Время Т, необходимое для полной экстракции кислот, рассчитывают по формуле

,

(Б.1)

где 7500 - объем диэтилового эфира, необходимого для полной экстракции анализируемых кислот, ;

у - время, необходимое для прохождения объема х из экстракционной колбы и заполнения пробирки, мин;

х - объем эфира, необходимый для заполнения пробирки экстрактора до переливания через боковой отвод, .

Для определения х в пробирку аппарата наливают 50  дистиллированной воды и 0,5  разбавленной (1:1) серной кислоты. Удерживая пробирку с отводом вертикально, вливают в нее через вставленную трубку из мерного цилиндра диэтиловый эфир, пока он не начнет переливаться через боковой отвод. Разница в начальном и конечном уровнях эфира в цилиндре равна объему х.

Определение времени у проводят в обычных условиях в начале каждой экстракции. С помощью секундомера отмечают время от падения первой капли эфира из холодильника до первой капли возвращаемого в экстракционную колбу эфира.

Рассчитанная по этой методике продолжительность экстракции будет соблюдаться практически, если скорость кипения и конденсации будут поддерживаться постоянными в течение экстрагирования.

Б.5.15.2 Определение продолжительности полного экстрагирования по молочной кислоте

В экстрактор помещают (3421) мг лактата кальция 5-водного (эквивалент 200 мг молочной кислоты), 0,5  раствора серной кислоты молярной концентрацией 9 , 15 г сернокислого аммония и 40  дистиллированной воды и экстрагируют полученную смесь диэтиловым эфиром до тех пор, пока не будет экстрагировано не менее 98% молочной кислоты (примерно 3 - 5 ч).

Для определения количества экстрагированной молочной кислоты в экстракционную колбу добавляют 20  дистиллированной воды и выпаривают диэтиловый эфир на водяной бане (необходимо следить, чтобы колба не оставалась на водяной бане после того, как весь эфир выпарился). Охлаждают до комнатной температуры, добавляют несколько капель фенолфталеина и титруют из бюретки раствором гидроокиси натрия массовой концентрацией 0,1 (Б.5.7).

Массу экстрагированной молочной кислоты , мг, рассчитывают по формуле

,

(Б.2)

где 90,08 - молекулярная масса молочной кислоты, г/моль;

С - молярная концентрация раствора NaOH, ;

V - объем раствора NaOH молярной концентрацией 0,1 , израсходованный на титрование, .

Б.5.16 Экстракция диэтиловым эфиром бета-оксимасляной кислоты из водной вытяжки пробы и получение ее изопропилового эфира

В сухую экстрагирующую пробирку 1 (см. рисунок 1), содержащую 15 г сернокислого аммония, переносят из стакана упаренную аликвоту водной вытяжки пробы (по Б.5.14), смывая остатки дистиллированной водой и добавляя ее в пробирку до получения объема смеси в пробирке 40  (на пробирке предварительно делают отметку на объем 40 ). Добавляют 0,5  разбавленной (1:1) серной кислоты и перемешивают путем поднятия и опускания вставленной в пробирку трубки. Стакан промывают примерно 50  диэтилового эфира и вливают его в экстрактор через вставленную трубку. Подсоединяют к пробирке холодильник 4 (см. рисунок 1), включают как можно больший поток охлаждающей воды, подсоединяют экстракционную колбу 5 (см. рисунок 1), содержащую 150  диэтилового эфира, и медленно опускают на нагреватель (электроплитка с асбестовым покрытием или колбонагреватель), не допуская перегрева эфира. Между экстрактором и нагревателем помещают лист термостойкого теплоизолирующего материала 7 (см. рисунок 1) и проводят экстракцию в течение времени, необходимого для экстрагирования всех трех кислот (при достаточно быстром кипении эфира, низкой температуре охлаждающей воды и постоянном потоке возвращаемого в колбу эфира полная экстракция может быть проведена за 3 ч).

После окончания экстракции диэтиловый эфир выпаривают из экстракционной колбы при температуре 30°С с помощью ротационного испарителя до объема примерно 1  (если экстракция эфиром заканчивается в конце дня, то эфир не выпаривают, а колбу с эфирным экстрактом оставляют на ночь присоединенной к экстрактору).

Для получения изопропиловых эфиров кислот в колбу с упаренным экстрактом добавляют 2  реагента и далее поступают согласно Б.5.11. Получение изопропиловых эфиров проводят как можно быстрее (не более чем через 2 мин) после выпаривания эфира.

Б.6 Проведение измерений

Шприцем отбирают из виалы 1  раствора изопропиловых эфиров кислот, экстрагированных из пробы (по Б.5.16), протыкая иглой алюминиевую фольгу, и вводят в испаритель хроматографа. Регистрацию хроматограммы проводят два раза. Измеряют площади хроматографических пиков изопропиловых эфиров молочной, янтарной и бета-оксимасляной кислот и внутреннего стандарта (ацетофенона) и рассчитывают отношения площадей пиков кислот к площади пика внутреннего стандарта. По полученному значению из градуировочной зависимости и с учетом разбавлений определяют массу кислоты m, содержащейся в аликвоте фильтрата водной вытяжки пробы (среднее значение по результатам двух вводов раствора в хроматограф).

При необходимости использования раствора изопропилового эфира на следующий день после приготовления его хранят в холодильнике.

Б.7 Обработка результатов

Массовую долю (содержание) , (мг/кг), бета-оксимасляной кислоты в пересчете на сухое вещество рассчитывают по формуле

,

(Б.3)

где F - коэффициент разбавления раствора изопропиловых эфиров кислот;

m - масса анализируемой кислоты, определенная по градуировочной зависимости по 8 с помощью измеренного отношения высот пиков изопропилового эфира анализируемой кислоты и внутреннего стандарта, мг;

- масса смеси пробы с водой и реактивами (по Б.5.14.1 или Б.5.14.2), г;

- масса отобранной для анализа аликвоты водной отфильтрованной вытяжки пробы (по Б.5.14.1 или Б.5.14.2), г;

- масса пробы, взятая для анализа, г;

Р - массовая доля сухих веществ в пробе, %, измеренная по ГОСТ 31469.

За окончательный результат измерения принимают среднеарифметическое значение результатов анализов, выполненных в условиях повторяемости для двух идентичных проб, если выполняется условие приемлемости

,

(Б.4)

где , - результаты определений массовой доли анализируемой органической кислоты для двух идентичных проб, (мг/кг);

- относительный предел повторяемости при Р = 0,95, % (см. таблицу 1).

Расхождение между результатами двух независимых определений, полученных при использовании одного и того же метода, на одной и той же пробе, в разных лабораториях, разными операторами, с использованием различного оборудования, должно удовлетворять следующему условию приемлемости

,

(Б.5)

где , - среднеарифметические значения результатов определений массовой доли

анализируемой органической кислоты, полученных в двух разных лабораториях (по два параллельных определения в каждой лаборатории), (мг/кг);

- критическая разность при Р = 0,95 и , % (см. таблицу 1).

Б.8 Оформление результатов

Результат измерений представляют в виде:

,

(Б.6)

где - среднеарифметическое значение результатов измерений содержания бета-оксимасляной кислоты для двух идентичных проб, признанных приемлемыми по формуле (3), (мг/кг);

- границы абсолютной погрешности при Р = 0,95, (мг/кг).

Границы абсолютной погрешности , (мг/кг), рассчитывают по формуле

,

(Б.7)

где - границы относительной погрешности при Р = 0,95, % (таблица 1).

Значение вычисляют с округлением до двух значащих цифр. Среднеарифметическое значение округляют до цифры того же разряда, что и последняя значащая цифра границы абсолютной погрешности .

Б.9 Требования безопасности

При подготовке и проведении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007 и требования пожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004.

Помещение, в котором проводятся измерения, должно быть снабжено приточно-вытяжной вентиляцией. Работу необходимо проводить в вытяжном шкафу. Особые меры предосторожности следует принимать при работе с диэтиловым эфиром, не допуская накопление его паров в помещении.

При работе с электроприборами необходимо соблюдать требования безопасности по ГОСТ 12.1.019.

При работе с сжатыми газами необходимо соблюдать правила работы с устройствами, работающими под давлением.

Ацетилхлорид вызывает раздражение кожи и слизистых оболочек, поражает дыхательные пути, поэтому работу с ацетилхлоридом следует проводить только в вытяжном шкафу с применением индивидуальных средств защиты.