Приложение 4. Ускоренный метод определения нитратов в сухих растениях и кормах

Приложение 4

Ускоренный метод определения нитратов в сухих растениях и кормах*

1. Сущность метода

Метод основан на извлечении нитратов из сухих растений и кормов 0,5% раствором алюмокалиевых квасцов и измерении активности нитрат-ионов при использовании электродной системы универсального иономера "ЭВ-74" с конселективным нитратным электродом. Значение (активность иона нитрата) в контролируемых образцах растений и кормов определяют по измерению ЭДС электродной системы с помощью преобразователя иономера, шкалу которого предварительно градуируют в единицах .

2. Оборудование, материалы и реактивы

Иономер типа "ЭВ-74"

Ионоселективный нитратный электрод типа "ЭМ--0,1"

Электрод сравнения - хлорсеребряный насыщенный типа "ЭВЛ-IM"

Весы технические с погрешностью взвешивания до 0,01 г

Мерный цилиндр вместимостью 100 мл

Стеклянные или полиэтиленовые банки с крышками вместимостью 200 мл

Измельчитель проб растений типа "МПР-2"

Мельница для размола сухих проб растений типа "МРП-2"

Калий азотнокислый х.ч. ГОСТ 4217-77

Алюмокалиевые квасцы ч.д.а. ГОСТ 4329-78

Вода дистиллированная ГОСТ 6709-72

3. Подготовка к анализу

3.1. Приготовление экстрагирующего раствора

На технических весах взвешивают 5 г алюмокалиевых квасцов, растворяют в дистиллированной воде, доводя объем раствора до 1 л. Полученная таким образом концентрация раствора равна 0,5%.

3.2. Приготовление стандартных растворов.

10, 11 г ч.д.а., высушенного при 105°С до постоянной массы, взвешивают с погрешностью до 0,01 г, растворяют в 0,5% растворе алюмокалиевых квасцов в мерной колбе вместимостью 1 л, доводя объем раствора до метки. Приготовленный раствор будет содержать 0,1 М . Из этого раствора, последовательным разбавлением экстрагирующим раствором, готовят рабочие растворы содержащие 0,01; 0,001; 0,0001 М ( соответственно равна 2, 3, 4).

3.3. Подготовка электродов к работе

В соответствии с инструкцией, придаваемой к нитратному электроду, до начала работы его заполняют водным раствором, содержащим и KCI (10, 11 г и 0,37 г KCI растворяют в мерной колбе на 1 л, доводя до метки дистиллированной водой). После этого электрод сутки выдерживают в 0,1 М растворе .

Ежедневно, перед началом работы, нитратный электрод следует помещать на 10 мин. в стаканчик с дистиллированной водой. Далее стаканчик с водой убирают, а электроды обсушивают фильтровальной бумагой.

До начала работы хлорсеребряный электрод (электрод сравнения) заполняют насыщенным раствором KCI. В дальнейшем следует поддерживать уровень раствора в электроде постоянным.

3.4. Градуировка иономера ЭВ-74

Градуировка иономера выполняется по двум стационарным растворам 0,01 и 0,0001 М ( соответственно равна 2 и 4) методом последовательных приближений. Для этого к прогретому в течение 30 минут иономеру ЭВ-74 с нажатыми клавишами "т" и -1 -4 подсоединяют оба электрода (измерительный - нитратный и хлорсеребряный), подготовленные по 3.3. и погружают их в раствор с . Затем нажимают клавишу рХ и ручной "крутизна" и "температура" раствора" устанавливают индикаторную стрелку на цифру "4" шкалы иономера. Далее погружают электроды в раствор с и ручкой "калибровка" устанавливают стрелку иономера на цифру "2". Так повторяют несколько раз, до получения допускаемой погрешности показаний при измерении используемых растворов (). Градуировку иономера следует проверять не реже 2-х раз в день.

В случае невозможности достигнуть устойчивых показаний при указанной выше градуировке иономера, измерение следует проводить в режиме "мВ" при помощи градуировочного графика, построенного в координатах: показания иономера в "мВ" в зависимости от концентрации ионов (), используя рабочие растворы (п. 3.2.).

3.5. Подготовка к анализу сухих образцов кормов

Образцы сухого растительного материала измельчают на мельнице до размера частиц не более 1 мм. Затем навеску сухого образца массой 1 г помещают в стеклянные или полиэтиленовые банки вместимостью 200 мл, приливают 100 мл экстрагирующего раствора (п. 3.1.) и встряхивают на механическом встряхивателе в течение 20 минут. При анализе подсушенного при температуре +65°С корма в величину навески вносят поправку на гигроскопическую влажность.

4. Проведение анализа

4.1. В полученной суспензии в тех же емкостях (п. 5.5.) измеряют величину .

4.2. При выполнении измерений в режиме "мВ" необходимо следить чтобы температура измеряемых и стандартных растворов была одинаковой или вносить соответствующие поправки. При использовании иономера ЭВ-74 возможно использование автоматического компенсатора температур.

5. Расчет результатов измерений

5.1. По установленной величине и вспомогательной таблице 1 или при помощи таблиц логарифмов с использованием приведенной ниже формулы находится содержание ионов в мг/кг исследуемого корма.

, где

- содержание в анализируемом сухом корме, мг/кг.

5.2. За результат анализа принимается среднее арифметическое из двух определений.

5.3. При анализе кормов на содержание нитратов приходится прибегать к различным пересчетам, так как ПДК установлены для кормовых культур и кормов натуральной влажности, а сравнение уровня накопления удобно делать в пересчете на абсолютно сухое вещество.

Расчет содержания нитратов в абсолютно сухом веществе корма при анализе воздушно сухого образца проводится по формуле:

, где

- содержание в абсолютно сухом корме, мг/кг,

- содержание в воздушно сухом корме, мг/кг,

- содержание гигроскопической влаги в корме, %.

Расчет содержания в корме натуральной влажности при анализе абсолютно сухого образца проводится по формуле:

, где

- содержание в корме натуральной влажности, мг/кг;

- содержание в абсолютно сухом корме, мг/кг;

- содержание абсолютно сухого вещества в корме, %.

Расчет содержания в корме натуральной влажности при анализе воздушно-сухого образца проводится по формуле:

, где

- содержание в корме натуральной влажности; мг/кг;

- содержание в воздушно сухом корме, мг/кг;

А - содержание абсолютно сухого вещества в корме, %;

- содержание гигроскопической влаги в корме, %.

Примечание: в промежутках между измерениями нитратный электрод хранится в растворе 0,0001 М , а электрод сравнения - в дистиллированной воде.

Нитратный электрод находится в нерабочем состоянии, если при измерении стандартных растворов разность показаний между двумя растворами, отличающимися на единицу , меньше 50.

Методика разработана в лаборатории токсикологии кормов Всесоюзного ордена Трудового Красного Знамени научно-исследовательского института кормов им. В.Р. Вильямса (Ю.И. Кулебякин, В.А. Разумов).

Таблица 1

Содержание нитратов в сухом корме, мг/кг

2,16	43289,9	2,51	19337,0	2,86	8638,5
2,17	42306,5	2,52	18896,4	2,87	8439,2
2,18	41345,2	2.53	18466,7	2,88	8248,7
2,19	40401,6	2,54	18047,8	2,89	8062,6
2,20	39484,6	2,55	17635,8	2,90	7876,5
2,21	33585,3	2,56	17232,7	2,91	7699,3
2,22	37703,7	2,57	16842,9	2,92	7522,1
2,23	36846,7	2,58	16457,5	2,93	7353,8
2,24	36007,0	2,59	10085,3	2,94	7185,5
2,25	35187,5	2,60	15717,6	2,95	7021,3
2,26	34385,7	2,61	15358,8	2,96	6382,1
2,27	33606,0	2,62	16008,2	2,97	0707,0
2,28	32839,0	2,63	14667,7	2,98	6552,0
2,29	32090,9	2,64	14335,3	2,99	6401,4
2,30	31360,0	2,65	14007,7	3,00	6259,6
2,31	30646,7	2,66	13688,7	3,01	6113,4
2,32	30646,7	2,67	13378,8	3,02	5976,1
2,33	29269,0	2,68	13072,9	3,03	5638,7
2,34	28004,5	2,69	12776,1	3,04	5705,8
2,35	27953,3	2,70	12483,7	3,05	5577,4
2,36	27315,4	2,71	12200,2	3,06	5449,0
2,37	26695,2	2,72	11925,6	3,07	5324,9
2,38	20083,8	2,73	11650,9	3,08	3205,3
2,39	25490,2	2,74	11385,1	3,09	5083,6
2,40	24910,0	2,75	11126,2	3,10	4970,5
2,41	24342,9	2,76	10875,7	3,11	4855,3
2,42	23789,1	2,77	10627,6	3,12	4749,0
2,43	23248,6	2,78	10389,9	3,13	4638,2
2,44	22721,5	2,79	20149,1	3,14	4531,9
2,45	22203,2	2,80	9928,8	3,15	4430,0
2,46	21698,1	2,81	9692,8	3,16	4329,0
2,47	21202,0	2,82	9471,3	3,17	4230,7
2,48	20719,1	2,83	9254,3	3,18	4134,5
2,49	20249,5	2,84	9046,1	З,19	4040,2
2,50	19788,8	2,85	8837,9	3,20	3948,5

3,21	3858,5	3,56	1723,3	3,91	769,9	4,26	343,9
3,22	3770,4	3,57	1684,3	3,92	752,2	4,27	336,1
3,23	3084,9	3,58	1645,8	3,93	735,4	4,28	328,4
3,24	3600,7	3,59	1608,5	3,94	718,6	4,29	320,9
3,25	3518,8	3,60	1571,8	3,95	702,2	4,30	313,6
3,26	3438,8	3,61	1535,9	3,96	686,2	4,31	306,5
3,27	3360,6	3,62	1500,9	3,97	670,7	4,32	299,5
3,28	3284,0	3,63	1466,8	3,98	655,2	4,33	292,7
3,29	3209,1	3,64	1435,6	3,99	640,1	4,34	286,1
3,30	3130,0	3,65	1400,3	4,00	626,0	4,35	279,5
3,31	3064,7	3,66	1368,9	4,01	611,3	4,36	273,2
3,32	2995,1	3,67	1337,9	4,02	397,6	4,37	267,0
3,33	2923,9	3,68	1307,3	4,03	583,9	4,38	260,8
3,34	2860,5	3,69	1277,6	4,04	570,6	4,39	254,9
3,35	2795,3	3,70	1248,3	4,05	557,7	4,40	249,1
3,36	2731,5	3,71	1220,0	4,06	544,9	4,41	243,4
3,37	2639,5	3,72	1192,0	4,07	332,5	4,42	237,9
3,38	2608,4	3,73	1165,1	4,08	520,3	4,43	232,5
3,39	2349,0	3,74	1138,5	4,09	506,6	4,44	227,2
3,40	2491,0	3,75	1112,8	4,10	497,1	4,45	222,0
3,41	2434,3	3,76	1067,6	4,11	485,5	4,46	217,0
3,42	2878,9	3,77	1062,8	4,12	474,9	4,47	212,0
3,43	2324,9	3,78	1033,4	4,13	463,8	4,48	207,2
3,44	2272,2	3,79	1014,9	4,14	453,2	4,49	202,5
3,45	2220,6	3,80	991,9	4,15	443,0	4,50	197,9
3,46	2169,8	3,81	969,3	4,16	432,9
3,47	2120,2	3,82	947,1	4,17	423,1
3,48	2071,9	3,83	925,4	4,18	413,5
3,49	2025,0	3,84	904,6	4,19	404,0
3,50	1978,9	3,85	833,8	4,20	394,9
3,51	1933,7	3,86	863,9	4,21	385,9
3,52	1889,8	3,87	843,9	4,22	377,0
3,53	1846,9	3,88	824,9	4,23	368,5
3,54	1804,8	3,89	806,3	4,24	360,1
3,55	1763,6	3,90	787,7	4,25	351,9