Приложение С (справочное). Приготовление и калибровка инокулятов

Приложение С
(справочное)

Приготовление и калибровка инокулятов

С.1 Культура эталонных штаммов

Чтобы улучшить повторяемость и воспроизводимость результатов, рекомендуется использовать третью (по крайней мере, вторую) субкультуру, выращенную на агаровой среде, полученной от культур, хранимых и приготовленных согласно [4]. При использовании Е. coli, P. aeruginosa, S. aureus субкультуры активируют в течение интервалов времени от 18 до 24 ч. При использовании С. albicans пригодна первая субкультура или вторая субкультура, выращенная в течение от 36 до 48 ч.

С.2 Приготовление клеточных суспензий

Берут 10  разбавителя и вводят в 100  стерильную колбу, содержащую 5 г стеклянных микрошариков. Переносят полные петли клеток, выращенных на агаровой среде, в разбавитель. Клетки должны быть суспендированы в разбавителе путем погружения петли в разбавитель и трения ее о стенку колбы с целью смешивания клеток. Встряхивают колбу 2 - 3 мин (используя, если возможно, механическую мешалку). Отбирают пипеткой верхнюю часть суспензии (избегая любого контакта со стеклянными микрошариками) и переносят полученную суспензию в стерильную емкость.

С.3 Калибровка суспензий

Регулируют число клеток в суспензии до значений - (с С. albicans от до ), используя разбавитель, и в соответствии сданными калибровки, полученными в лаборатории. Например, используют спектрофотометр [длиной волны (62020) нм] и одноразовую кювету толщиной 10 мм. Измеряют спектральную поглощательную способность аликвоты и, если необходимо, разбавляют раствор, чтобы довести эту способность суспензии до определенного значения. Соответствующие значения оптической плотности суспензии были получены между 0,150 и 0,460, в зависимости от штаммов.