Приложение 1. Методики морфолого-анатомического исследования голубого лотоса (Nymphea caerulea), шалфея предсказателей (Salvia divinorum) и гавайской розы (Argyreia nervosa) и

Приложение 1

Методика морфолого-анатомического исследования

Nymphaea caerulea

Голубой лотос (нильская кувшинка) - Nymphaea caerulea Sav. (син. Nymphaea nouchali Burm.fvar. caerulea (Sav.) Verde), которая относится к роду Nymphaea L, семейству Nymphaeaceae Salisb.

Распространение: данный вид естественно произрастает в Восточной Африке, описан из Египта, встречается в Таиланде и Индии.

Морфологическая характеристика: многолетнее травянистое растение, гидрофит, с хорошо развитым корневищем, листья отходят непосредственно от корневища. Листья простые, цельные, черешковые, подводные - тонкие и нежные, надводные - плавающие кожистые, темно-зеленые 25-40 см в диаметре, верхушка листовой пластинки округлая, край волнистый, цельный, основание листовой пластинки выемчатое, сердцевидное. Цветки одиночные на длинных цветоножках, крупные, до 15 см в диаметре, актиноморфные, обоеполые, с двойным околоцветником, чашечка из 4 чашелистиков, при основании несколько сросшихся. Венчик из большого количества свободных лепестков. Окраска от сине-фиолетовой на верхушке лепестка до желтой у основания лепестка. Андроцей состоит из множества тычинок. Гинецей ценокарпный. Плод - многосеменная коробочка.

"Рисунок 1. Внешний вид цветка голубого лотоса - Nymphaea caerulea Sav"

Рисунок 1. Внешний вид цветка голубого лотоса - Nymphaea caerulea Sav.

Для доказательства присутствия в составе курительных смесей фрагментов цветка голубого лотоса необходимо провести морфолого-анатомическое исследование растительных компонентов курительных смесей.

Материалы: Микроскоп БИОМЕД-2 с объективами х 4/0,1; х 10/0,25; х 40/0,65. Фотоаппарат цифровой Samsung NV4., предметные стекла, покровные стекла, лезвия, пинцеты, гистохимические реактивы: раствор флороглюцина 0,1% спиртовый и кислота серная 50%, система: глицерин: вода: спирт этиловый (1:1:1).

Методика анализа:

Поместить измельченные фрагменты курительного сбора в систему глицерин: вода: спирт этиловый в соотношении 1:1:1 для размачивания.

Провести изучение фрагментов сбора при помощи стандартных морфологических, микроскопических и гистохимических методик [1, 2].

Отделить от общей части фрагменты лепестков белого или голубого цвета. Приготовить временный микропрепарат поперечного среза лепестка.

"Рисунок 2. Внешний вид фрагмента лепестка цветка Nymphaea caerulea"

Рисунок 2. Внешний вид фрагмента лепестка цветка Nymphaea caerulea
(обозначен стрелкой)

Обнаружить на поперечном срезе лепестка хорошо различимые клетки эпидермы, мезофилл, мелкие проводящие пучки.

Обратить внимание на то, что верхняя эпидерма состоит из крупных прямоугольных клеток, плотно прилегающих друг к другу, снаружи покрытых толстым слоем кутикулы, а нижняя эпидерма состоит из вытянутых клеток, видоизмененных в сосочковидные волоски - гидропоты, основная функция которых состоит в поглощении ионов из воды.

Обратить внимание на то, что мезофилл представлен аэренхимой, между клетками которой расположены крупные межклетники.

"Рисунок 3. Поперечный срез лепестка цветка Nymphaea caerulea"

Рисунок 3. Поперечный срез лепестка цветка Nymphaea caerulea
А - общий вид, Б - сосочковидные выросты нижней эпидермы, В - клетки аэренхимы в мезофилле лепестка

Приготовить временный микропрепарат эпидермы лепестка. Обратить внимание на форму клеток эпидермы лепестка, которая представлена мелкими клетками прямоугольной или многогранной формы с прямыми антиклинальными стенками, снаружи покрытыми густым слоем кутикулы.

"Рисунок 4. Эпидерма верхняя лепестка Nymphaea caerulea"

Рисунок 4. Эпидерма верхняя лепестка Nymphaea caerulea

На основании проведенных исследований сделать следующее заключение о том, что при изучении эпидермы лепестка и поперечного среза лепестка выделены следующие диагностические признаки:

- наличие аэренхимы в мезофилле лепестка, свойственной растениям - гидрофитам, к которым относится Nymphaea caerulea Sav. семейства Nymphaeaceae Salisb.;

- многогранная форма клеток верхней эпидермы лепестка; клетки снаружи покрыты толстым слоем кутикулы;

- нижняя эпидерма состоит из вытянутых клеток, видоизмененных в сосочковидные волоски - гидропоты, основная функция которых состоит в поглощении ионов из воды.

Методика морфолого-анатомического исследования

Salvia divinorum

Следующим популярным растением среди курительных смесей является шалфей предсказателей (Salvia divinorum), который относится к роду Salvia семейства Lamiaceae. В природе Salvia divinorum встречается в достаточно большом ареале в Мексике (штат Оахака). Это многолетнее травянистое растение, с достаточно крупным корневищем. Побеги ветвистые, высотой до 1,5 м, по положению в пространстве приподнимающиеся, на поперечном сечении имеют четырехгранную форму. Листорасположение супротивное. Листья простые, цельные, форма листовой пластинки овальная, до 20 см длиной, край зубчатый, верхушка острая. Листья, как и стебли опушенные. Соцветия цимоидные, тирсы. Цветки зигоморфные, с двойным околоцветником, чашечка состоит из 5 сросшихся чашелистиков бледно-фиолетового цвета, венчик двугубый. Окраска лепестков белая, лепестки значительно опушены. Андроцей состоит из 2 тычинок, гинецей ценокарпный, плод - четырехгнездный ценобий.

Материалы: Микроскоп БИОМЕД-2 с объективами х4/0,1; х10/0,25; х 40/0,65. Фотоаппарат цифровой Samsung NV4, предметные стекла, покровные стекла, лезвия, пинцеты, гистохимические реактивы: раствор флороглюцина 0,1% спиртовый и кислота серная 50%, глицерин, вода, спирт этиловый.

Методика анализа:

Поместить измельченные фрагменты курительного сбора в систему глицерин: вода: спирт этиловый в соотношении 1:1:1 для размачивания.

Провести изучение фрагментов сбора при помощи стандартных морфологических, микроскопических и гистохимических методик.

Цветок отделить от общей части и провести его морфологическое описание.

Учитывать при описании морфологического строения цветков следующие морфологические характеристики: тип симметрии цветков, тип околоцветника, особенности его строения, строение андроцея и гинецея, тип завязи. Цветок шалфея зигоморфный, чашечка сростнолистная, 5-членная, венчик двугубый, окраска лепестков белая либо бледно-желтая, андроцей состоит из 2 тычинок, гинецей ценокарпный, завязь верхняя, четырехлопастная.

"Рисунок 5. Внешний вид цветка Sdlvia divinorum в цветущем виде"

"Рисунок 5. Внешний вид цветка Sdlvia divinorum в размоченном виде"

Рисунок 5. Внешний вид цветка Sdlvia divinorum
А - в цветущем виде, Б - в размоченном виде (в составе образца курительной смеси)

Приготовить временный микропрепарат эпидермы чашечки и венчика.

Обратить внимание на характер опушения чашечки, образованого простыми одноклеточными волосками, реже многоклеточными, железками и небольшими железистыми трихомами с двуклеточной секретирующей головкой. Сосочковидные волоски располагаются также по краю чашелистика.

При детальной микродиагностике волосков следует обратить внимание на то, что в апикальных клетках простого многоклеточного волоска накапливается секрет буро-коричневого цвета.

"Рисунок 6. Поверхностный препарат чашечки цветка Sdlvia divinorum"

Рисунок 6. Поверхностный препарат чашечки цветка Sdlvia divinorum

Обратить внимание на то, что опушение венчика цветка представлено простыми одноклеточными сосочковидными волосками и железками, обильно расположенными по всей поверхности лепестка.

"Рисунок 7. Эпидерма лепестка венчика цветка Sdlvia divinorum"

Рисунок 7. Эпидерма лепестка венчика цветка Sdlvia divinorum

"Рисунок 8. Поверхностный препарат лепестка венчика Sdlvia divinorum"

Рисунок 8. Поверхностный препарат лепестка венчика Sdlvia divinorum

Приготовить микропрепарат поперечного среза стебля.

Провести окрашивание спиртовым раствором флороглюцина и кислоты серной 50%.

Обратить внимание на цилиндрическую форму на поперечном сечении и характер опушения стебля, образованное мелкими головчатыми и железистыми, а также крупными простыми многоклеточными волосками, апикальные клетки которых имеют булавовидную форму.

"Рисунок 9. Поперечный срез стебля Salvia divinorum"

Рисунок 9. Поперечный срез стебля Salvia divinorum

А - Общий вид, Б, Г - опушение стебля, В - фрагмент поперечного среза стебля

Обратить внимание на то, что под эпидермой располагается колленхима и многослойная хлоренхима, перициклическая зона образована склеренхимой и лигнифицированной паренхимой, проводящая система непучкового типа, первичная ксилема выражена, граничит с паренхимой сердцевины, клетки которой крупные со слабо лигнифицированными стенками.

Провести морфологическое описание листовой пластинки.

Обратить внимание на яйцевидную форму листовой пластинки, цельный край, оттянутую верхушку, перистосетчатое жилкование листа.

Приготовить микропрепарат поперечного среза листовой пластинки.

Провести окрашивание спиртовым раствором флороглюцина и кислоты серной 50%.

Обратить внимание на дорзовентральный тип строения листовой пластинки и характер опушения, образованное простыми многоклеточными волосками и двуклеточными железистыми волосками, апикальная клетка которых слегка сплюснута.

Обратить внимание на то, что проводящая система пучкового типа, представлена 3 проводящими пучками коллатерального типа, в центральной части расположен один крупный дорзальный проводящий пучок вытянутой формы, предположительно агрегатный, вентральные проводящие пучки более мелкие, расположены по бокам от центрального. Проводящие пучки имеют паренхимную одно-, двуслойную обкладку.

"Рисунок 10. Поперечный срез листовой пластинки листа Sdlvia divinorum"

Рисунок 10. Поперечный срез листовой пластинки листа Sdlvia divinorum

Сделать заключение на основании проведенных исследований о том, что данные фрагменты листьев, стеблей и цветков относятся к Salvia divinorum. К диагностическим признакам Salvia divinorum можно отнести:

- цветок зигоморфный, чашечка сростнолистная, 5-членная, венчик двугубый, окраска лепестков белая либо бледно-желтая;

- андроцей состоит из 2 тычинок, гинецей ценокарпный, завязь четырехлопастная, верхняя;

- на эпидерме чашечки, венчика, листовой пластинки и стебля обнаружены, кроме обычных для семейства Lamiaceae железистых трихом с двуклеточной головкой и железок, многоклеточные простые волоски, апикальная клетка слегка вздутой формы, накапливает секрет буро-коричневого цвета;

- непучковый тип строения проводящей системы стебля.

Методика морфолого-анатомического исследования

Argyreia nervosa

Малая гавайская древовидная роза (Argyreia nervosa (Burm. f.) Bojer.) относится к роду Argyreia Lour., к порядку Solanales Lindl., к семейству вьюнковые (Convolvulaceae A.L. Jussieu.). Argyreia nervosa естественно произрастает на территории восточной Индии и Бангладеш, культивируется во многих странах мира. Род Argyreia Lour, состоит из 90 видов, естественно произрастающих на территории Индо-Малайзии, некоторые виды произрастают в Австралии.

Морфологическая характеристика:

Многолетнее травянистое растение высотой до 1,5 м, побеги одревесневающие, ветвистые, вьющиеся вокруг опоры. Листорасположение очередное, листья простые, черешковые, длиной 8-18 см и шириной 3-10 см. Форма листовой пластинки сердцевидная. Верхушка листовой пластинки острая, основание сердцевидное, край цельный, жилкование перисто-краевое.

"Рисунок 11. Внешний вид надземных органов"

Рисунок 11. Внешний вид надземных органов

Стебли, а также нижние части листовых пластинок покрыты серебристыми волосками. Цветки одиночные, достаточно крупные. Чашечка сростнолистная, 5-членная, венчик сростнолепестный, из пяти сросшихся в трубку лепестков, 5-7 см длиной. Окраска лепестков венчика розово-фиолетовая. Плоды - вскрывающиеся коробочки, семена желто-коричневого цвета.

"Рисунок 12. Раскрытые коробочки Argyreia nervosa"

Рисунок 12. Раскрытые коробочки Argyreia nervosa

Материалы: Микроскоп БИОМЕД-2 с объективами х4/0,1; х10/0,25; х40/0,65. Фотоаппарат цифровой Samsung NV4, предметные стекла, покровные стекла, лезвия, пинцеты, гистохимические реактивы: раствор флороглюцина 0,1% спиртовый и кислота серная 50%, глицерин, вода, спирт этиловый.

Методика анализа:

Поместить измельченные фрагменты курительного сбора в систему глицерин: вода: спирт этиловый в соотношении 1:1:1 для размачивания.

Провести изучение фрагментов сбора при помощи стандартных морфологических, микроскопических и гистохимических методик [1, 2].

Приготовить микропрепарат эпидермы листа.

Обратить внимание на простые одноклеточные волоски и аномоцитный, редко диацитный тип устьичного аппарата.

Приготовить микропрепарат поперечного среза стебля.

Провести окрашивание спиртовым раствором флороглюцина и кислоты серной 50%.

Обратить внимание на наличие опушения стебля, образованного как кроющими простыми одноклеточными и двуклеточными волосками.

Обратить внимание на структуру лигнифицированных клеток коровой паренхимы и перициклических волокон, проводящую систему пучкового коллатерального типа, а также наличие либриформа в ксилеме.